Штамм рнаguм реsтis для внутривидовой дифференциации возбудителя чумы

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИА ЛИСТ ИЧЕСНРЕСПУБЛИК.Марченков др. Некоторыеактериофага оюзного симпоз летию Тбилисск 84, с. 38-40. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(21) 43331 (22) 24,. 11 (46) 15.07 (71) Росто ный научно чумный инс(72) Н,Н.Н (53) 576.8 (56) Гольд особенност М - Мат ума, посвяго НИИВС,Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике чумы,Цель изобретения . - чумной фаг Фнового 111 серологического типа, используемый для внутривидовой дифференциации микроба чумы.Фаг Фполучен в 1983 г. из штамма 2247 чумного микроба, выделенного от блох в приаральских Кара-Ку" мах Среднеазиатского пустынного очага, и может быть использован как представитель чумных фагов нового 111 серологического типа и как диагностический для внутривидовой дифференциации возбудителя чумы.Фаг Фдепонирован и хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток под номером Ф.(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике чумы. Целью изобретения является чумной фаг Фнового 111 серологического типа для внутривидовой дифференциациикроба чумы. Фаг Фобладает хорошо выраженной видовой литической специфичностью, что позволяет использовать его для дифференциации штаммов возбудителя чумы, выделенных в различных очагах. 3 табл. ТАММ РНАСНМ РЕБТЕБ ДЛЯ ВНУТРИЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ Чумной фаг Фимеет следующую морфологическую и физиологическую характеристику.Величина негативных колоний на газоне чумного вакционного штамма ЕВ, выращенном двухслойным методом на агаре Хоттингера рН 7,1 равная около 1 мм в диаметре, округлой формы, с четким, хорошо контурированным краем, с прозрачным центром и слабо выраженной полупрозрачной периферией.Фаг Фимеет головку правильной гексагональной формы и отросток, способный к сокращению. Больший разо мер головки составляет 649329 А меньоший 598+26 А. Длина отростка 1203 + +34 А его ширина 225 т 10 А. Длина соко ратившегося чехла 554+17 А, его ширин 278 Ф 14 А.(1968) фаг относится к пятой морфологической группе.Одиночный цикл развития фага Ф на клетках чумного вакционного штамма ЕВпри 28 С в бульоне ЛБ составляет 150 мин. Период нарастанияконцентрации фаговых корпускул продолжается 30 мин. Урожаи на одну клет"10ку бактерий находится в пределах 974 корпускул. Константы адсорбции0составляли; К 3,710, К, 2,2" 10К 1,9" 10Оптимальная множественность эара 1 -5г 5жения составляет 10 - 10Фаг активно репродуцируется наклетках чумного вакционного штаммаЕВв жидких питательных средах рНа7, 1-7,2 при 28 С. Заражение 1 б-часовой бульонной культуры этого штамма, имеющей концентрацию клеток и хх 10 фагом с указанной множественностью позволяет получать через 1820 члизаты с титром и 10 -и 10 БОЕ/мл, 257Полезные свойства фагов иллюстрируются следующими примерами,П р и м е р 1. Антифаговую сыноротку получают иммунизацией кроликовфагом Фпо методу Ю.Н.Марьиной(1981),Сыворотка специфически активна против гомологичного Фага и не вызываетинактивации чумных фагов 1 и 11 серотипов, В свою очередь сыворотки против чумных фагов 1 и 11 серотиповнейтрализуя гомологичные фаги, необладают активностью в отношении ФагаФ(табл. 1).Специфичность и диапазон литической активности фага Фиспытываютна 1540 штаммах, Чумной Фаг ф 111 серотипа обладает выраженной специфичностью. Фаг лизирует 421 штаммвозбудителя чумы при этом проявляетактивность лишь в отношении 1 штаммапсевдотуберкулезного микроба и 1 штамма возбудителя кишечного иерсиниоза(табл, 2).При явно выраженной видовой литической специфичности фаг Фобладает не одинаковой активностью в отношении штаммов, выделенных в различных природных очагах чумы. Из 61 штамма, вьщеленного в Ленинаканском и Зангезуро-Карабахскомочагах Закавказского Нагорья, 56(91,8 ) составляют резистентные. Из19 штаммов, изолированных в Монголии,устойчивыми являются 10 (52,6 ), а4 штамма из Тувы представляют только устойчивые формы, Штаммы иэ другихприродных очагов подвергаются лизисупочти полностью (табл, 3).Существование устойчивых к фагуФформ чумного микроба преимущественно в отдельных природных очагахэтой нндфекции создает своеобразнуюмаркировку возбудителя,ФП р и м е р 2, Препарат фагаФиспользуют для внутривидовойдифференциации возбудителя чумы следующим образом.В пробирку с 3,0-4,5 мл 0,7% агара(на любой питательной основе) расоплавленного и остуженного до 45-47 С,добавляют 0,1 мл 18-часовой бульоннойкультуры (или 1 миллиардную взвесь18-часовой агаровой) исследуемогоштамма чумного микроба и выливают на1,5 ,-ную агаровую пластинку в чашкуПетри. После застывания мягкого слоячашку немного подсушивают и на поверхность агара наносят каплю фагаФс концентрацией и 10 БОЕ/мл.Посевы инкубируют в термостате прио28 . Результаты учитывают через 1820 ч, рассматривая чашки в проходящем свете.Отсутствие лизиса на месте нанесения Фага означает,.что исследуемый штамм бактерий чумы принадлежит к возбудителю, циркулирующему в Ленинаканском и Зангезуро-Карабахском очагах Закавказского Нагорья, Монголии и Туве. Наличие лизиса на месте нанесения фага свицетельствует о принадлежности изучаемого штамма к возбудителю чумы, вьщеленному в других природных очагах этой инфекции.Ф о р м у л а и з о б,р е т е н и яШтамм Рйаащп реэСэ ТНИИВС Фдлявнутривидовой,цифференциации возбудителя чумы,518194 Та блица 1 Нейтрализующее действие кроличьих антифаговых сывороток на фаги чумного микробаНейтрализующее действие фагов Сыворотки противфагов (разведения) ФПокровский Л13 С 111 серотип 1 серотип 11 серотип0 0003- использовали коммерческую антифаговую сывороткуТаблица 2 Специфичность и диапазон действия чумного фага Фнового 111 серологического типа Иэ них Вид бактерий Количествоисследованных штаммов лизируются не лизиру- ются 21 26 266 Таблица 3 Литическая активность чумного фага фнового 111серологического типа в отношении штаммов микроба чумы,выделенных в различных природных очагах есто выделения штамма Количеств исследоваз них ных штаммов зируютс не лизируются абсол. кое нагорье:-Карабахский ЗакавказЭннгеэурочагЛенинака 51 91,85 1001 О 5284 1 ОО кий оча ИонголияТуваДругие пмутанты,вестного иродные очаги штаммы неиэ- происхояления 28. О 7 21 ВСКГО; 512 91 17,8 Составитель О,ЖакетовТехред М,дидык Корректор Л.Бескид едактор М.Недолуженк Заказ 1892 Тираж 480 ПодписноеВНИИПИ Государственнсго комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 изводственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгоро Гагарина, 101 3. ревалда