Способ определения аденозинтрифосфорной и 2, 3 дифосфоглицериновой кислот в крови человека

ОЮЗ СОВЕТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСКИЕСПУ БЛИК 737337 А 1 5 601 ИЗЗ/5 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТ юл. %20еронтологи 9,633,2-074(088.8) Багрянцева С,Ю., Деременного определев эритроцитах. - 7, с. 424-426.ЛЕНИЯ АДЕНОЗИН,3-ДИФОСФОГЛИВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА сится к области медиенно к области фото,9,93 ова И,Л., од однов ФГ и АТФедело, М ОПР ЕДЕ РНОЙ И КИСЛОТ ние отно гии, а им Изобретение от биологии, а именно бораторно-клиниче крови человека, и м диагностики различ которых изменяются 2,3-дифосфоглицерат цитах, носится к медфотометриче ским исследо ожет применя ных заболеванконцентраци а (2,3-ДФГ) в ицине и ким лава ниям ься для ий, приАТФ и эритроГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(21) 4460129/ (22) 14.07.88 (46) 30.05.92. (71) Институт (72) А.В.Писа (53) 616.155. 1 (56) Виноград рвиз Г.В. Мет ния 2,3- Д Лабораторно (54)СПОСОБ ТРИФОСФО ЦЕРИНОВОЙ (57) Изобрете цины и биоло Целью изобретения является упрощение способа.Способ осуществляется следующим образом,Из пальца обследуемого берут 0,1 мл крови в пробирку с 0,5 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия (пробирка М 1) и 0,1 мл крови в пробирку с 0,9 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты (пробирка %2). Пробирку М 1 ставят в термостат на 24 ч при 37 С, После инкубации добавляют в нее 0,4 мл 10%-ной трихлоруксусной кислоты, тщательно перемешивают и центрифугируют вместе с пробиркой М 2 15 мин при 3 тыс. оборотах в мин. Отбирают 0,2 мл супернатанта из прометрических лабораторно-клинических исследований крови человека, и может применяться для диагностики различных заболеваний, при которых изменяются концентрации АТФ и 2,3-дифосфоглицериновой кислот в эритроцитах, Целью изобретения является упрощение способа определения. Для этого образцы крови обрабатывают при комнатной температуре, а пробу крови перед добавлением трихлоруксусной кислоты инкубируют в физиологическом растворе в течение 24 ч при 37 С с последующим определением 2,3-дифосфоглицериновой кислоты. 1 табл. бирки В 2 в пробирку с 0,2 мл 2 н НС (пробирка М 3) и кипятят ее на водяной бане Б 7 мин с целью гидролиза АТФ до АМФ. Затем нейтрализуют содержимое пробирки М. 3 добавлением в нее 0,2 мл 2 н раствора АРАОН. Определяют неорганический фосфор в супернатанте из каждой пробирки. Для этого к 0,5 мл супернатанта из пробирок М. 2 и М 3 (к 0,25 мл супернатанта из про- Ы бирки ч. 1) добавляют 1 мл 5%-ного раство-Ы ра молибдата аммония на 5 н серной с.Д кислоте и 1 мл 1%-ного раствора аскорбиновой кислоты на 0,1 н соляной кислоте. Через 15 мин измеряют оптические плотности всех проб на фотоэлектроколориметре при длине волны 670 нм против контроля на реактивы. Концентрации фосфора во всех пробах рассчитывают по калибровочной кривой и выражают в ммолях на литр.Расчет концентраций АТФ и 2,3-ДФГ (ммол ь/л крови): АТФ = (30 Рз - 10 Р 2)/2; 2,3-ДФ Г=(20 Р 1 - 30 Рз)/2,1737337 Как видно из полученных данных, различия между средними значениями показателей, определенных по предложенному способу и по прототипу, несущественны (р 0,1). Коэффициенты корреляции между значениями показателей, определенными разными методами, составили для АТФ 0,87 (р( 0,01) и для 2,3-ДФ Г 0,81 (р0,01), что свидетельствует о хорошем совпадении результатов, полученных по предложенному способу и прототипу. 30 35 40 Составитель Н.МарковаРедактор М,Циткина Техред М,Моргентал Корректор Л.Бескид Заказ 1887 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 где.Р,Рг, Рз - концентрации фосфора в супернатанте из пробирок М 1, М 2, МЗ,. соответственно,Определив гематокрит, можно рассчитать концентрацию АТФ и 2,3 - ДФГ в эритроцитах путем деления полученных значений их концентраций в крови на величину гематокрита в системе СИ.П р и м е р. У практически здоровых людей (20 человек) определены концентрации АТФ и 2,3-ДФГ в эритроцитах по предл ожен ному способу и прототипу. Полученные данные представлены в таблице. Предложенный способ позволяет определять концентрации АТФ и 2,3-ДФГ в эритроцитах из небольшого объема крови, взятой из пальца. Способ отличается от ана логичных упрощением методики, снижением ее трудоемкости без потери точности и может быть реализован в любой клинической лаборатории для диагностики различныхх заболеваний.10 Формула изобретенияСпособ определения аденозинтрифосфорной и 2,3-дифосфоглицериновой кислот в крови человека путем прибавления к пробе крови трихлоруксусной кислоты, переме шивания, добавления к надосадочнойжидкости 2 й НС 1, инкубации в течение 7 мин на кипящей водяной бане, нейтрализации с последующим определением неорганического фосфора для расчета концентраций 20 аденозинтрифосфорной и 2,3-дифосфоглицериновой кислот, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, вторую пробу крови инкубируют в термостате в течение 24 ч при 37 С для дефосфорилирова ния органических фосфатов под действиемсобственных ферментов эритроцитов,