Способ определения гемолитической активности bacillus аnтнrасis

СОЮЗ СОНЕТСНИКСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 1) С 12 С 1/04 ЕТЕНИ К 37овательский про Кавказа и Закав Н.П.Буравце8) ика учета реакфотоэлектрооклады Иркутско бняк Л,И. СиУрожай, 1876,Я ГЕМОЛИТИЧЕСПБ АМТНВАСЯ аливают на физГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СО:Р Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ:КОИ АКТИВНОСТИ ВАС 1 Ы зобретение относится к меди кои микробиологии и может быть использовано при бактериологической диагностике сибирской язвы и исследовательских целях.Цель изобретения - повышение точности способа.СпосоЬ осуществляют следующим образом,В стерильные чашки Петри рарасплавленный 1-1,5%-ный агаррастворе по 20 мл. После застываниянаслаивают 5 мл 0,6-0,8%-ного агара,содержащего 6-8% отмытых эритроцитовбарана. После застывания верхнегослоя пробойником делают лунки, днокоторых запаивают 1-2 каплями расплав.ленного 1%-ного агара, Оптимальноеколичество лунок на одной агаровойпластине б(57) Изобретение относится к медицинской микроЬиологии и может быть использовано при бактериологической диагнос 1 тике сиЬирской язвы. Цель изобретения - повышение точности способа. Влунку двуслойной питательной среды,содержащей агар и физиологическийргствор (нижний слой 1-1,5 мас.% агара, верхний 0,6-0,8 мас.% с 6-8% отмытых эритроцитов барана), засеваютисследуемую бульонную культуру. Посевы инкубируют при 37 С в течение48 ч и выявляют наличие зон гемолизаэритроцитов вокруг колоний микроорганизмов. При наличии зон гемолиза культуру относят к гемолитически активной. 3 табл,Влунки вносят по 0,1 мл 20-24-часовой бульонной культуры. Бульон засевают из расчета 1-5 млн. спор на 1 мл среды. После внесения бульонной культуры в лунки чашки Петри помещают в т рмостат при 37 СУчет результатов производят через 24 и 48 ч. При помощи миллиметровой линейки измеряют от края лунки ширину зоны гемолиэа, Учитывают ширину зоны полной прозрачности, так как она соответствует зоне лизиса эритроцитов,П р и м е р 1. В чашку Петри нали-. вают 20 мл 1%-ного расплавленного агара на физрастворе. После застывания вторым слоем наливают 5 мл 0,6%-ного расплавленного агара на физрастворе, содержащего 6% отмытых эритроцитов барана. После застывания верхнего слоя пробойником делают лунки, дно кото"рых запаивают 1-2 каплями расплавленного 1%-ного агара. В лунки вносят по 0,1 бульонных культур различных штаммов Вас 11 цз апгйгасгз (посевная доза 1 млн. спор на 1 мл среды). Чашки Петри помещают в термостат прио,37 С. Через 48 ч ширину зоны лизиса эритроцитов вокруг лунок с каждым штаммом измеряют при помощи миллимет ровой линейки. Результаты измерений зон гемолиза представлены в табл. 1. Таблица 1 Штамм Ширина зоны лизиса, мм 07 ф 507,04;59,0 СТИИхтиман1(СО)615/3881Т(СО),20 Т а б л-и:.ц а 245 Штамм. О 50 8 0 6 4 9 Ихтиман 1(СО)- 615/38811(СО) П р им е р 3, В чашку Петри наливают ".0 мл 1,5%-ного расплавленного 25П р и м е р 2. В чашку Петри наливают 20 мл 1,2%-ного расплавленного агара на физрастворе. После застывания вторым слоем наливают 5 мп 0,7%- ного расплавленного агара на физраст воре, содержащего 7% отмытых эритроцитов барана, После застывания верхнего слоя пробойником делают лункы, дно которых запаивают 1-2 каплями расплавленного 1,2 Х-ного агара, В лунки вносят по 0,1 мл 24-часовой бульонной культуры различных штаммов В.апСЬгас.з (посевная доза 2 млн. спор на 1 мп бульона). Чашки Петри помещают .в термостат при 37 С. Через 48 ч ширину зоны гемолиза вокруг лунок с каждым штаммом измеряют при помощи ли-, нейки, Результаты измерения зон гемолиза представлены в табл. 2.Таблица 3 Штамм " Ширина зоны лизиса, мм СТИИхтиман1(СО)61 УЗ8811(СО) 0 б 0 6 49 Предлагаемый способ позволяет определять гемолитическую активность В, апгйгас 1 з, тогда как по известному способу из-за плотности агара при относительно невысокой продукции гемолитических веществ агаровыми культурами В.апгЬгасз гемолитическая активность практически не выявляется, ф о р м у л а изобретения Способ определения гемолитическойактивности Васд 11 цз апгЬгас 1 з путемпосева исследуемой культуры на плот-.ную питательную среду с последующиминкубированием посевов в присутствииэритроцитов барана и учетом результатов по наличию зон гемолиза эритроцитов, отличающийся тем,что, с целью повышения точности способа, а качестве плотной питательнойсреды используют двуслойный агар,приготовленныи на физиологическомрастворе, при концентрации агара внижнем слое 1,0-1,5 мас,Х, а в верхнем слое 0,6-0,8 мас,Х, при этомэритроциты барана вносят в верхнийслой в концентрации 6-8% от объемасреды, затем в агаре формируют лунки,1:в которые осуществляют посев исследуемой культуры,агара на физрастворе. После застывания вторым слоем наливают 5 мл 0,8%ного расплавленного агара на физрастворе, содержащего 8% отмытых эритроцитов барана, После застывания верхнего слоя пробойником делают лунки, днокоторых запаивают 1-2 каплями 1,5%ного агара. В лунки вносят по 0,1 мл24-часовой бульонной культуры различных штаммов В. апгЬгасз (посевнаядоза 5 млн. спор на 1 мл бульона),Чашки Петри помещают в термостат при37 С, Через 48 ч ширину зоны лизисаэритроцитов вокруг лунок с каждымштаммом измеряют при помощи линейки.Результаты измерений зон гемолизаэритроцитов представлены в табл,З.