Способ идентификации вирусов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН 1)С 12 И 7 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНАВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ СУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ(71) Ленинградский ордена "Знак Почета" научно-исследовательский институт детских инфекций(56) 1. Ногок 1 сх В., Юоода К,В. Оечеорвепй оФ Ьеп)ад 1 цй 1 пай 1 оп авяауз 1.А 1)асЬиепй рГ апй 1 Ьоду Фо ЙаЬ 111- к 1 ед ег 1 йЬгосусез. Чох Запд, 1977 с.33, й б, р.324-334.2. Ъа 1 ап Е., 11 ьоп С. А пеи п)ейНод Уог гар 16 Ыепй 1 Г 1 сай 1 оп о 1 1 иГ 1 цепга ч 1 гцз 1 ьо 1 айеа. - "Сапад 1 ап Иед 1 са 1 азаос 1 ай 1 оп 1 оцгпа 1", 1976, ч.115, р.1002-1003 (прототип).(54)(57) СПОСОБ ИНДЕНТИфИКАЦИИВИРУСОВ, включающий инкубирование стафилококков со стандартной сывороткойс последующим добавлением к полученному диагностгкуму, исследуемого вируса иповторным инкубированием полученнойсмеси, о т л и ч а ю щ и й с ятем,что, с целью повышения точности способа, стафилококки инкубируют совместносо стандартной и индикаторной сыворотками, взятыми всоотношении 1:1, послеинкубирования диагностикума с исследуемым вирусом добавляют индикаторныйвирус и идентифицируют исследуемый вирус по количеству несвяэавшегося индикаторного вируса,244 2трехкратном объеме фЬР и к осадку добавляют 1,0 мл индикаторноговируса ститром не менее 256 ГАЕ, Через 20 мин контакта при комнатной температуре смесь цеитрифугируют и определяют остаточный гемагглютинирующий титр в надосадочной жидкости. Наличие искомого вируса оценивают по разнице остаточной активности индикаторного вируса в опыте и контроле.П р и м е р 1, Две пробы биологической жидкости исследуются на наличие вируса гриппа В, Для этого использован стафилококковый диагностикум с антителами к вирусам гриппа В и А 1. Для адсорбцни использованы гипериммунные кроличьи сыворотки с титрами антител к вирусу А 1 и В 1:10240 и 1:640 соответственно. Для соединения со стафилококком сыворотки взяты в разведении 1;100 и 1;5 соответственно с целью получения равной антивирусной активности (102 н 108 единиц).После соединения диагностикума с пробой Х 1 и наслоения индикаторного вируса А 1 (с активностью 204 В ГАЕ/ /02 мл) остаточный титр его в надо - садочной жидкости 204 В ГАЕ/0,2 мл. В контрольной пробе (диагностикум с индикаторным вирусом) остаточная активность последнего составляет 32 ГАЕ/ /0,2 мл так, как в опыте не произошло снижение титра исследуемой жидкости со. держится вирус гриппа В.П р и м е р 2, При постановке опыта с пробой биологической жидкости М 2 остаточная активность индикаторного вируса составляет 32 ГАЕ/0,2 мл, как и в контроле. Значит не произошло перекрытие активных центров антител к индикаторному вирусу. и следует, сделать вывод об отсутствии в данной пробе вируса гриппа В, При дополнительном исследовании пробы Ло 2 в ней обнаружен вирус парагриппа 1-го типа. Использование способа позволяет значительно повысить точность идентификации, так как для большинства гемагглютинирующих вирусов распираторной групйы базовый способ выявляет не менее 64 гемагглютинируюших доэ вируса, а предлагаемый обнаруживает 05-0,25 гемагглютинирующей дозы. Для вирусов, не обладающих гемагглютинацией, сохраняется аналогичное соотношение в перерасчете на тканевые цитопатогенные дозы. 1 1008Изобретение относится к вирусологии ,и касается идентификации вирусов в раз,личных биологических жидкостях.Известен способ идентификации вирусов с помощью эритроцитов, сенсибилизированных антителами ЯИзвестен способ идеигификации вирусов, включающий инкубирование стафилококков со стандартной сывороткой с последующим добавлением к полученному 1 Одиагностикуму исследуемого вируса и повторным инкубированием полученной смеси, и по агглютинации стафилококков определяют наличие вируса, идентичногоспепифическим антителом 2. 15Однако известные способы не обеспечивают высокой точности.Бель изобретения - повышение точности способа.Поставленная цель достигается тем,. 2 рчто в способе идентификации вирусов,включающем инкубирование стафилококковсо стандартной сывороткой с последуюшпм добавлением к полученному диагностикуму исследуемого вируса и повторным 25инкубированием полученной смеси, стафилококки инкубируют совместно со стан .дартной и индикаторной сыворотками,взятыми в соотношении 1;1, после инкубирования диагностикума с исследуемым ви-йрусом добавляют индикаторный вирус иидентифицируют исследуемый вирус по количеству несвязавшенося индикаторноговируса.Способ осуществляют следующим образом.10%-ная взвесь золотистого стафилококка штамм С 0%03 1 инактивированная05%-ным формальдегидом, соединяетсягипериммунными сыворотками против40двух видов вирусов в соотношении 1:1(по однотипным реакциям),После 45 мин контакта сывороток состафилококком при комнатной температуредиагностикум дважды отмывают в трехтном объеме фосфатного буферногораствора (фБР) рН = 7,2-7,4 с центрифугированием при 1500 об./мин, в течение 15 мин. Для работы используется10% ная взвесь полученного стафилококкового диагностикума в фБР, 0,5 мл диагиостикума и 0,5 мл исследуемой биологической жидкости соединяют и инкубируют в течение 20 мин при комнатнойтемпературе, осаждают при 1500 об,/миив течение 15 мин, дважды отмывают в ИВНИИПИ Заказ 2272/35 Тираж 821 Подписноефилиал ППП фПатент г. Ужгородул. Проектная, 4