Способ получения тетрапептидов

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических РеспубликГосударственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(72) Автор изобретения Иностранец Барри Арнольд Морган"Рекитт энд Колман Продактс Лимитед" (Великобритания)(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕТРАПЕПТИДОВ ьГ 1 ТБ СООН, СОМН, СОМНМе, СОММе 2, СОММеРЬ, ОСОМН т или К в (СнгР является группой О1-Х 3 фВ 2 заключающимся в том, что соединенияформулы У - М -ОН (1)где У - соответствующая М - защит - ная группа,М - соответствующая защищеннаяаминокислота или пептидныйостаток,конденсируют с соединением формулыгде й, и и Х имеют указанные значения,М 2 - подходящая аминокислота илипептндный остаток, при условии, чтоМ и М вместе ОзначаЮт - Туг-В-Сеу-С. МНСООСг Ну2.) сООснз, 30 Изобретение относится к способу получения новых тетрапептидов - биологически активных соединений, которые могут найти применение в медици не.,В химии пептидов известен способ получения пептидов путем конденсации отдельных защищенных аминокислот или пептидных фрагментов с последующим снятием защитных групп 11.Цель изобретения - получение новых тетрапептидов, обладающих интересными фармакологическими свойствами.15Поставленная цель достигается описываемым способом получения тетра- пептидов общей формулы В - Гуг - З - С 1 у-С- еТ-(СНг)1 кЗггде Вт, - водород или метил;В - О-АСа, О - Мес, О-МесО-Бег, О-ТЬг, О-НайС - РНе, МеРЬ82 - водород, алкил Сп = 2-4;Х - МН, ММВБ ОАс, МНСОСНЗМНСООСНгРЬ, МНСОММ, МНСОММеММер,М(07 МеЗ, ММеРЬ, М(С)МеРЬ ФЙ 1 Б ЗЬйаИ 082793386 20 стимуляции прямоугольными импульсами 0,5 мс, Исследуемое соединениерастворяют в дистиллированной водедля получения исходного растворав концентрации 1 мг/мл. Делают последовательные разбавления, используяраствор 1 сребса, чтобы иметь концентрации 10 мг, 1 мг и 0,1 мг/мл.Соединение испытывают посредствомдобавления от 0,1 до 0,3 мл растворов к бане для органов. Затем определяют зависимость реакции от дозыи сравнивают с зависимостью для метенкефалина.При испытаниях с отдергиваниемхвоста крысы в качестве ноцицептив ного раздражителя используют горячуюводу (поддеркиваемую при 55+1 С),Результаты представлены в табл.2,получают при испытании соединенийпо изобретению с помощью илеума 20 морской свинки, активность по срав -ненин с метенкефалином при испытании по Гендершоту с сотр. и в испытании с надавливанием крысиногохвоста. Таблица 1 При мер инение(сНС 3 ч при 20 С раствор упаривают иостаток распределяют между зтилацетатом и водой (50 мл каждого), Органическую фазу отделяют и промывают 10-ной водной лимонной кислотой, водным бикарбонатом натрия инасыщенным рассолом, сушат надсульфатом натрия и остаток упаривают, получают целевой амид (5,15 г)(2) МеНСНСН(МН) СНСНМе. Раствор 1,3 г ,5 ммоль) ВОС.еи-ЙМев водной трифторуксусной кислоте (НО ; СРСООН = 9: 1,20 мл) перемешивают в течение 1 ч. Растворитель отгоняют и остаток растворяют в безводном тетрагидрофуране, Перемешиваемый раствор охлаждают до -20 С в атмосфере азота и добавляют раствор диборана в тетрагидрофуране (1 М, 30 мл). Через 5 ч при комнатной температуре добавляют 10 мл метанола, раствор перемешивают в течение 12 ч и затем упаривают. Остаток растворяют в 15 мл водной 2 М соляной кислоты и перемешивают еще в течение 12 ч, реакционную смесь упаривают. Остаток чистят хроматографически на силикагеле (система 7 С - 7 В). Соответствующие фракции объединяют, упаривают, получают целевой диамин в виде масла, которое при стоянии.кристаллизуется. При биологических испытаниях полученных препаратов самцов или самок морских свинок (штамма Дункан Хартли) убивают ударом по голове, удаляют часть илеума и помещают в баню для отдельных органов объемом 50 мя. Получают "судорокную" реакцию при низкочастотной (0,1 Гц) Туг-ОА 1 ау-РЬ-НН (СН 2) СОНН 2 фармацевтические составы могут быть, например, в форме, пригодной для парентерального введения, такой, как стерильные водные или масляные растворы или суспензии для инъекций, Дозированные парентеральные Формы, пригодные для внутривенного, внутри- мышечного или подкожного введения, содержат от 0,1 до 50 мг/мл соединения по изобретению (или эквивалентное количество фармацевтически допустимой его соли). Уровни дозы будут, как правило, для облегчения боли, в пределах от 0,1 до 100 мг в зависимости от пути введения,(с = 1 ОМГ) 15 НТуг-ОА 1 ау-МеРЬ-йН (СН 2)3 СОйН 2 16 НТ у г-ОА 1 ау-МеРЬ-йН (СН 2) ЗйНСОСНЗ 17 НТуг-ОА 1 ау-МеРЬ-йН(СН 2)СОйНМе 18 НТу - ЭАа - С 1 у - РИ - М М О 19 НТуг-ОА 1 ау - МеРЬ-йН (СН 2) СОйМеРЬе 20 НТуг-ОЯ ау-МеРЬ-йН(СН 2)4 СОйМе 2 21 Н Т у г - О А 1 а - С 1 у - й е Р Ь - й Н ( С Н 2 ) 8 С 0 й М е 2 22 НТуг-ОА 1 ау-МеРЬ-йН(СН 2)2 й(0) Ме 23 НТуг-ОА 1 ау-МеРЬ-й(Ме)(СН 2) СОйМео2 4 НТу 2 э - ЭА 1 а - 01 у - РИ - ХИе СН СН 8 СНМе 8туз Т 1 А 18 - яу тТерг 1 -Щ СН 8 Ще 8 ЛТ 2 С 2 СН)Те 82 б НТут - Пса - С 1 у - ИеРЬ - ХСЕ СНР(О)Ме 8 27 НТуг-ОА 1 а-Су-МеРЬ-йН(СН 2)3 йН о2 8 НТур ЭА 1 а - С 1 У- РИ - 3 .в Рг) 29, НТуг-ОА 3 ау-МеРЬ йН (СН 2 )йМеРЬ 30 НТуг-ОА 1 ау-,МеРЬ йН(СН )й(О) МеРЬ ЗА 0,17 55 В 0,36ЗА 0,36 24 А 0,69ЗА 0,60 ь 27 В 0,114 А 0,58 47 В 0,22(с = 1;ОМР) 49 НТуг-ОА 1 ау-МеРЬ,МН(СН ) МНСООСНРЬ ЗА 0,32 44 А 0,73 7 В 0,45 П р и м е ч а н и е. А - гидролиз прим.11. Т а б л и ц а 2 0,01 2,6 0,28 2,0 7,2 1,8 4,1 0,000030,003 1,4 8,5 0,32 0,37 0,08 6,5 22 0,028 13,0 23,2 0,24 19 ъ 1 О 2,2 0,07 Морфин В,-Туг-Ву-С-М-(СН ) Х/н 2где В - водород, метил; 65 СНСЖМе45 НТуг - ЭА 1 а - 01 у - ИеРИ - ЗНС -НСН гл(о)Ме а Формула изобретения Способ получения тетрапептидовобщей формулы В-О-Аа, О-Мес, О-Мес(0),О-МЧа 1,О-Бег, й-ТЬгуО-Ча 1, 0-1.ец;С-РЬе, МеРЬ;Р - водород, алнил С , фенэтил2л24;793386 90:27:2:3 120:20;б:11 ОВХН 2 СН 2 СН 2%ГСОСНЗЩСН 2 СНРНСОСН,О СН 2 Щ 2 ЗНСОСЯ 2 СН 221 НСОСН 2 СН 21 НС О СН НСОСНз.СОСН растцетатесусной кисеремешивают ей среды в тель отгораз растивым эфиром,в виде гигр щества НгМНСОСНют любым) в диметилв ледяной ба 78 г М-оксиОрганич фатом натр дый остато илиего защищенное производное, гдезначения для В и С указаны выше, споследующим удалением защитных группи выделяют целевой продукт, или, вслучае когдаХ: МИЕ или МИеРЬ, при желанииокисляют перекисью водорода или метахлорпербензойной кислотой, для получения соединения формулы 1 гдеХ: й(0)Иег й(0)ИеРЬ,В тексте использованы следующие сокращения:ВОС - трет-бутилоксикарбонилВц - трет-бутил3 ВСР - изобутилхлороформат7 - бенэилоксикарбонилОССЗ - дициклогексилкарбодиимидОСО - дициклогексилмочввинаНОМБц - М-оксисукцинимидМИИ - й-метилморфолинОИГ - диметилформамидОИЕ - 1,2-диметоксиэтанТНГ - тетрагидрофуранМГ - метиленгликольРазличные соединения и промежуточные вещества исследуют способом тонкослойной хроматографии (тс,х.) насиликагелевых пластинках (Кизельгель СГ 24 ), в следующих системах3 Е - метанол, хлороформ 1;2ДГ - метанол, хлороформ 1;192 В - хлороформ, метанол, уксусная кислота 19;9;1ЗА - хлороформ, метанол,уксусная кислота,вода 60;18:2:3(1) ВОС - Рне-йнснгснгМНСОСН.К охлажденному до -20 С раствору ВОС-РЬ-ОН (265 г) в 20 мл хлористого метилена добавляют н-метилморфолин (1,01 г) и изобутилхлорформиат (1,37 г), после чего через 2 мин вво дят НйсйснгМНСОСН(1,2 г), Температуру реакционной смеси поднимают до комнатной и смесь перемешивают при этой температуре в течение 21 ч, после чего растворитель отгоняют, а смолу растворяют в хлороформе. Раствор промывают насыщенным раствором МаНСОЗ, 10%-ной водной лимонной,кислотой, водой до полной нейтрализации и, наконец, насыщенным солевым раствором. кую фазу сушат над сульи упаривают досуха, твер, кристаллизуют из этилапе ЗВ - хлороформ,метанол, уксуснаякислота, вода 30:18;4:бЗС - хлороформ,метанол, уксуснаякислота, вода30 - хлороформ, метанол, уксусная кислота,вода 30;20:2;34 А - изобутанол, этилацетат, уксуснаякислота, вода 1:1:1:15 В - иэобутанол,уксусная кислота, вода 3:1:17 В - этилацетат, пиридин, уксусная кислота,вода 60:20:6:117 С - этилацетат, пиридин, уксусная кислота,вода70 - этилацетат, пиридин, уксусная кислота,вода 240;20;6;117 Г - этилацетат, пиридин, уксусная кислота,вода 480;20:6:118 А - хлороформ, изопропанол 3:18 В - хлороформ, изопропанол 9:1П р и м е р 1, Е-Тирозил-аланилглицил-Е-фенилаланин-ацетамидоэтиламид,Его получают согласно следующемуспособу 5тата, получают амид 1 (3,0 г)й 7 Г 0,35,(20 мл) и 2,6 М НСЙ в уклоте (5 мл), и раствор ипри температуре окружающтечение 30 мин. Раствориняют и остаток несколькорают с безводным диэтилоГидрохлорид (2) получаютскопического твердого ве(4) Вос сЕу Рь мнсн,сЭто соединение получаследующих способов,А. К раствору ВОС-ССуи Н МСЙ СН МНСОСН (04 гформамиде, охлажденномуне с солью, добавляют О,), Перемешии -20 ОС, за сукцинимида и 0,668 г дициклогексилкарбодиимида. Поднимают температуру реакционной смеси до комнатной и продолжают перемешивание в течение ночи, отфильтровывают выпавший в осадок ОСО и Фильтрат упаривают. Остаток растворяют в хлороформе, промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (2 х 50 мл), 10-ной водной лимонной кислотой (2 х 50 мл) и водой до полной нейтрализации, а затем насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают досуха. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (452,4 см). Элюируют сначала смесью хлороформа изопропанола в соотношении (19:1), затем в соотношении (4:1). Названное соединение получают в виде смолы (0,60 г) В 8 В 0,4, йу 7 Г 0,2.Б. К охлажденному в бане с твердой углекислотой в смеси с четырех- хлористым углеродом раствору 1,072 г ВОС,у-ОН в хлористом метилене добавляют 0,618 г й-метилморфолина и 0,836 г изобутилхлорформиата. При этой же температуре через 2 мин добавляют СГ Н , РЬ ЙНСН 2 СНМНСОСН 3 (1,75 г) и 0,618 г й-метилморфолина и температуру поднимают до комнатной. Реакционную смесь обрабатывают после перемешивания в течение ночи так, как описано для соединения 1. Остаток чистят согласно А. Продукт получают в виде смолы (0,65 г).0,4) В 7 Р 0,2обрабатывают 0,64 г ВОС-СЯу-РН-ННСНСНННСОСНз. 5,5 М НСО в этилацетате (5 мл) и 2,6 М НС, в уксусной кислоте (5 мл) при температуре окружающей среды,ут ТИ 1 а(1) ВОС-МеРЬ-МНСНС Раствор Н-трет-бути -й-метилфенилаланин (2 г-метилморфолина в дих (20 мл) при перемешива до -20 С, затем к немУ (1,37 г) и спустя 5 ми НСНСНСНММе 2( 1,02 вайие продолжают 1 ч п Через 45 мин растворитель отгоняюти остаток растворяют в диэтиловом эфире. Гидрохлорид дипептидный получаютв виде гигроскопического твердого вещества (0,54 г), Е ЗО 0,45.) ВОС-Туг(ВО)-ОЯВа-Он (0,6 г)и С, Н ВВу-РЛ-Ннснсн НСОСН(0,5 г)растворяют в 3 мл диметилформамидаи охлаждают в ледяной бане с солью.Затем к раствору добавляют 0,355 гИ-оксисукцинимида и 0,303 г дициклогексилкарбодиимида, а потом 1,48 гН-метилморфолина. Поднимают температуру реакционной смеси до комнатнойи перемешивание продолжают в течениеночи. Выпавшую в осадок дициклогек силмочевину отфильтровывают растворитель отгоняют и остаток распределяют между этилацетатом и водой, Органический слой промывают насыщеннымводным раствором бикарбоната натрия 2 О (250 мл), 10-ной водной лимоннойкислотой (250 мл), водой до нейтрализации, наконец насыщенным солевымраствором. Органический слой сушатнад сульфатом натрия и упариваютТетрапептид получают в виде смолы(6) Н-Туг в -ЯВа-СВу-Рп-ННСН СН, ННСОСН з.0,65 г ВОС-Ту г ( Во) - О-ЯГа-С.у-РЬ МНСН СНННСОСН 3(0,65 г) обрабатывают 2,6 М НСГ в уксуснои кислотевзятой в избытке, в течение 45 минпри температуре окружающей среды.Растворитель от.гоняют и остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (50 х 2,5 см) в системе ЗА. Полученную смолу сушат лиофилизацией,получают названное соединение(0,45 г).Ву ЗА 0 3 сС 3-6,95 О (с:1, ОМЕ) .4 О П р и м е р 2 . С-тирозил-С-ала-нилглицил-Н-метил-С-Фенилаланин-диметиламинопропиламид. 1 К(С 1 а) ЖфГе НС тем температуру поднимают до комнатной и продолжают перемешивание в течение 12 ч. Смесь упаривают, остаток растворяют в этилацетате (50 мл), Этилацетатный раствор промывают водНым раствором бикарбоната натрия (насыщенный, 50 мл), водой (2 х 50 мл)10-ной водной уксусной кислотой1.2 х 50 мл), Кислые экстракты объеди793386 и упаривают досуха. Остаток растворяют в метаноле, выносят в колонкус силикагелем (35 к 2 см) и продуктэлюируют системой 1 Г. Фракции, содер.жащие нужное соединение, собирают,упаривают и остаток растворяют в этиацетате (100 мл) . Этилацетатныйраствор промывают водным бикарбонатомнатрия (10-ный, Зх 100 мл), сушат,упаривают, получают названное тетрапептидное соединение (5) в виде белого твердого вещества Н т 1 Е О, 18;К ЗА 0,39.(6) Й-Туг-Айа-ВВу-МеРЬ-йНСНСНСНйМе 2.К раствору 500 мг защищенного тетрапептида(5) в 5 мл этилацетата приперемешивании добавляют раствор хлористого водорода в этилацетате(5,7 М,2,5 мл). Спустя 1 ч реакционную смесьфильтруют и остаток промывают петро 20 лейным эфиром, сушат и лиофилизируютиз воды, получают продукт (380 мг)в виде белого твердого вещества.К 4 А О 27, К ЗВ О 47,(Ы 3 В +(1) ВОС-Туг(Во)-0-АВа-ОК у-МеРЬ - йНСН,2 СНСНй(0)Ме 2.ЗО К раствору 500 мг ВОС Туг(Во )-0- -АВа-ОКу-МеРЬе-йНСН 2 СНСНйМ(500 мг)в 10 мл метанола добавляют водныйраствор перекиси водорода (ЗОВ-ная,0,16 мл) и раствор перемешивают втечение 48 ч при комнатной температуре. Отфильтровывают выпавший осадок,маточник упаривают, получают нужнуюзащищенную й-окись в виде смолы.К 1 Е О 08; К ЗА О 41,(с.) НТуг-О-АВа-Ы у-МеРЬ 40 -йНСН 2 СНСНй (0) Ме 2,ОНКНеСН 2 СНеХ НегМФЖа СНХЖе гИНСИСНМИе,ХНС 1НСНРИееНСН 1 ФГе 2 НС 1 няют, подщелачивают насыщенным раствором бикарбоната натрия и продуктэкстрагируют этилацетатом (Зх 50 мл).Этилацетатные экстракты объединяют, сушат над сульфатом натрия иупаривают, получают названное соединение в виде масла, К 16 0,24,К ЗА 0(37.(2) Н-МеРЬе-йНСН СНСНйМе 2 НСВМасло, получение которого описанов стадии (1), растворяют в этилацетате (10 мл), добавляют НСо в уксусной кислоте (6,63 М, б мл) и НСС вэтилацетате (5,7 М, б мл), Растворперемешивают в течение 2 ч, упаривают,получают продукт в виде дихлористоводородной соли (2,2 г), К 1 Е 0,02,К 1 ЗА о,о 8,(3) ВОС-ССу-МеРЬ-йНСН СНСН йМе 2 .Раствор трет-бутилоксикарбойилглицича (1,05 г) и 0,606 г й-метилморфолина в дихлорометане (12 мл)опри персмешивании охлаждают до -20 С.Добавляют 0,819 г (б ммоль) изобутилхлорформиата и смесь перемешивают втечение 5 мин перед добавлением (2),указаннго выше (2,02 г) в 5 мл диметилформамида. Раствор перемешиваютв течение 1 ч при -20 С и в течение12 ч при комнатной температуре, затем упаривают. Остаток растворяют всмеси этилацетата (50 мл) и водногораствора бикарбоната натрия (10-ный,50 мл). Органическую фазу отделяют,промывают водным бикарбонатом натрия( 10 о ный, 3 "50 мл) и водой (3 к 50 мл)Этилацетатный раствор сушат над сульфатом натрия упаривают, получают названное соединение в виде масла,К 1 Е 0,21; К ЗА 0,37,(4) Н-Ы у - МеРЬ-йНСН 2 СН 2 СНйМе 2 НСВЗащищенный дипептид (3) обрабатыва:от указанным способом (2), получаютдихлористоводородную соль (4) (2,0 г)з виде белого твердого вещества,1 Е 0,03, К ЗА 0,03,(5) ВОС-Туг(Во ) - ОАВа-СЮу-МеРЬв йНСН 2 СН СН йМе 2 .Раствор ВОС-Туг(Во )-0-АГа-ОН( 1,22. г), Н6 у-МеРЬ-ИНСНСНСНйМе2 НСК (1, 18 г), 0,345 г й-оксисукцинимида и 0,30 г й-метилморфолинав 20 мл безводного диметилформамидаохлаждают до 0 С. Добавляют ССЯ(0,680 г), смесь перемешивают в течение 18 ч, затем выпаривают. Остаток растворяют в этилацетате (50 мл)и промывают водным бикарбонатом натрия (10%-ный, 2 ъ 50 мл), водой (2х 50 мл),отделяют этилацетатныйСлой, сушат. его над сульфатом натрия Смолу, полученную в стадии (1), растворяют в 5 мл этилацетата и к раствору добавляют раствор НС 0 в этилацетате (2,63 М, 1 мл). Раствор перемешивают в течение 1 ч, отфильтровывают, сушат твердое вещество и лиофилизируют из воды, получают нужный продукт (240 мг) в виде белого твердого вещества. К 4 А 0,56, КЗВ 0,52 у о 3+ + 18,8 (с : 1; 0,1 М ЙСГ).П р и м е р 4, -Тирозил-О-аланилглицил-й-метилфенилаланин- -диметиламиноэтиламид.Это соединение получают согласно следующему способу.(2) НМеРЬе-ННСНгСН 2 ИМе 2. 2 НСВ,й-Защищенный амид йз укаэаннойстадии (1) деблокируют в условиях,описанных в примере 1 (2), получаютцелевую хлористоводородную соль ввиде масла.(3) ВОС-Туг(Ва)-О-Аа-Оу-МеР Ь-МНСН 2 МНСН СН ЙМК раствору 700 мг (1,5 ммоль)ВОС-Тег(Вцф)-СА 1 а -Су-ОН в 7,5 млбезводного тетрагидрофурана добавляют 152 мг (1,5 ммоль) И-метилморфолина, раствор охлаждают до-15)С) непрекращая перемешиваниядобавляют 205 мг (1,5 ммоль) изобутилхлорформиата. Через 5 мин вводят раствор 2 НС Н-МеРЬ-ННСНСНгММег(3 ммоль) й-метилморфолина. Спустя18 ч реакционную смесь упариваюти остаток распределяют между 50 млэтилацетата и насыщенным воднымраствором бикарбоната натрия (50 мл)Отделяют этилацетатный слой, промывают его насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл), водой (2 х 50 мл) и рассолом (50 мл),сушат над сульфатом натрия,упариваютОстаток хроматографируют на силикагеле, используя систему 7 В. Подходящие фракции, содержащие продукт,обьединяют, упаривают, получают целевойтетрапептидный амид (700 мг) в видестеклоподобного твердого вещества.(4) 2 НС НТуг-ОАа-Су-МеРЬ-Инснг СнгииегЗащищенный пептид, полученный как описано в стадии (3), деблокируют в условиях примера 2(б), получают целевой продукт.После лиофилизации, получают тетрапептидный амид (200 мг) в виде белого твердого вещества, Ву 7 В 0,04;8 ЗА О 07;дго,2 (с = 0,50, ОМР)П р и м е р 5. .-Тирозил-О-аланилглицил-. -фенилаланинтиоморфолинамид-окись.( 1) ВО С - Р 1 - М ЯРаствор 1,32 г ВОС-РЬ-ОН и 680 мг изобутилхлорформиата в 10 мл диметилформамида, охлаждают до -20)С и при перемешивании добавляют к нему 520 мг й-метилморфолина, Спустя 2 мин вводят холодную суспензию, состоящую из 690 мг тиоморфолин гидрохлорида (690 мг) и 520 мг М-метилморфолина в 8 мл диметилформамида. Перемешива" ние продолжают в течение 30 мин прио-20 С, а затем при комнатной темпе,аатуре в течение ночи, Растворитель отгоняют, полученный материал распределяют между этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Этилацетатный слой отделяют ипромывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, дважды 10-ным раствором лимонной кислоты в воде, а затемводой и, наконец, насыщенным раствором хлористого натрия. Этилацетатный(раствор сушат над сульфатом натрия,упаривают, получают тиоморфолинамидв виде смолы (1,56)г(е Н-РИ- рПри перемешивании к раствору151,05 г ВОС - УИ - Ж 3 в 3 мл уксусной кислоты при комнатной температуре добавляют раствор. хлористоговодорода в уксусной кислоте(2,6 М)20 3 мл) и через двухчасовые интервалы добавляют еще 3 мл двумя порциями. Растворитель и хлористый водород отгоняют, остаток растирают сбезводным диэтиловым эфиром, эфир5 декантируют, а остаток растирают сосвежеперегнанным безводным эфиром,получают фенилаланинтиоморфолинамидв виде твердого вещества (788 мг).ЗО (а) ВОС -С)1 у - г 1 - Т 3384 г ВОС-Сч-ОН (384 мг) конденсируют с,РЬ-Ж В НС(572 мг) способом, описанным выше дляВОС-Р 1-й(4)ВОС - Тухл(Всс ) -ЭАа- с 1 у-РИ - 2 Я697 мг ВОС - 01 у - РИ - Х 8 смешивают с водной трифторуксусной кислотой (вода : трифторуксусная кислота45 1:9,9 мл) в течение 1 1/2 ч.Кислотуотгоняют и остаток растирают с диэтиловым эфиром, получают порошок,который растворяют в 5 мп безводного1 мг (5 мл) и доводят рН до 8 с помощью Н-метилморфолина (влажная индикаторная бумага). ДобавляютВОС-Туг(Вц ф)-ОАа-ОН (680 мг), М-оксисукцинимид (211 мг) в 3 млдиметилформамида, а затем 377 мгдициклогексилкарбодиимида и смесьперемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Твердое веществоотфильтровывают и фильтрат упариваютдосуха. В остатке получают смолу,которую распределяют между этилацета 60 том и насыщенным водным растворомбикарбоната натрия. Этилацетатныйслой дважды промывают насыщеннымводным бикарбонатом.натрия, затемтрижды 10-ной лимонной кислотой в45 воде, потом водой и насыщенным раст 793386 12вором хлористого натрия. Сушат над сульфатом натрия, упаривают и получают защищенный тетрапентидтиоморфолинамид (1,09 г) .( 5 ) Туг - ПАЕВ - С 1 у-ГЬ -Защищенный тетрапептидтиоморфолинамид (1,0 г) перемешивают в водной трифторуксусной кислоте (НО:СГСООН 1:9,9 мл) в течение 1 1/2 ч. После упаривания и растирания с диэтиловым эфиром получают твердое вещество,которое чистят хроматографически на силикагеле (хлороформ."метанол;уксусная кислота 60;18-1:1,5), а затем ионообменной хроматографией (смо-15 ла Сефадекс 5 Р, пиридиниевая форма, используя градиент от 2 пиридина в воде до 5 пиридина и 1-ную уксусную кислоту в воде), Продукт лиофилизируют, получают тетралептидтиоморфолинамид (495 мг).1Туг - ЮА 1 а - 01 у-Г 1 -Ж 3 ф.О25Т Р - 2 А 1 а - С 1 у-Р 1 - Х " (100 мг)в этаноле (50 мл) обработанный последовательно тремя порциями (20 по объему) перекиси водорода (0,3 мл каждая) с интервалами в 45 мин при перемешивании при комнатной температуре. После дальнейшего перемешивания в течение 1 ч раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 35 воде (20 мл) и лиофилизируют, получают белое твердое вещество (98 мг),В ЗА 0,25; В7 С 0,06; Р,т 5 В 0,38Го(Зад =+53, 1 (с = 0,47, в 40 0,1 н, НС 1).П р и м е р 6. 1.-Тирозил-О-аланилглицил-С-фенилаланин-аминоэ тил амид.Туг-ОА а-Су-ИеРЬе-ИНСН С 112 ЯНЕ (полученный способом, описанным в примере 4) (350 мг) растворяют в 20 мл метанола и добавляют и суспензии 10 палладин на угле (100 мг) в 10 мл воды. Водород барботируют в течение 4 ч при 22"С. Катализатор затем отфильтровывают и растворитель отгоняют при пониженном давлении.Остаток растворяют в небольшом количестве 1 пиридина в воде и вносят в колонку с Сефадексом ЗР (элюируют градиентом 1 водный пиридин" 1 водный пиридин ацетат в 5 водный пиридинацетат), Соответствующие фракции объединяют и раствори- тель отгоняют в вакууме. Продукт (220 мг) сушат вымораживанием из 40 воды, К ЗВ 0,45; К 4 Л 0,56;1.аСЗ = +22,22 (с = 0,98; 0,1 М НС).П р и м е р 7. С-Тирозил-О- "аланилглицил-М-метил-С-фенилала нин-триметиламмонийпропиламидацетат.(640 мг) в 5 мл этанола добавляютйодистый метил (5.72 мг) и растворперемешивают при. комнатной температуре в течение 48,ч. Затем растворупаривают, остаток растворяют вэтилацетате ихроматографируют наколонке с силикагелем (40 х 2 см),продукт элюируют смесью этилацетат : пиридин : уксусная кислотавода 90 : 20 : 6 11. Объединяютфракции, содержащие целевое соединение, упариваютполучают твердоевещество (320 мг), К. ЗЛ 0,17;В ЗВ 0,74; В, 4 Р .0,47,(10 мл) и к раствору при перемешивании добавляют раствор НС в этилацетате (3,9 М, 4 мл), Через 1 чсмесь упаривают, остаток растворяютв воде и вносят на колонку с целлюлозой СМ 52 (35 х.3 см), продуктэлюируют линейным градиентом концентрации от О,05-ного водного пиридина до 1-ноговодного пиридинацетата. Объедйняют фракции, содеркащие целевое соединение, упариваюти остаток лиофилизируют из воды,получают целевой продукт (110 мг)в виде белого твердого вещества.ВУ ЗВ 0 17; В,В 4 Л 0,13; ВУ 5 В0,05 Ы Д= - 37,75 (с = 0,5,ОИГ).П р и м е р 8, .-Тирозил-О-метионилглицил-Н-метил-.-фенилаланин-диметиламиноэтиламид-Н-окись.(1) ВОС-С 1 у-ИеРЬ-НН (С 1) И (0) ИеКраствору ВОС-С 1 у-МеРЬ-ЙН (СН) НМе в 200 мг метанола добавляют 1,23 г м-хлоронадбензойной кислоты. Реако ционную смесь перемешивают при 22 С в течение 2 ч, затем оставляют при 5 С на 18 ч.Растворитель отгоняют при пони-,кенном давлении и остаток растворяют в 150 мл этилацетата, растворпромывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2 хЗО мл),сушат над сульфатом натрия и упаривают, получают И-окись (1,9 г);Ву ЗА 0,76; В 4 А 0,64,(1,8 г) растворяют в 10 мл этилацетата и к раствору добавляют уксусную кислоту (10 мл). Затем в раст-МеРЬ - НН(СН 2)2 И(0) Ме 2 растворяютв смеси трифторуксусной кислоты(36 мл) и воды (4 мл), содержащейанизол (0,2 мл). Смесь перемешивают в течение 30 мин при 22 С,затем упаривают в вакууме. Продуктчистят хроматографией на силикагелеиспользуя градиентную систему (система растворителей ЗА в 2 В) в ка"честве элюента, Материал послеочистки на колонке с силикагелемпереносят в колонку с карбоксиметилцеллюлозой, элюируют градиентом от 550,1-ного водного пиридина до 1,5 ного водного пиридинацетата.Соответствующие фракции объединяют, выпаривают, остаток высушиваютповторным вымораживанием из разбавленной НС 1, получают целевой гидрохлорид (341 мг),Ву ЗВ 0,31; Ву 4 А 0,44;Н 5 Б0,19;сСЛВ = +29 ГАЗО (с = 0,99,0,1 н. НС 1) . б 5 СН,СН,С 121 Н-Туо-Ю 1 а - О 1 у-МеРИ ХСН 2 СН 2 М 0 Жв в вор вводят раствор хлористого водорода в этилацетате (3,9 М, 12 мл)ои смесь перемешивают при 21 С в течение 30 мин. Растворитель отгоняют в вакууме и полученное твердое вещество, растирают с безводным диэтиловым эфиром (2 х 40 мл), Хлористоводородную соль И-окиси (1,5 г) отфильтровывают, Р 4 А 0,40.( 3) ВОС-Туг (В ц 1) -ОИе 1-С 1 у-МеРЬ-НН(СН 2 )2 И(0)Ие 2. К раствору 1,8 г ВОС-Туг(Вц )- -ОИес-ОН в 10 мл безводного ТНР добавляют 0,87 г Н-оксисукцинимида, 1,5 г Н С 1 НОу-ИеРЬе-ИН (СН 2 )2" Н (0) Ме 2 и 0,84 мл Н-метилморфолина растворяют в 2 мл безводного ТНГ. Оба раствора смешивают, охлаждают до -10 С и добавляют к смеси 0,87 г дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают при -10 С в течение 2 ч, затем при 20 С в течение 18 ч.Реакционную смесь отфильтровывают и прозрачный маточник упаривают под вакуумом. Полученную смолу распределяют между этилацетатом (60 мл) и водой (10 мл), органическую фазу отделяют и промывают 10-ным водным раствором бикарбоната натрия (1 х 10 мл), а затем экстрагируют 10-ным водным раствором лимонной кислоты (5 х 15 мл) . Величину рН водной фазы доводят до 7, используя твердый бикарбонат натрия, и продукт экстрагируют этилацетатом (Зх 40 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают, получают смолу (1,35 г). В ЗА 0,48.(4) НС Н-Туг-ОИесу-МеРЬ-НН ( СН 2 )2 Н (0) Ме 2. П р и м е р 9. С-Тирозил-О-метионил (сульфоксид) глицил-й-метил-С-фенилаланин-диметиламиноэтиламид-й-окись.К раствору 418 мг НС 1 Н в Туг-ОМейу-МеРЬ-ЙН(СН 2)2 И(0)Ие 2 в150 мл этанола добавляют 1,46 млперекиси водорода. Раствор перемешивают при 21 С в течение 24 ч,после чего растворитель отгоняют припониженном давлении и полученный материал чистят хроматографическина целлюлозе СМ, используя градиент,ное элюирование от 0,1-ного водногопиридина до. 1,5-ного водного пири 1 дИН ацЕтата,Материал, полученный после очистки на колонке, высушивают повторнымвымораживанием из НС 1, получают целевой гидрохлорид (354 мг).Ку ЗВ 0,32; й 4 А 0,43; Кр 5 В0,32; Сс 1.3 и = +9,16 о (с = 1,050,1 н НС).В табл.1 указаны подробности получения других соединений формулы 1способами, описанными в указанныкпримерах.Ниже перечислены другие типичныесоединения по настоящему изобретению: СН 2 СН ИеН - Ту - 13 А 1 а - С 1 у - 7"ТеРИ 1 ЧСН 2 сн 21 ч(о)ме 2 СН 2 СН 2Н - Ту 2 - ЭА 1 а- С 1 у - МеРИ М МеСН 2 СН 21 Я(0) Ме 2 Н -Туг - 11 А 1 в - С 1 у -МеРИ 111 ИвСН 2 СН 21 Ч 10)Ив 215 16 793386 Он-тчг-Вча 1 -Ич - меРЬмнсн сн ЩО 1 мсг СН,СН,-СНасна 01 Ч(,СН 2 СН 21 Ч (О) МК 2 Н-Тчг-ЭАСа-бЬ-меРЬ 1 НСН Сн 1 ч(сам2 2 2 Н -тчг -В-(еч-Ич -МеРЬ инсн сн и(О) ме Н- ТЧГ РН 1 ЕО-бО-МЕРЬгНСН СН 1(О)МЕ Н-ТЧг-Т 1 тгЕ-ЫЧ-МЕРЬННСН СН Н(О)МЕ2 2 2 Н -ТЧг -ВАСО - ЮЧ -МЕРЬ АНСИ СН ННМЕ2 2 н-тч -В Иа -Ыч-МеРЬннсн сн н(01 МеН н-тчг -ЗАа -Ыч - меРЬ ННСН Сн 1(О; е Ь Н-ТЧг-ВАТ.а -ЫЧ-МЕРЬННСН СН ЗМЕИ,2 2н-тчг-Вма -сыч -меРЬннсн 2 сн 2 нИ 2 Нсходные амины формулы НЙВ 2 ВХ, используемые при получении соединений, описанных в вышеуказанных примерах, если они не являются коммерчески доступными, могут быть получены известными способами, либо так как описано в нижеследующих примерах.П р и м е р А. М-Нзоамил-Н,Н-диметилэтилендиамин.( 1) Ие 2 СН СН 2 СОЙН СН 2 СН 2 НН .По каплям при перемешивании добавляют раствор 5 г (38 ммоль) хлористого изовалероила в дихлорометане к раствору Н,Н-диметилэтилендиамина (3,38 г, 38 ммоль) и Н-метилморфолина (7,75 г, 76,7 ммоль) в,цихлорметане при 0 С. Поднимают температуру реакционной смеси до комнатной и продолжают перемешивание в течение 4 ч, затем растворитель отгоняют. Остаток растворяют в 50 мл 5 М едкого .натра и экстрагируют этилацетатом (2 х 100 мл). Этилацетат промывают насыщенным водным раствором хлористого натрия, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растворяют в диэтиловом эфире добавляют к нему 10 мл 5 М НС в этилацетате. Выпавший в осадок продукт отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром (5 х 10 мл) и сушат в глубоком вакууме.Выход = 5,43 г; 8 ЗА 0,40.(2) Ие 2 СНСН 2 СН 2 ННСН СН 2 ИН 2,Раствор указанного амида (5 г) в безводном тетрагидрофуране (50 мл) по каплям, при перемешивании добавляют к суспензии .(АН 4 (4) в безводном тетрагидрофуране (20 мл) при)комнатной температуре, Затем реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч,после чего, используя хроматографию в тонком слое, обнаруживают отсутствие исходного материала. Избыток 1.1 А 1 Н 4 гасят насыщенным водным раствором сульфата натрия. Полученную суспензию фильтруют, маточник подкисляют 10 мл 4 М НС 1. Растворитель отгоняют, остаток растирают с диэтиловым эфиром,фильтруют и осадок высушивают.Выход 5,51 г.П р и м е р В. И-Фенэтил-й,й-ди- метилэтилендиамин( 1) РЬСН 2 СОИНСН 2 СН 2 ИН НС 1, Указанное соединение получают способом, описанным в примере А(1), путем сочетания фенацетил хлорида (1,0 г, 6,47 ммоль) с й,й-диметилэтилендиамином (0,42 г,б,47 ммоль) в присутствии И-метилморфолина.Выход 1,38 г 1 Р ЗА = 0,80.(2) РВСН СН ИНСН СН 2 ИН НС 1,Целевое соединение получают восстановлением вышеуказанного амида (10 г) с помощью 11 А 1 Н 4, как описано в примере А(2). Полученный продукт чистят хроматографией на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента систему ЗА.Выход 4,5 г; Р ЗВ = 0,31,П р и м е р С, И-(2-Аминоэтил) -У( 1) РЬСН 20 СОИНСН 2 СН 2 ИНСОИМеРаствор хлористого диметилкарбамоила (1,39 г) в диэтиловом эфире (15 мл) добавляют по каплям к перемешиваемому раствору й-метилморфолина (1,57 г) и 2-бензилоксикарбониламиноэтиламина (3,02 г) в 110 мл диэтилового эфира, Смесь перемешивают 4 ч, затем оставляют на два дня. Эфир отгоняют, твердый продукт распределяют между 10-ной водной лимонной кислотой и этилацетатом. Этилацетатный слой отделяют и промывают 10-ной водной лимонной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и насыщенным раствором хлористого натрия, а затем сушат над сульфатом натрия и упаривают, получают твердое вещество (1,7 г). После перекристаллизации иэ смесей этилацетата и петро. - лейного эфира (т.кип. 60-80 С), получают продукт с т.пл. 81-82 С.(2) Н 2 ИСН 2 СН 2 ИНСОИМе 2. 1,06 г й-бензилоксикарбонильного соединейия растворяют в 30 мл этанола, содержащем 2,1 мл 2 н. водной соляной кислоты и подвергают гидрогенолизу над 10-ной (100 мг) 5 0 15 20 25 ЗО 35 40 45 50 55 в течение 1,5 ч. Смесь Фильтруют,маточник упаривают., получают целевое соединение в виде хлористоводородной соли, которую используютбез дополнительной очистки.П р и м е р О. й-Изоамил-И-метилэтилендиамин.1) ВОСу-й(Ме)СН 2 СН 2 СНМе 2 .К раствору 17,5 (0,1 моль)ВОС-С 1 уОН в 100 мл безводного хлористого метилена, добавляют 10,1 г(0,1 моль) ЭВСЕ при -15 С. Спустя2 мин добавляют 13,7 г (0,1 моль)й-метилизоамиламингидрохлорид и10,1 г И-метилморфолина. Реакционную смесь перемешивают при -15 С втечение 15 ч и при комнатной температуре в течение ночи. Растнорительотгоняют и масло растворяют в этилацетате, экстрагируют насыщенным бикарбонатом натрия (2 х 100 мл), 10-нойводной лимонной кислотой (2 х 100 мл),промывают водой до нейтральной реакции, сушат над сульфатом натрия иупаривают.Получают масло. Выход 27 г (количественный); В 70 = 0,79,(2) НИСН 2 СН й(Ме) СН 2 СН СНМе 2. 12 г ВОСу-И(Ме)СН 2 СН 2 СНМе растворяют в 90-ной водной тркфторуксусной кислоте (Н 20 : СГ СООН 1:9,35 мл). Через 2 мин растворитель отгоняют, оставшееся масло растворяют в 50 мл свеженысушенного тетрагидрофурана и добавляют к диборану в тетрагидрофуране (1 М, 150 мл) в атмосфере азота при - 20 С, Температуру поднимают до комнатной и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Осторожно добавляют 100 мл метанола для разложения избытка диборана, растворитель отгоняют, получают масло. Затем масло обрабатывают 50 мл б М НС 1, Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч и смесь упаривают. Полученное масло обрабатывают 2 М ИаОН в течение 1 ч, подкисляют и упаривают. Маслообразный остаток чистят колоночной хроматографией на силикагеле (колонка 2,5 х 80 см), элюируя целевой продукт системой растворителей ЗА.Выход 4,4 г, В ЗА = 0,20.П р и м е р Е. Диметил-(2-амино- -4-метилпентил)-амин.