Способ получения антибиотика

Оп ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПА 7 ЕНУУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспубпнк и 741804) Приоритет 51) М, Кл. С 1209/ 32) 31.03.77 ас 1/даретвенный камитет СССР пп делам изобретений и открытийДата опубликования описан 06.8 2) Авторы изобретения Иностранцьи Хигасиде Мицуко Ас) Заявитель 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА ной Изоб бластн микро.нового антиаучно-техннче го получения в патен ой литературе не опиЦелью изобретени антибиотика общей ф ение относится касается получениологии тся получени отика, , Пре вый и сп с 1 н оженныи антибиотик уль Сн К 3 е-СН или- СО - СН- со - сн сн,сагда С - 15003, который выделенШтамм Мосагда С - 15003 храниституте исследования фсрментациипромышленной науки и технологиипод номером 3992, в Институте феОсака ( 1 РО) под номером 13726канской коллекции типовых кульМэриленд, США под номером 312 что штам ГО 1372 ательной из почвы. ся в ино -ода и азота,евого продук В качестве штаммаводящего антибиотик и про 1 чокроорганизм 1 льзуют шта Эта цель достигается тем,сагда С - 15003 (АТСС 31281; РЕЯМ 3992) выращивают на ли де, содержащей источники углер с последующим выделением цел та.741804 30 3Культурально- морфологические признакиВегетативный мицелий развивается какна плотной, так и в жидкой питательной среде.Гифы имеют в диаметре 0,8 - 1,2 мм, частообразуются метелкоподобные тела (5 200 хх 200-1000 мм), на которых происходит даль.нейший воздушный рост, в некоторых случаяхони могут быть разделены на фрагменты.Штамм хорошо растет на различных токсономических средах, в.старых культурах в цепях встречаются конидальноподобные клетки.Суспензия клеток, полученных из поверхностейтаких культур содержит удлиненные эллипсоидальные (0,8 - 1,2 мм - 4,8 - 6,8 мм) и эллипсоидальные (0,8-1,2 х 1,0 - 2,0 мм) тела, подобные артроспорам, имеющие гладкие поверхности,Штамм хорошо растет на различных пита.тельных средах.Сахаро-нитратный агар.20Рост умеренный, Субстратный мнцелий желтый до коричневого, образуются метелкоподобные тела. Воздушный мицелий скудный, белый,Растворимый пигмент отсутствует или светлый,желтовато-коричневый.25Глицериново-нитратный агар.Рост умеренный. Субстратный мицелийцвета слоновой кости, Образуются метелкопо.добные тела. Воздушный мицелий умеренный,белый, Растворимый пигмент отсутствует,Глюкозо-аспарагиновый агар.Рост умеренный, Субстратный мицелий отзолотистого до ярко-желтого. Воздушный мицелий скудный, белый. Растворимый пигмент ярко.желтого цвета. 35Глицерино-аспарагиновый агар.Рост умеренный .Субстратный мицелий цве.та слоновой кости, образуются метелкоподоб.ные тела. Воздушный мицелий скудный, белый,Растворимый пигмент отсутствует.40Крахмальный агар.Рост умеренный. Субстратный мицелий цветаслоновой кости до желтого, образуются метелкоподобные тела. Воздушный мицелий скудный,белый. Растворимый пигмент отсутствует.45Агар с малатом кальция,Рост умеренный,.субстратный мицелий цвета слоновой кости, образуются метелкоподобныетела. Воздушный мицелий умеренно белый, доцвета слоновой кости. Растворимый пигментотсутствует,Агар с дрожжевым солодовым экстрак.том,Рост умеренный. Субстратный мицелий ко.ричневатый до ярко-желтого, образуются метелкоподобные тела.Воздушный мицелий умеренный, белый,дсцвета слоновой кости. Растворимый пигментотсутствует. 4Овсяно солодовый агар.Рост умеренный, субстратный мицелий цвета слоновой кости до желтого, образуютсяметелкоподобные тела. Воздушный мицелий скудный, белыйдо светло-желтого. Растворимыйпигмент отсутствует.Пептонный агар с дрожжевым экстраком и железом.Рост умеренный. Субстратный мицелий колониальный желтый. Воздушного мицелия нет,Растворимый пигмент колониальный, желтый.Тирознновый агар,Рост умеренный. Субстратный мицелий цвета слоновой кости, образуются метелкоподобные тела, Воздушный мицелий умеренный,белый,до цвета слоновой кости. Растворимыйпигмент коричневого цвета.Физико-биохимические признаки,Растет при температуре 12 - 38 С, хорошийрост воздушного мицелия наблюдается при20 35 оСЖелатину разжижает,Крахмал гидролизует,Нитраты восстанавливает.Молоко пептонизирует, но не коагулирует,Козеин разлагает.Меланоидные пигменты на пептонном ага.ре с экстрактом дрожжей и железом непроизводит, на тирозиновом агаре производит.Тирозин разлагает.Ксантин и гипоксантин не разлагает.Хорошо растет и усваивает О-ксилозу, О.глюкозу, маннозу, фруктозу, сахарозу, трегалозу, у;ваивает Е.арабинозу, О.галактозу, 1 -рамнозу, мелибиозу, растворимый крахмал, Слабо растетна мальтозе, раффинозе, глицирине.Не усваивает лактозу, инозитол, О-сорбитол,Среда, применяемая для культивированияантибиотика может быть как плотной, так и жидкой, и содержать источники углерода и азота,которые штамм может ассимилировать и перева.ривать, Кроме того, среда содержит неорганические продукты и микроэлементы.В качестве источников утлерода используютглюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, декстрин,крахмал, глицерин, маннит, сорбит, жиры и масла (например соевое масло, свиное сало, куриный жир).Источником азота может быть, например,мясной экстракт, дрожжевой экстракт, сухиедрожжи, соевое молоко, жидкость от замачивания зерна, пептон, мука из хлопковых семян,истощенная меласса, мочевина, соли аммония,например сульфат аммония, хлорид аммония,нитрат аммония, ацетат аммс 1 ня. Среда можеттакже содержать соли натрия, калия, кальция,магния, железа, марганца, цинка, кобальта, никеля, соли фосфорной и борной кислот и сслиорганических кислот, такие как ацетаты и лро.5 74 пионаты. Среда в качестве добавок может содер. жать различные аминокислоты, например глутаминовую и аспарагиновую кислоты,алании,глицин, лизин, метионин, пролин), пептиды, вита. мины, например В В 2, никотиновую кислоту В,2, С, Е), нуклеиновые кислоты (например пурин, пиримидин и их производные).,Пля установления рН среды туда добавляют неорганическую или органическую кислоту, щелочь, буфер. В качестве противовспенивающих аген тов могут быть добавлены подходящие количест. ва масел, жиров, новерхностно-активных веществ.Культивирование проводят в любых условиях: стационарно, при встряхивании, погруженых, аэробных и др, Условия культивирования зави сят от условий и состава среды, штамма, методики культивирования и других факторов; предпочтительно проводят инкубацию при 20-35 С при первоначальном рН около 7,0.Предпочтительной является температура 23 - 35"С при первоначальном рН 6,5 - 7,5.Инкубышю продолжают до тех пор, пока содержание антибиотика не станет максимальным, Для культивирования при встряхивании или аэроб. ного погружного культивирования в жидкой среде 25 требуется 48 - 144 ч.Антибиотик накапливается в ферментацион иом бульоне как внеклеточно, так и внутриклеточно. Его определяют с помощью тонкослойнои хроматографии.ЭО Ферментативный бульон разделяют на клет.ки и фильтрат с помощью фильтрования или центрифугирования, Фильтрат зкстрагируют такимже образом этилацетата. К клеткам прибавляют35такое же количество 70%-ной смеси ацетонвода, как и фильтрата, а после одночасового пере.мешивания при 20 сС суспензию фильтруют, Иэфильтрата удаляют ацетон и полученный водныйраствор экстрагируют этилацетатом. Каждый изэкстрактов концентрируют до 0,01 объема и подвергают тонкослойной хроматографии на стеклянной пластине с силикагелем, Система растворителей: хлороформ. метанол 9:1. Активность,определяют по интенсивности пятен, определяемой45при облучении УФ-излучением при 2537 Х.Антибиотик выделяют и очищают с помощьюадсорбентов, таких как активированный уголь,макропористые неионные смолы, силикагель,окись алюминия или экстракцией растворителем.ЯРастворителями, пригодными для экстракции фильтрата, могут быль несмешивающиеся сводой органические растворители, такие как сложные эфиры жирных кислот, например этилацетати амилацетат, спирты, например бутанол, галоидированные утлеводороды, например хлороформ,и кеитоны, например метилизобутилкетон,Экстракцию проводят нри значении рН, близкомк нейтральному, предпочтительно устанавливают 804 6 рН культуральной жидкости, равным 7, и экстра. гируют этилацетатом. Экстракт промывают водой и концентрируют при пониженном давлении. Затем к концентрату прибавляют такой непо. лярный растворитель, как петролейный эфир или гексан, и собирают сырой продукт,содер. жащий активное соединение. Очистку проводят адсорбционной хроматографией, предпочтительно используют силикагель. Проявление прово. дят, начиная с петролейного эфира и гексана, а элюирование антибиотика осуществляют при добавлении полярного растворителя, такого как этилацетат, ацетон, этанол или метанол, При использовании силикагеля 0,05 - 0,2 мм) в качестве носителя проводят хроматографию на колонке с серийным увеличением отношения гексана к этилацетату. Отбирают образец элюата и исследуют с помощью тонкослойной хроматографии и фракции, содержащие антибиотик, объединяют и концентрируют при пониженном давлении. Затем к концентрату прибавляют петролейный эфир или гексан, в результате чего получают сырой продукт, Так как этот продукт содержит примеси, продолжают его очистку. Очищают его с помощью второй колонки с силикагелем, используя систему растворителей. Проявляющая система состоит из галоидированного углеводорода, такого как хлористый метилен или хлороформ, с добавкой полярного растворителя, такого как спирт, например метанол или этанол, кетона, как ацетон или метилэтилкетон, Таким путем вьщеляюг антибиотшс.При использовании макроскопической адсорбирующей смолы в качестве очищающего средства для сырого продукта, элюирование антибиотика осуществляют смесью воды с низшим спиртом, низшим кетоном или сложным. эфиром. Низшим спиртом может быль метанол, этанол, нропанол или бутаиол, а низшим кетоном может быть, например, ацетон или метилзтилкетон. Спожным эфиром - этилацетат,Сырой продукт растворяют в 60%-ной омеси метанол -вода и адсорбируют на колонке;Дайон нР.Колонку промывают 70%-ной смесью метанол -вода, а затем проводят элюирование 90%-нойсмесью метанол - вода. Таким путем антибиоппсэлюируют из колонки, Фракции, содержащие антибиотик, объединяют и концентрируютпри пониженном давлении. К сухому продукту добавляют 5-8 объемов этилацетата и смесь оставляют стоять до отделения кристаллов антибиотика. Эти кристаллы антибиотика содержатнесколысо активных компонентов С 15003,Ри Р 4, Их затем отделяютдрут от друга с помощью адсорбента. Используя сипикагель или макропористую неиониую адсорбирушцую смолу и растворители, можно элюировать необходимый компонент. Например, при исполь.зовании силикагеля проявление проводят гек741804 8саном, этилацетатом или хлороформом-метано- рования, включающего использование 60%-нойлом, в результате чего активные компоненты смеси метанол-вода и 95%-ной смеси метанол.С 15003, Р, Р.З и Р-З, выделяют в таком вода с добавкой 5% хлористого натрия, Р-З,порядке. После определения тонкослойной хро- Ри Рпоглощаются в указанном порядке.матографией фракции, соответствующие С.15003, 5 После отбора образцов и определения с помо.Р, Р.З и Рсоответственпо, концентрируют щью тонкослойной хроматографии каждуюпри пониженном давлении и к концентратам группу активных фракций концентрируют приприбавляют этилацетат. Активные компоненты пониженном давлении и кристаллизуют нз зтилмогут быть получены в виде кристаллов. При ацетата, Выделенные кристаллы содержат этил.использовании макропористой неионной адсор О ацетат как кристаллизацнонный растворительбирующей смолы может быть применен гради- и после сушки над пятиокисью фосфора приент элюирования с изменением соотношения 70 С в течение 8 ч показывают физические испирта, кетова или сложного эфира и воды. химические свойства, данные которых приведеНапример, с помощью метода градиента злюи. ны в таблице,741804 ь а ь" со а со а сч ь л МлЧ ь 8 ч ч ьиьси со щсиВЧаьсо Ох й фв 0х ф я-х О аь со м со ю сч ьч сО Гл " а В/ ф ь ч 3 ь лл ь 81ц Фх 0 С 1 л ось а . и Я Мо йРР р со ьь сч оьосч асг) (4 00щ а сосч счр, й ф О их ц Йфь 3 Б: о э Рй ЮЭ 3 л Р оЯ фффллфо 3Д Гфдв чсей г 4 сод а со ьаь. л ьфЯ е ч льаь со РЪ л л лл )4днам при перемешиваюш с 500 об. ч. беэволного сульфата натрия и конпевгри 1 ую 1 припониженном давлении до объема 200 об.ч.К концентрату прибавляют пстролсйный эфири отфильтровывают нерастворимые продукты;фильтрат перемешивают с 1 О об. ч. силикагеляи отгоняют этилацетат нри пониженном давле.нии, Остаток помещают в верхнюю часть колонки с силикагелем (400 об, ч,). Элюированиеосуществляют с помощью 500 об. ч. гексана,500 об. ч. смеси гексан этилацетат (3:1),500 об. ч. смеси гексан.этилацетат (1:1),500 об. ч. смеси гексан-этилацетат (1:3),500 об. ч, этилацетата и 1000 об. ч. смесиэтилацетата с метанолом (50:1), собирая. элюатфракциями по 100 об. ч,Одну часть каждой фракции концентрируютдосуха и к концентрату добавляют О,1 об. ч.этилацетата, получая смесь. Смесь наносят в виде пятна на расстоянии 2,5 см от нижнего краястеклянной пластины с силикагелем и проявляют примерно 17 см в системе растворителейэтилацетат-метанол (19:1). После проявленияпроводят определение в ультрафиолетовом свете,Объединяют активные фракции 1 ЧО 23.Х 28с ГИ 0,6.0,65 и концентрируют их при пониженном давлении примерно до 20 об. ч. К этомуконцентрату прибавляют 150 об. ч. петролейногоэфира для получения 15 об. ч. продукта.П р и м е р 4. Экстрагируют при переме.шивании 32000 об. ч.влажных клеток, полученных в примере 3, 50000 об, ч. 70%-ногораствора ацетона в воде. Затем фильтруют нафильтре, работающем под давлением. Сноваповторяют экстракцию и фильтрование, Объеди.няют фильтраты и отгоняют ацетон при пониженном давлении. Прлученную водную системупропускают через колонку с 5000 об. ч. ДайонанР .10, Колонку промывают водой и 50%-нымводным метанолом, после чего элюируют15000 об. ч. 90%-ного метанола в воде. Элюатконцентрируют при пониженном давлении до3000 об. ч. и встряхивают с таким же коли.чеством воды и этилацетата, вновь повторяютпроцедуру. Объединяют этилацетатные соли, промывают водой, сушат при добавлении безводногосульфата натрия и концентрируют при пониженном добавлении до 200 об. ч. После прибавления петролейного эфира отфильтровывают осадок.Полученный продукт очищают на колонке с силикагелем, собирая 8,0 об. ч. сырого продукта.П р и м е р 5. В 10 об. ч. этилацетатарастворяют 1,5 об, ч. сырого продукта, полученного в примере 3, и хорошо перемешивают раствор с 4 об. ч. силикагеля. Отгоняют этилацетатпри пониженном давлении, Остаток наносят наверхнюю часть колонки с 300 об. ч. силикагеляи колонку промывают сначала 500 об. ч. хлороформа, а затем элюируют 500 об. ч. смеси хло 3яРовый ангибиоик облалает активностью ивибиров;нв 1 я 1 оста против микроорганизмов,кнолас вызывают болезни растений,Лнгибиотик и его компоненты обладаютпротивоопухолевой активностью 200% при лээе50,00625 мг/кг/день.В испытании на острую токсичносгь на мышахпри внутрибрюшинном введении .Оо составляет 0,33 мг/кг.Антибиотик обладает сильной ингибируюшейактивностью против грибков и простейших иявляется ценным для борьбы с грибками и простейшими.Антибиотик может быть использован для ле.чения болезней растений, вызванных микроорга.низмами.П р и м е р 1.Штамм йосагда С.15003(ЯРО 13726, РЕЯМ 3992, АТСС 31281), выращенный на среде (агар с дрожжевым и солодовым экстрактом)используют для инокулирования ферментера емкостью 200 об.ч., содержащего40 об.ч. засеваемой культуральной среды (2%глюкозы, 3% растворимогр крахмала, 1% сыройсоевой муки, 1% жидкости от замачивания зерна, 0,5% полипептона, 0,3% йаС, 0,5% СаСОэ) 25рН 7,0). Инокулированную среду инкубируютпри 28 С в течение 48 ч для получения посевнойкультуры. 0,5 об. ч. полученной . посевной культуры переносят в ферментер, содержащей 40 об.ч.ферментационной среды, состоящей из 5% декстрина, 3% жидкости от замачивания семян кукурузы, 0,1% полипептона и 0,5% СаСОз, рН 7,0;культивируют при 28 С в течение 90 ч, получаяинокулят (посевную культуру), Посевная культура имеет титр 25 мг/мл.П р и м е р 2. Порцию из 10 об. ч. посевной культуры, полученной в примере 1, переносят в ферментер емкостью 2000 об. ч., содержащий 500 об, ч. посевной культуральной средыиинкубируютпри 28 С в течение 48 ч. Переносят 500 об. ч, полученной культуры в танк изнержавеющей стали емкостью 50000 об. ч., содержащий 30000 об. ч. посевной культуральнойсреды и культивируют при 28 С в условияхаэрации для получения посевной культуры. Этукультуру используют для посева в танк емкостью200000 об, ч., содержащий 100000 об.ч. ферментационной среды, подобной той, что использовали в примере 1, при степени инокулирования10%, Засеянную среду инкубируют при 28 С вусловиях аэрации. Полученная культура имееттитр 25 мг/мл.П р и м е р 3. К 95000 об, ч. культуры,полученной в примере 2, добавляют 2000 гГифлосуперселя и после тщательного перемешивания смесь фильтруют. Затем фильтрат экстрагируют 30000 об. ч. этилацетата. Эту процедуру повторяют снова. Объединяют этилацетатныеслои, дважды промывают 30000 об.ч. воды,741804 10 15роформ-метанол (50:1), 500 г смеси хлороформ. метанол (20:1) и 500 г смеси хлороформметанол (10:1) . Элюат собирают. фракциямипо 25 об. ч,Концентрируют при пониженном давлении50,5 об. ч, каждой фракции. К концентратуприбавляют 0,05 об. ч. этилацетата и смесь используют как образец для тонкослойной хроматографии на силикагеле (проявляющая система:хлороформ-метанол 9:1),Фракции Я 39 и 40 при 2537 А в зоне В 10,50-0,60 собирают и концентрируют досухапри пониженном давлении. К остатку прибавляют 2 об, ч. этилацетата и оставляют смесьстоять, в результате чего получают 0,150 об, ч.кристаллов антибиотика.Растворяют кристаллы антибиотика в. 15 об,ч.метанола, затем прибавляют 0,306 г хлористого натрия и 15 об. ч. воды, Набивают колонку200 об. ч. Дайона рНи калибруют 600 об,ч.50%-ного раствора метанола в воде, содержащего 50% хлористого натрия. Образец приготовленного выше раствора пропускают через колонку и проводят элюирование, используя1500 об. ч. 60%-ного метанола в воде, содержащего 5% хлористого натрия и 1500 об. ч. 95%ного метанола в воде. Элюат собирают фракциями по 15 об. ч. и каждую фракцию исследуютс помощью тонкослойной хроматографии иасиликагеле. Фракция 145-153 содержат компоненты СР-З, фракции 167-180 содержатСРи Р, а фракции 185-190 содержатСР,Каждую группу фракций концентрируют ирастворяют, добавляя 50 об. ч. воды и100 об, ч. этилацетата. Раствор встряхивают вделительной воронке и отделяют водный слой.После промывки дважды 50 об, ч, воды этилацетатный слой сушат над безводным сульфатом натрия, концентрируют и оставляют стоять.По описанной выше методике получают кристаллы из каждой группы фракций, Кристаллы собирают фильтрованием, сушат и получают,об. ч.:СР0,070СР, Р0,018СР0,0151Смесь кристаллов СРи Р(0,018 ч)растворяют в 0,3 об.ч. этилацетата, наносятв виде пятна на линию на расстоянии 2,5 см от50нижнего края стеклянной пластинки с силикагелем, затем проявляют смесью этилацетата сметанолом (19:1). После проявления примерно 18 см выскабливают полосу абсорбции приВ 1 0,68 (Р) и В 1 0,65 (Р 4), каждую независимо экстрагируют этилацетатом, содержащимнезначительное количество воды. Полученныйэтилацетатный экстракт промывают водой,сушат над безводным сульфатом натрия, кон. центрируют при пониженном давлении и остав.ляют стоять.Получают 0,010 об. ч. кристаллов С Ри 0,003 об. ч. кристаллов СР-З, изфракции В 1 0,68 и ВТ 0,65 соответственно.П р и м е р 6. Инокулируют 1000 об. ч.культуры примера 2 в танк из нержавеющейстали, содержащий 100000 об. ч, посевнойкультуральной среды; засеянную среду инкуби.0руют при 28 С в условиях аэрации и перемешивают в течение 48 ч. Затем полученнуюкультуру переносят в танк емкостью2000000 об. ч., содержащий 1000000 об. ч. ферментационной среды, подобной той, котораябыла использована в примере 1. Культивиро.ванне проводят при 28 С в условиях аэрациии перемешивании при внутреннем давлении1 кг/см в течение 90 ч. Полученная культурагимеет титр 20 мг/мл, К 90000 об. ч. полученной культуры добавляют 900000 об. ч, ацетонаи после перемешивания в течение 1 ч прибавляют 20000 об, ч. Гифлосуперселя, Смесь затемперемешивают и фильтруют на фильтре, работающем под давлением. К 1700000 об. ч. колученного фильтрата прибавляют 500000 об. ч.воды и смесь экстрагируют 1000000 об. ч, этилацетата. Этилацетатный слой промывают водой,сушат, прибавляя безводный сульфат натрия иконцентрируют при пониженном давлений. Кконцентрату добавляют птеролейный эфир исобирают полученный осадок фильтрованием и,сушат, Собирают 65 об. ч. сырого продукта.После этого сырой продукт очищают и получают 9,5 об, ч. СР-З, 0,300 об.ч.СРи 2,5 об,ч. С.15003 Р П р и м е р 7. Растворяют в 1 об ч, тетрагидрофурана 0,015 об. ч. кристаллов антибиоти.ка С, полученных в примере 5, после чего охлаждают раствор до 5 С и прибавляют0,012 г литийалюминийгидрида. Смесь оставляютстоять на 2 ч. Затем прибавляют 0,5 об. ч.1%-ного водного раствора серной кислоты, реакционную смесь экстрагируют 2 об, ч. этилацета.та. Этилацетатный слой промывают водой, сушат,добавляя безводный сульфат натрия и концентрируют при пониженном давлении. Проводяттонкослойную хроматографию на силикагелес концентратом, выскабливают зону с Вт 0,250,3 и экстрагируют этилацетатом с незначительным количеством воды. Экстракт промываютводой, сушат над безводным сульфатом натрияи концентрируют при пониженном давлении.после чего отделяют кристаллы. Кристаллыотфильтровывают и сушат. Получают 0,010 об.ч.С, плавящегося при 174 С. Элементарный анализ:Найдено,%: С 59,65; Н 658; Й 5,02;С 6 6,51;741804 18Предлагаемый способ позволяет получитьновый антибиотик, который найдет применениев медицине и ветеринарии,Формула изобретенияСпособ получения антибиотика общей формулы 1- С.О- СНф- СНасн,или- СН- СН о т л и ч а ю щ и й с я тем, что штаммйосагда С(АТСС 31281, ЛРО 13726,АТЕЯМ 3992) выращивают на питательной среде,оставитель С. МалютинаТехред М Кузьма Корректор В. Бутяга едактор Л. Емельянова/57ЦН Тираж 522 ИПИ Государственного ко елам изобретений и откр Москва, Ж, РаушскаяЗаказ Одписное ета С тии б., д. 4/5 1303 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, П тн 17Вычислено,%: С 59,52; Н 6,60; М 4,96;С 6,27.ИК-спектр 1715, 1670, 1580 (см ),УФ(нм): 232 (32750), 244 (3 И 30850),252 (31650), 281 (5750), 288 (5700). О содержащей источники углерода и азота последующим вьщелением целевого продук