Способ получения антибиотика

3"есОюз:- лч О ПИ",СА"НИ Е ИЗОБРЕТЕН ИЯ р) 46926 Союз Советских Социалистических Республик(33) СШАОпубликовано 30,04,75, Бюллетень М 16 Государственный комитет Совета Министров СССР по делам изобретений(088.8) и открытии опубликования описания 03.09.75 72) Авторы изобретения ИностранцыМартин Пауль Кунстман и Джо(71) Заявите аКомпани ПОЛУЧЕН ТИБИОТ(54) СП ение антибио чистку.азначен в каитью для доАМк 374. 20ьтуры Ыг,ипов средний, о-декстрозном вом растворе елий е цепи змеромспор гл разу- ллип 0,5 - дкая.(61) Зависимый от патента 1Изобретение относится к способам получения антибиотиков сельскохозяйственного назначения путем культивирования продуцентов группы Ягер 1 отусез,Предлагается способ получения антибиотика 5 на основе культивирования Ыгер 1 огпусез еЬцгозрогецз и. зр. (МЯК 1. 3582) в аэробных условиях на жидкой питательной среде, содержащей источники усвояемого углерода, усвояемого азота и минеральные соли, при темпе ратуре 25 - 29 С в течение времени, необходимого для придания культуральной среде существенной антимикробной активности. Способ включает также выделтика и, при необходимости, егоПолучаемый антибиотик преднчестве добавки к корму и/или пмашних животных и птицы.Антибиотик условно названМорфологические свойстваеЬцгозрогецз.Рост на средах большинства тзначительный на картофельнагаре, незначительный на агароЧапека.Разбросанный воздушный миет длинные изогнутые и спутаннтических и удлиненных спор р- 0,6 К 1,0 - 1,3 мк. Поверхность Цвет мицелия в большинстве сред беловатый, переходит в цвет слоновой кости до очень светлых оттенков в областях формирования спор,Растворимые пигменты желтоватые в различных средах, отсутствуют в растворе Чапека, в аспарагиново-декстрозном агаре и на среде крахмал - неорганические соли - агар.Обратный цвет в большинстве сред желтоватых тонов.Физиологические признаки.Нитраты не восстанавливает. Желатнну разжижает полностью за 7 дней. На железо-пептоновом агаре меланин не образует,Хорошо усваивает 1-арабинозу, а-фруктозу, у-инозитол, лактозу, а-маннитол, а-мелибиозу, салицин, а-треголозу, а-ксилозу; плохо усваивает или совсем не усваивает 1-рамнозу, адонитол, а-мелезитозу, а-раффинозу и саха- розу.На основании результатов исследования общих характеристик микроорганизм включен в род стрептомицетов. Сравнение культуры ХКК 1. 3582 с известными образцами стрептомицетов показало сходство основных таксономических признаков.Некоторые характеристики 31 г. а 1 Ио 11 ачцз и Яг. адог 11 ег совпали с соответствующими характеристиками культуры 1 чКК 1. 3582, однако исследования показали наличие принципи-.469265 43582 относится к типу Кес 1 цз - Гехш 111 з, в товремя, как морфология двух других образцовотносится к типу Яр 1 га,Таким образом, культура ХККГ. 3582 на 5 столько отличается от других стрептомицетов,что вполне может быть выделена в отдельныйвид. Таблица 1 5 г. еЬцгозрогецз Кйй. 3582БГг. а 11 Ыойагцз Показатель БГг, аоог 1 тег Короткие, спиралеобразныеСферические Спорофоры форма спор Длинные, спутанные и изогнутыеОт эллиптических до удлиненныхПолноеВ большинстве желтоватыеЖелтоватый; воздушный мнцелий беловатый, редкий БыстроеВ большинстве желтоватые МедленноеВ большинстве коричневатыеОт кремового до коричневого воздушный мицелий обильный, кремового цвета Разжижение желатина Растворимые пигменты Коричневатый; воздушный мицелий становится беловато- желтым Рост на аспарагиндекстрозном агаре Мука соеваяЦерелозаНатрий хлористыйКарбонат кальцияРастворимые дистиллятызернаВода 10 10 5 115 В каждый чан засевают от 3 до 10% посевного материала, полученного указанным вышеспособом, Аэрацию осуществляют из расчета0,5 - 1,0 л стерильного воздуха на 1 л пита 20 тельной среды в 1 час.Г 1 еремешивание среды проводят со скоростью 200 в 4 об/мин, температуру поддерживают в диапазоне 25 - 29 С, предпочтительно около 28 С. Брожение ведут в течение25 65 - 90 час,После брожения смесь, содержащую антибиотик, фильтруют при рН для удаления мицелия. Фильтрацию можно проводить с помощью диатомовой земли или любого другогоЗО фильтрующего средства.Осадок мицелия промывают водой, а вытяжку промывной воды осуществляют вместес фильтром. Активный антибиотик адсорбируется на Дарко Стили на другом подходя 35 щем виде растительного или животного угляс использованием, например, 0,5% (вес/объем) адсорбента, Активный антибиотик, оставшийся на угле, может быть элюирован путемперемешивания угля в течение -30 мин с40 40%-ным водным раствором ацетона, доведенного с помощью концентрированной сернойкислоты до рН 2, Объем элюата составляет- 1/4 первоначального объема,Концентрирование элюата производят при45 пониженном давлении; объем жидкой фазысоставляет -1/20 первоначального объема.Величина рН этой фазы устанавливается 5,5 спомощью гидроокиси бария, а образующийсяосадок сульфата бария удаляют фильтрацией,20 105 До 1000 (мл),альных различий между этими культурами (см. табл, 1)Кроме того, следует отметить, что для культуры 1 чКК 1. 3582 характерно большее ограничение роста в различных средах и более разбросанный характер спорообразования,Из табл. 1 видно, что морфология тчККГ. Выращивать Ыг, еЬцгозрогецв можно в од. ной из многочисленных жидких сред, которые содержат: ассимилируемый источник углерода (крахмал, сахар, кормовая патока, глицерин и т. д.), ассимилируемый источник азота (протеин, гидролизат протеина, полипептиды, аминокислоты, кукурузный экстракт и т, д.), неорганические анионы и катионы (калий, натрий, кальций, сульфат, фосфат, хлорид и т, д.). Следы таких элементов, как бор, молибден, медь и т. д. попадают в среду в составе нримесей других компонентов.Аэрацию в чанах и бутылях осуществляют путем принудительной подачи стерильного воздуха в среду, В случае необходимости может быть добавлен пеногаситель, например 1%-ный раствор октодекана в опеомаргарине из свиного сала.Приготовление маточной культуры,Культуру Яг. еЬцгозрогецз высевают в колбы объемом 500 мл, заливая в них по 100 мл стерильной жидкой среды с соскобами или смывами спор со скошенного агара,Обычно используют среду следующего состава (г):Кормовая патокаГлюкозаБактопептонВода Колбы ставят на инкубацию (температура 25 - 29 С, преимущественно 28 С, перемешивание) на 20 - 48 час,Полученную культуру используют для ипокуляции среды того же состава, разлитой по 1 л и по 12 л в стеклянные ферментеры, объемом 2 и 20 л соответственно, Брожение ведут 20 - 48 час при интенсивной аэрации. Полученный инокулиум используют для инокуляции бродильных чанов.Для получения антибиотика используют среду следующего состава (г): Длинные, прямые, ветвящиеся; образу ют спиралиСферические, 250250250250250 , 250 250 250 55 60 65 Объем фильтрата снижают до 400 - 800 мл. После этого концентрат превращают в суспензию подкисленной окиси алюминия, используя - 1/5 количества окиси алюминия (в граммах) по сравнению с объемом концентрата, Суспензию сливают через подходящую колонну подкисленной окиси алюминия (с использованием примерно десятикратного количества окиси алюминия по сравнению с загр жаемым), увлажненной метанолом.Активный антибиотик смывают с колонны водным раствором метанола (концентрация 25 - 50%). Соответствующие активные фракции собирают, смешивают и концентрируют в малом объеме 1 л) при пониженном давлении. Величину рН указанного концентрированного вещества устанав.пивают 6,0 - 6.,5 с помощью гидроокиси бария. Затем повторно удаляют путем фильтрации осадок сульфата бария, после чего лиофилизирчют чистый фильтрат до сырого антибиотика АМ 374. После лиофилизации материал подвергается дальнейшей очистке с помощью кроматографии на колонне с соответствующей ионообменной смолой, например, СМ Сефадекс С(Н-форма). Промывку колонны осуществляот, например, разведенным раствором серной кислоты.Элюат, содержащий активный антибиотик, поглощение которого лежит в области 280 ммк, доводят до рН 6,3 с помощью гидпоокиси бария. Образующийся осадок сульфата бария учаляют фильтрованием, а фцльтрат концентрируют в объеме - 30 - 80 мл, рН раствора чстанавчивают 8,0 с помощью смолы 1 К 45 (ОН - ). Затем удаляют фильтрованием. Фильтрат добавляют к большомч колцчествк ацетона при перемешивании.Формируемый осадок выделяют фильтрованием, промывают ацетоном и высупивают при средней температуре и пониженном давлении ло получения антибиотика АМ 374 в основной форме.Микроаналитическую пробу готовят путем осаждения АМ 374 из метанольного или этанольного ацетона и высушивания осадка при глчбоком вакууме (10 мм - ) и температуре 100 С в течение двух суток, Основной антибиотик АМ 374, приготовленный указанным способом, имеет следующий э,чементарный состав (вес. % ):Углерод 54,82Кислород 29,01 Азот 7,60Водород 7.10Хлор 2,47.Материал не имеет определенной точки плавления, постепенно разлагается прп температуре, превышающей 250 С; (сс о 102.4-2,9 (с=1,045, в воде).Максимум ультрафиолетового спектра приходится на:282 ммк (Егс =42) в кислых растворак.7 п: 282 ммк (Е 1, =42,5) в нейтральнык растворак,1,305 ммк (Е 7,=51,5) в основцык растворак,260 ммк (Е 1,=92) в основных растворак.Спектр поглощения основного АМ 374 в гранулак КВг, приготовленнык стандартным способом, имеет длины волн (мк):3,0; 3,45; 6.0; 6,20; 6,30; 6,67; 6,68; 7,05; 7,22;7,35817; 7,52; 7,67; 8,2; 8,6581 ч; 8,85; 9,45; 9,75;9,90; 10,45 эЬ; 11,07; 11,5; 12,0; 12,35; 13,35;14,4.В раствопитсляк (пН 6,0), чказапцык ниже, при использовании Вас. яцЬИ 1 в цли СогупеЬас 1 егшгп кегоэ 1 в в качестве тест-организмов значения Ь слечующие: 5%-ный водный раствор хлористого алюминия (ХН,С 1) - 0,90; система растворителей (вес. ч.): пирцдиц 2, Я- коллидин 2, сукой 6 танол 1, вода 1, - 0,20.Антибиотик АМ 374 легко растворяется в воде и диметилсульфоксцде, плохо растворяется в метаноле и егце в меньшей степеци в этаноле.Данные о противомикробной активности АМ 374 и его гидролизата приведены в табл. 2 5 аруососспя апгепя АТСС 6538 р81 ар 7 уэсосспя апгепя,Чя 6951 арЬтсосспя апгепя, ЙояеАТСС 14154Яар 7 тососспя апгепя, Яп 1АТСС 1370951 гср 1 ососспя руодспся С 20351 гер 1 осасспя 1 ассаИя АСС 804381 гер 1 зсосспя яр. исгеполитичсскиоБ гер 1 ососс па . р-тсислитичсскиКз 80Мт соьас 1 сгпги яшсе:па 1 я АТГГ 607Яа 1 поп Иа 1 уриояа а гГС 6539Рго 1 епя пОагя АТСС 9484ЕясЬегяЫа соИ;1 УК 1 еЬяе 1 а рпелпопае щтамм АДЕясЬегсЫа соИ311Еп 1 егоьас 1 ег аегооспея М 75Ряепсоптопая аегорпоза АСГ 10145 Противомцкробцую активность и ччо антибиотика АМ 374 испытывают на мышах (20 в каждом варианте), которых заракают Яар 1 чу 1 ососсцэ ацгецэ (штамм Смита и штамм Роуз), Ягер 1 ососсив р 1 одепеэ С 203 ц Рр 1 ососсцэ рпешпоп 1 ас Ю 1. Учет результатов производят через 14 дней после заражения. Все мыши, которым вводился антибиотик АМ 374, живы; цз зараженных контрольных мышей, не подвергавшихся лечению, 95 - 100% погибли в течение 5 дней после заражения.Противомикробную активность продукта гидролиза АМ 374 и ч 1 чо испытывают на 5 мышах, которых заражают ЯарЬу 1 ососсця ацгеця (штамм Смита). Учет результатов проводят через 14 дней. Всем мышам вводили продукт гидролиза АМ 374, все мыши выжили.Способ получения антибиотика АМ 374 осуществляют следующим образом. Приготавливают среду состава (г):Кормовая патокаГлюкозаБактопептонВода 20 10 5 До 100 (мл).Смыв или соскоб с косого агара Яг, еЬцгоярогеця использчют для инокуляции двух колб (объем 500 мл), каждая из которых содержит 100 мл указанной среды, Содержимое колб переменивпот 48 час ппи темпепатчре 28 С. Полчченный инокчлим пепеносят в стекляный 1 епментеп (обьем 19 л 1, содержащий 12 л стерильной среды. Аэпапию стерильным воздухом пповолят в течение всего пепиода роста (-48 час), после чего содепжимое ферментера используот лля засева бродильного чана (объемом 300 л) . Среда для брожения содерткпт (г):Мука соеваяЦерелозаХлопистый натрийКапбонат кальцияРастворимый дистпллятзерна 5Воды До 1000 (мл) . 1 О 1 О 5 1Ппиготовленную средч стер илизуют при 120 С папом пол лавлепием 6.8 кг в течение 45 - 60 митт. После степилизации пН спелы 66. Затем 300 л степильтой спелы, находящейся в чане, засевают 12 л инокуличма. полчченттого панее.Бпокетие лповолят ппи 28 С с использованием масла Холаг 1.Св качестве пеногасителя. Интенсивность аэпации 0.5 л степильного воздчха на 1 л смеси в 1 мин. Смесь пепемешивают со скоростью 300 обмин ппопеллепной мешалкой, По истечении 70 час брожение заканчивается.300 л смеси после брожения фильтпчт через фильтр 2% (вес/объем) с диатомовой землей, ппедварительно доведл рН до 6.0 с помощью гидпоокиси натрия.Активный антибиотик в вытяжке фильтпата и ппомывнчю водч алсорбипчют на 900 г Дапко 6-60: из счспензии чгля удаляют пветньте включетил пчтем пепемепиваттил с -30 -, 40 %-ного водного паствопа ацетона. Акттвпчю часть отлеллют от угля. перемешивая с 75 л 40% -ного водного пас.вора ацетона, доведенного с помоцью концентрированной серпой10 кислоты до рН 2,0. Суспензию фильтруют, :мыв концентрируют до объема -4 л, рН доводят до 5,2 гидроокисью бария. Осадок сульфата бария отфильтровывают, фпльтрат концентрируют до объема -700 мл, Из этогоконцентрата при;отовляют суспензио со 100 г подкисленной окиси алюминия, которую затем сливают на колонну, содержащую 1 кг подкисленной окиси алюминия в метаноле. Подкисленную окись алюминия приготовляют путем окисления водной суспензии глиноземаМерка концентрированной серной кислотойдо получения постоянного значения рН 3,0,фильтрования, промывки водой и метанолом15 и воздушной сушки. Затем колонну последовательно промывают 5 л метанола, 60 л 50 Оо-но; эводного раствора метанола, 10 л 25% -,ного водного раствора метанола.Соответствующие фракции, содержащие20 антибиотик АМ 374 и определенные пробойна С. хегоя 1 я, смешивают и концентрируютпри пониженном давлении до объема-500 мл, после чего доводят рН до 6,2 с помощью гидроокиси бария. Осадок сульфата25 бария отфильтровывают. Затем лтофилпзируют фильтрат для получения 5,1 г сыпогоант биотика АМ 374 (при чистоте от 20 до50%).Полученные таким образом 5 г антиби 30 отика АМ 374 растворяют в 30 мл воды и используют в колонне с СМ Сефадексом С(форма Н+). Из 250 г Сефадекса приготовляют суспензию в -3 л воды с доведением рНло 2,0 концентрированной серной кислотой.Избыточную воду сцеживают, а смолу несколько раз промывают водой. Суспензиюсливают в колонну (внутренний диаметр7,6 см) и дополнительно промывают 5 л водыдля удаления избыточной кислоты.40 Колоннч промывают 5 л воды, затем 4 лводы с рН 1,4, а затем дополнительно 4 лводы с рН, доведенным до 1,4 концентрированной серной кислотой. Фракции ( - 100 млкаждая) собирают, после чего измеряют био 45 логическую активность (С. хегоя 1 я) и поглощение ультрафиолетовых лучей (280 ммк)при разведении этих фракций от 1 до 100.Фракции 58 - 80, содержащие большуючасть антибиотика, объединяют, Величину рНэтой вытяжки доводят до 6,3 с помощью гидроокиси бария, осадок сульфата бария отфильтровывают с помощью диатомовой земли. Объем фильтрата доводят до -200 мл,затем его лиофилизпруют и получают 1,5 гсырого антибиотика.Сырой антибиотик растворяют в 50 мл воды, и доводят рН раствора до 8,2 с помощью1 Р 45 (ОН- форма),Суспензию фильтруют, фильтрат лиофили 60 зипчют. Полчченный мятепяал патво"лют в40 мл воды. после чего осаждают антибиотик400 мл ацетона, Кристаллический осадок отфильтровывают и растворяют в малом количестве метанола, Добавляют ацетон, и в осадок выпадает очиценный антибиотик469265 1 О 9АМ 374, который собирают фильтрованием.Выход 1,18 г.Микроаналитическую пробу приготовляютпутем осаждения АМ 374, полученного указанным выше способом, из этанольного ацетона и высушивания осадка в глубоком вакууме (10 -мм рт. ст) при температуре 100 С втечение двух дней.Преобразование основного АМ 374 в сульфат АМ 374.150 мг основного антибиотика АМ 374 растворяют в 70 мл подогретого метанола, к которому добавляют одну каплю смеси метанол+концентрированная серная кислота(1: 1). РН водного раствора АМ 374 6,3. Осадок отфильтровывают и промывают метанолом и ацетоном и получают 98 мг сульфатаАМ 374.Микроаналитическую пробу готовят, какуказано выше.Сульфат АМ 374 имеет следующий элементарный состав (вес, 7 о):Углерод 52,68Водород 5,85Кислород 30,35Азот 7,32Сера 1,45Хлор 2,35.ао =104+2,8 (с=1,075, в воде). Максимум ультрафиолетового спектра приходится на:282 ммк (Ет,=44) в кислых растворах,282 ммк (Етс, =43) в нейтральных растворах,т о305 ммк (Ет,=48) в основных растворах,И 260 ммк (Ет,=85) в основных растворах. Приготовленный такимАМ 374 имеет следующиистав (вес. Отто):УглеродКислородАзотХлорВочород способом хлорид элементарный со 52,20 28,02 7,24 6,33 6,21. Спектр поглощения АМ 374 инфракрасного излучения в гранулах КВг, приготовленных стандартным способом. имеет следующие длины волн (мк). 3,0: 3.45: 5,75 з 1 т: 5.90 зт;5,99; 6,03; 6.20; 6,32; 6,67; 6,78 з 1 т; 6.87; 7,05;7,20; 7,53; 7.65; 8.25; 8,65 з 1 т; 8,87: 9,45: 9,73;9,88 зЬ; 10,45; 11,05; 12,0; 12,35; 13,3; 14,4.Преобразование основного АМ 364 в хлорид АМ 374.20 г, базового антибиотика АМ 374 растворяют в 10 мл 0,1 н. соляной кислоты, концентрируют раствор до объема -2 мл при пониженном давлении. В процессе концентрации формируется микрокристаллический осадок, который после фильтрования повторно растворяют в минимальном количестве волы и снова переводят в осадок с помощью ацетона. После фильтрования осадок промывают дополнительным количеством ацетона и получают 116 мг хлорида АМ 374.Микпозттялиттчет кчю ттппбу пптиотитт т- т путем осаждения из водного раствора ацетона и высушивания осадка в глубоком вакууме (10 -мм рт. ст.) при 100 С в течение двух суток. ао = - 69+-3,6 (с=0,839, в воде). Максимум ультрафиолетового спектра приходитсяна:280 ммк (Ет, =46) в кислых растворах,280 ммк (Ет=51,5) в нейтральных растворах,160 300 ммк (Ет, = - 86) в основных раствора,т 260 ммк (Ет, =43) в осноттньтх растворах. Спектр поглоптения продуктом гидролизаАМ 374 инфракрасного излучения в грану 10 го 106+2,8 (с=,057. в воде), Максимум ультрафиолетового спектра приходитсяна:282 ммк (Ет, =42) в кислых растворах,282 ммк (Ей =39,5) в нейтральных растворах,305 ммк (Ет,=52) в основных растворах,тз 1 т 260 ммк (Ет, =-92) в основных растворах.20Спектр поглощения хлоридом АМ 374 инфракрасного излучения в гранулах КВг, приготовленных стандартным методом, имеетследутоштте длины волн (хтк): 3,0; 3,27: 3.40;25 5.75 зт. 590 зт: 5.98: 6.15: 6.28: 6.65; 6.82 с 1 т;7.03; 7.15: 7,50; 7.6: 8.25: 8.60: 8,83: 9.42; 9.70;9,88: 10.45 зт; 1.05; 11.9; 12,3; 13,3: 1497.Продукт гидролиза основного АМ 374 вкислой среде.З 0 1 г базового антибиотика ЛМ 374 раствпояют в 7.5 мл кипящей воды, и в оаствоп добавлятот 1.25 мл 5 н. солттнотт кислоты. Полученный раствор кипятят 2 - 3 мин, зятем чобавляют 2 мл 3 н. соляной кислоты. После охлаждения раствор ттильтруют и промывают осадок 3 мл 5 н. соляной кчслоты. Далее осадокснова растпорятот в воде и концентрируют доостатка. Эту операптпо ос.шествлятот ещедттажльт. после чего остаток осаждают пз вод 40 ного оаствооа ацето а, и по,чт тают 5 т 6 мгпродукта гттдполттза АМ 374 в кислой спеце,Мтткроаналтттттческую пробу готовят, какуказано вьцие.Получеттный поодукт гпдпо, тттза АМ 37445 имеет следующийэлементар ый состав469265 12 20 5 12 3 1 20 Таблица 3 Коэффициентт Увелпчегце выкива-привеса, ".,Кол честноДоза Привес за корма (г)частей,мпн, 20 суток, г на 1 гпривеса Отноп ение веса корма к привесу,о,Добавкав корч емости 29 30 30 30 39 40 18 20 266 284 288 302 ЛМ 374(Н) ЛМ 374(Н) 10 6,8 62 1.75 1,634,9 4,9 50 2,0 0,5 1,2 0,3 0,1 0,5. 35 355 40 лах КВг, приготовленных стандартным способ",и, имеет слс"дпю 1 цпе ллццы полн (мк): 3,0;3 0 э 1 3 "3 5 75 в 1 л 5,92 з 11. 6 0 6,15 Б 1 я: 6.2 о;6,48 в 1; 6,68; 6.8.; 7,03; 7,18; 7,5; 7,67; 7,95 з 1 ц 8,30; 8,55 в 11; 8,86: 9,15; 9.45; 9,9; 10,45 з 1;11 1 11 55 в 1 л, 11,9; 13,3; 14,4.Предлагаемый антцопотцк предназначен в качестзе добавки к корму цли питью для домашних животных ц птицы.П р ц м с р 1. Основной рацион домяшнец птицы включает следующие компоненты (г/кг живого веса):Кукурузное зерно:восковойспелости 514Масло соевое (44% ) с мукой 300 Клейковина зерна с мукой 50 Рыбная мка Менхадена (60%) 50 Жир (КЙО) 40 Об "з-: ксццяя люцсрцояя мука(17% )Известь (33% кальция)Дикальц гйфосфатХлористый натрийМинеральные примесиВитамины 5. П р ц м е р 2. Опыт проводят аналогичнопримеру 1. Рацион цыплят содержит (%):Зерно кукурузное восковойспелости 51,4Масло соевое (44%) с мукой 30,0Клейковина зерна с мукой 5,0Рыбная мука Менхадена (60%) 5,0ж. р (Кра) 4,0Обезвокенная люцерноваямука (17% )Известь (33% кальция)ДикальццйфосфатХлористый натрийМинеральные примесиВитамины В состав минеральных примесей входят (%): кальций 25,5, марганец 6,0, железо 2,0, цинк 2,0, йод 0,12, кобальт 0,2,Используют комплекс витаминов в следующих количествах (на 1 кг корма): витамин А 3300 ед.; витамин Д, 1100 ед.; витамин Е 2,2 ед.; хлористый холин 500 мг; Р 1.-метионин 500 мг; этоксикин 125 г; мгиниациц 27,5 г; пантотеновая кислота 8,7 мг; рибофлавин 4,4 мг; фолиевая кислота 1,43 мг; менадцон 1,1 мг; витамин В;, 0,011 мг,Б состав минеральных примесей входя 1(%): мя,танец 6.0, йол 0,12, железо 2,0, медь 05. цинк 2,0, коояльт 0.02 и кальций 25,5.Смесь витаминов содержит на 1 кг корма: 5 125 мг бутилированчого гидрокситолуола;50 мг Р 1.-метионцна; 3300 ед. витамина А;1100 сд, витамина Дз, 2,2 ед. витамина Е;11 мч. и-.ямш В,; 4,4 мг рпбоггтяпца; 7.6 мг нцяцпна; 8,8 мг гантотсновой кислоты;10 О м: х лопцдя; олцця; 1,43 м фолцевгй кисло,ц 1 1 аг "цядцоця бцсульфпта цатрця - цз 5 г зерна кукурузы. Суточных цыплят (б самцов и б самок) по мещают в обогреваемые брудеры в помещении, в котором поддерживается температура -24 С. Цыплят взвешивают перед началом эксперимента и по истечении 20 суток. Корм и в оду полают а сЙ 11 шц. Контрольная группа птиц получает лишьуказанныц выше корм, а остальные помимо него получают антибиотик АМ 374 (Н-форма) в различной дозе. Результаты приведены в 25 табл. 3 1 сз"льтяты приведены в тао,л, 4. Антибиотик АМ 374 удобно применять в виде стандартных фармацевтических таблеток, 30 каждая из которых содержит (мг);АМ 374 50 Лактоза 225 Кукурузный крахмал(для пасты) 25Стеарат магния 5 Для приготовления пасты 100 г кукурузного крахмала суспендируют в 800 мл воды, после чего нагревают с перемешивянием, Пасту применяют для гранулирования смешанного 45 порошка. При необходимости используют до.цолнцтельное количество воды. Влажные гранулы пропускают через экран8 и высушияют при 120 С. Сухие гранулы пропускают черсз экран16 и смазывают стеаратом 50 магния. Затем гранулированный материалпрессуют в таблетки весом 355 мг на соответствующей таблеточной машине.469260 14 Т а блица 4 КоличествоДоза Привес за корма (г)частей, млн. 20 суток, гнапривесаКоз ффи-Отио;пение циентУвеличение веса корма зы:кива-привеса,1 при: ссУ емости дПенициллинПаизонАМ 374(Н)А 290 ДПенициллинПаизонАМ 374(Н)А 290 Д 18,4 12,0 6,8 6,0 10.0 0,3 4,9 8,3 2,9 0,0 7,4 2 9 ч а н н е. Увеличение привеса в процентах рассч 11 тызают следуОЩим 051)азом:315 Х 100-- 100 = 18,4.266Отношение веса корма к привесу в процентак рассчитывагот аналогично; Приме 1,70 Х 100100 = 13,3.1,50 Предмет изобретения 141 Составитель М, ДранишниковРедактор Н. Спиридонова Текрсд Г. Дворина Корректор Е, Рогайлина Заказ 1820/3 Изд. М 1475 Тираж 529 Подш.снос ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 415Типография, пр. Сапунова, 2 266 315 298 284 282 288 217 289 302 312 Активный ингредиент - АМ 374 - может быть расфасован и в капсулы с твердой оболочкой. Оптимальный состав ингредиентов в капсуле следующий (мг):АМ 374 50 Лактоза 90 Стеарат магния 1 П р и м е р 3. Для приготовления раствора,содержащего АМ 374, используют следующие кОМПОНЕНтЫ, %: АМ 374 1,00 Гель магний-алюминиевого силиката 0,50 Сахароза 60,00 Метилпарабен 0,80 Пропил парабен 0,02 Вкусовая добавка По мере надобности Дистиллированная вода До 100, Из приведенных примеров видно, что получаемый по предложенному способу антибио 29 30 28 30 30 30 30 30 28 ЗЭ 39 40 20 20 20 20 18 20 20 20 тик является ценной добавкой к корму плипитью для домашних животных и птицы,Способ получения антибиотика на основекультивирования продуцента 11 з группы Я(гер 1 О 1 пусез в азробных условиях на жпдко 11 питательной среде, содержащс 11 псточник 11 усвояемого углерода, усвояемого азота и мп 11 еральные соли, прп температуре 25 - 29 С в течение времени, необходимого для прпдаьи 1 я 15 среде существенной антимикробной активности, включающий выделение автибиотпка и при необходимости его очистку, о тл и ч а ющий с я тем, что, с целью получения ант:1 б:1- отика, предназначе 1 гиого в качестве добавки 20 к корм) иилп питью дл 11 домаш 11 их животных пли пт:1 цы, в качестве продуцента используют Ягер 1 оп 1 усев еЬцговрогепв и. зр.