Цис-дихлор-транс-дигидроксибис(изопропиламин)платина(1v), проявляющая противоопухолевую активность

(71) Дзсонсон Иаттей ПабликЛимитед Компани (СВ)(72) Поль Цедрид Хайда и ДеРональд Хепберн (СВ)Изобретение относится к новому соединению, а именно цис-дихлортранс-дигидрокси-бис(изопропиламин) платине ( Я ), проявляющей противоопухолевую активность, и которая может найти применение в качестве противоракового препарата.Цель изобретения - изыскание новых эффективных противоопухолевых препаратов, не оказывающих опасных побочных явлений на человеческий организм по сравнению с известными.А. Получение сырого продукта.Перекристаллизованный цис-Р(= = СНИ Н)2 С 12(26,8 ч) суспендиро - вали в 50 мл горячей воды и к полученной суспензии прибавили при перемешивании 100 мл (100 объемов) перекиси.водорода. Реакционный шламм кипятили в течение 0,5 ьч до тех пор, пока ои не стал желтым по цвету, после чего смесь охладили и профильтровали. Остаток на фильтре промыли сначала водой, затем диэтиловым эфиром и после этого сушили на воздухе. Выход воздушного продукта составил 10,5 г (35 от теоретического).Данные элементного анализа полученного продукта:Вычислено, : С 16,55; Н 4,87; И 6,43, 0 11,03, С 1 16,28.Найдено,З: С 16,59; Н 4,90; Я 6,48; 0 10,80; С 1 16,20.В ИК-спектре продукта присутствует полоса поглощения гидроксильной группы (валентных колебаний связи О-Н) в области 3515 смБ. Получение продукта с диметилацетамидм и выделение практически чистого продукта. Сырой продукт (11 г), полученный как описано вьппе, растворили в ИМ- диметилацетамиде (приблизительно в 1 л) и полученный раствор профильт-ровали через стеклянный пористый фильтр, имеющий пористость В 4, для удаления любых нерастворившихся примесей. Затем раствор охладили до 5 С в течение 2 ч, внесли затравоку для предотвращения перенасьпцения т.е. для предотвращения образования пересыщенного раствора, и оставили на- несколько дней нри температу(ьре -10 С.Образовавшийся за это время кристаллический осадок отфильтровали,5 40 15 20 25 30 35 40 45 50 55 промыли диэтиловым эфиром и сушилидо постоянного веса,Удаление И И-диметилацетамида сцелью получения практически чистогоцелевого продукта проводили путемнагревания полученных кристаллов доо50 С или ниже при остаточном давлении О, 1 мм рт,ст. в течение нескольких дней или до тех пор, пока термогравиметрический анализ продуктаи/или анализ методом газожидкостнойхроматографии не показывал отсутствие в нем следов И Х-диметилацетамида.Стадию растворения сырого продукта, полученного на предыдущей стадииА, в диметилацетамиде можно проводитьпри обычной комнатной температуре, нопредпочитают использовать для этогослегка повышенную температуру, т,е.отемпературу не выше примерно 40 С,Другие стадии очистки, применяемыефакультативно, т.е. необязательнои не всегда, включают перекристаллизацию сырого продукта (полученногона описанной стадии А) из разбавленного раствора перекиси водорода споследующим высушиванием полученного перекристаллизованного продуктав вакууме при температуре приблизиотельно 50 С и дополнительное фильтрование раствора продукта в Б И-диметилацетамиде (см.стадию Б) черезслой силикагеля (с размером частиц70-230 меш) с целью удаления любыхпримесей полигидроксильных производных платины.Противоопухолевая активность СНХР(целевой продукт) впервые была исследована по отношению к опухоли клетокплазмы АД 1/РС 6 А на мышах разновидности ВаЬЬ д-ром Коннорсом, которыйустановил терапевтический индекс(1 Д 1 Д 12), что явно лучше терапевтического индекса родственногоцис-платина (цис-диамин-дихлор-платина ( П ). Далее было обнаружено,что СН 1 Р обладает активностью против 11210, Р 388, В 16 меланом, легоч"ной карциномы Льюиса, опухолейтолстой кишки мышей (26 и 28), причем во всех случаях 1 ЬБ100(табл, 1). Этот препарат являетсякроссрезисстным с цисплатином относительно Ь 1210, но обладает активностью против Ь 1210, устойчивой кдействию ВСЯУ и циклофосфамида.Исследование на животных.25 Было проведено предклиническое исследование. После применения дозы 10 мг/кг значение Т 1/2 для крыс составляет 14 ч для СН 1 Р по сравнению со значением 69 ч для циспла тина. Для собак Т 1/2 имело значение 39 ч. У крыс 44% такой дозы было экскретировано с мочей, причем это количество увеличивалось до 58% на 26 ч. Аналогичное экскретиро О ванне наблюдалось у собак - 45% (3 ч) и 57% (24 ч). Через 3 ч после приме- кения лекарство в моче находилось полностью в форме метаболитов, которые не были идентифицированы. 15Уровни содержания платины в почках для СН 1 Р и цисплатина указаны в табл. 2.Уровни содержания в системе ткань- плазма для СН 1 Р представлены в 20 табл. 3.фармакинетика СН 1 Р у крыс была изучена с использованием платиновой метки, испускающей гамма-частицы. В сравнении с цисплатином и цистранс-дихлор-дигидроксибис(циклопропиламин)платиной П (СР), после 6 применений СН 1 Р, уровни содержаний платины в крови и большей части тканей резко уменьшались, однако оста- З 0 точная метка сохранялась в течение длительного времени. Повышенное поглощение почками и селезенкой в течение 14 дней предполагает, что имеет место вторая волна от других тка 35 ней (табл. 4). Такое повышенное удерживание радиационно-меченной СН 1 Р в сравнении с цисплатином и СР может подразумевать, что СНЕР обладает большим потенциалом в отношении кумулятивной токсичности.Исследование на людях.Данные, полученные в результате исследования в фазе 1 по изучению периода полувыведения всей платины,45 фильтруемой платины и неизмененного лекарства совместно с исследованием образцов мочи, суммированы в табл.5.Было проведено на небольшой группе пациентов исследование фармаки 50 нетики цисплатина и СН 1 Р, меченногоЧФРг. . Сравнительные данные, полученные при изучении образцов крови и мочи, представлены в табл. 6 и 7.Токсичность при испытании на 55 животных.Предклиническое токсикологическое исследование СН 1 Р проводили на четырех разновидностях животных -мышах, крысах, собаках и обезьянах.Обычно наблюдалась сравнимая токсичность , которая зависела от при"меняемой дозы и была обратимойпри нелетательных дозах , Значения ЬЭ для нескольких маршру"тов и режимов применения на четырех указанных разновидностяхживотных приведены в таблице 8 Наиболее чувствительной разновидностью животных оказались собаки. Указаниями на токсичность служили понос, часто с кровью, рвота, потеря аппетита, потеря веса, выпадение волос и шерсти. На всех разновидностях животных наблюдалось подавление деятельности спинного мозга и атрофия ткани, причем общим симптомом служила лейкопения, воздействующая на лимфоциты, так и на нейтрофилы. При высоких дозировках у крыс и собак наблюдались патологические изменения в почках (нефроз), причем аналогичные симптомы наблюдались у одной обезьяны (на которой применяли единичную летальную дозу, равную 480 мг/м). Биохимические изменения, . о которых можно было судить по гепатитной и ренальной токсичности, наблюдались у больных собак и одной обезьяны, однако соответствующие патологические изменения наблюдались не всегда, Хотя на мышах и крысах лекарство проявляло меньшую кумулятивную токсичность при повторных применениях, на собаках кумулятивный летальный эффект наблюдался в течение 5-10 дней, однако он отсутствовал, если препарат применяли в течение 20 дней. При испытании на пяти обезьянах единичных дозировок 1 степени, имеющих значения 240, 360, 480 и 480 мг/м, летальными дозировками оказались лишь наивысшие значения на одном из двух животных, и в отличие от переходных гематологических изменений, лишь на одной обезьяне наблюдались клинические или патологические изменения, касающиеся токсичности. У этого животного наблюдалась потеря аппетита, полидипсия, гипотермия и кровавый понос. Наблюдалось выпадение волос и потеря веса. Смерть наступала на 7-й день и имели место/мг/г Р/ 10 24 (2-й день) 41, 2 Противоопухолеваяактивность (оптимальная),Е Опухоль 6,8 24,9 17,9 202 4,0 12,5 11210, ежедневно,по 5 раз60 мг/м /день 149 127 Ткань Таблица 2Уровни содержания в плазме почек Почки после применения СН 1 Р, цисплатина(крысы) 5,74 3,70 Печень 0,67 35 Кишки СН 1 Р Цисплатин Время 0,39 Легкие 0,26 0,15 42,8 41,7 О, 15 Семенник 35,9 7,8 0,04 45 Мозг 36,5 патологические изменения, вызванныерезкой токсичностью по отношению ккостному мозгу, почкам, селезенке,тимусу и желудочно-кишечному тракту,Таблица 1 Противоопухолевая активность СН 1 Р(14-й день) 22 5,6 Таблица 3 Относительное содержание платины 25 в плазме тканей после применения СН 1 Р1188179 Таблица 4Распределение радиционно-меченного цисплатина и СН 1 Р в тканях самцов крыс (Удзйаг) после применения дозы 10 тс (выражено, как применяемая доза в расчете на 1 г ткани 10 ) Время Кровь Почки Циспла- СН 1 Р Циспла- СН 1 Ртин тин 208 20 179 34 30 8 184 81 48 (2-й день) 29 5 186 58 72(19-И день) 48 Доза мг/м Фильтруемая Неизмен- Содержание в моче,платина ное ле- Х Общая платина Т 1/2, ч Т 1/2, ч 24 ч 47 ч карство 70 77. 0 45,5 20 0,7 45,5 20 1,7 0,5 89 42,0 20 0,8 0,4 31,5 0,7 40 0,7 103 80 1,6 1,5 6,5 15,0 80 1,2 82 Таблица 5Исследование в лаборатории Розвелл Парк (фаза 1)исследование периода полувыделения из плазмы общейплатины, фильтруемой платины и неизменногО лекарства,и Х содержания в моче1188179 1 О Продолжение табл,5 Содержание в моче,Х Общая, платина Фильтр уемаяплатина Доза мг/мф Т 1/2, ч Т 1/2, ч 47 ч 24 ч 100 120 1,8 1,7 61,0 63,0 120 0,8 1,2 26,5 1,4 23,5 120 1,4 58 0,4 26,0 67 0,7 180 1,0 40,5 42,5 0,7 60 0,8 180 2,0 86 17,0 19,д 270 2,2 46,0 47,5 270 0,9 Т а б л и ц а 6 Т 1/2, ч Т 1/2,мин Пациент Лекарство 30 12 70 23,5 Цисплатин 23 89 16,8 28 77 ь 5 16,5 71 РМ 23 63,6 15,6 СН 1 Р 14,1 75,2. ДС 20 93,6 80 22,3 Неизменное лекарство Фзначение двухфазного 1/2 периода определено не было; "ф- двухфазный Т 1/2 период - 36 ч. Определение платиновых комплексов в крови Доза экскретирования за время полувыделения, Х Доза экскретированная за времяполувыделения, 712 1188179 Таблица 7 Экскретирование платиновых комплексов с мочой Лекар- Пациство ент 24-48 48-72 0-1 1-6 6-12 12-24 18,4 6,2 В 4,0 4,4 1,5 2,8 26,9 2,0 2,1 2,5 2,8 3,6 18,2 7,5 2,4 3,3 4,4 3,4 23,8 25,2 3,7 РМ 1,9 25,7 СН 1 Р ДС 26,9 3 ф 8 2,6 2,7 23,4 26,8 1,2 3,8 1,6 Таблица 8 Вид Внутрибрюшно х 1 120-135 Крысы Собаки и Обезьяны Циспла- Ттин8 Экскретирование, Л за единицу времени, ч Значения ЬЭ при действии СН 1 Р о на мышей, крыс, собак, обезьянМаршрут приме- ЕЭ ,нения/режим мг/м/день х 5 75х 1 270-300 Внутривенно х 1 300-330 Внутримышечно х 5 120-150 Внутривенно х 1 250 х 5 50 х 1 480 ВНИИПИ Заказ 6701/23Тираж 353 Подписное филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул,Проектная, 4