Способ получения пептидов с последовательностью актг человека, содержащих в -конечном положении аминооксикислоту

(33) В 1 РОп олпковаио 30.10.75. Боллстсиь,Л Государстценнын комитет Совета Министров СССРтя Огг олисовяп 5 Описаиия 10.00.) 2) Авторы 1 ЗООРС СПИ 5 Ииостряиць лош Лев, Ла Ньеки, Мари Дьердь Хай) Заявитель приятиети Дьяр РТ: Ипостраииое прсдРи)стсп Гсдсои Всдьсс НР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ ПОСЛ ЕДОВАТЕЛ ЪНОСТЫО АКТГ-Ч ЕЛОВЕК ОДЕРЖАЩИХ В М-КОНЕЧНОМ ПОЛОЖЕНИ а-АМИ НООКСИ КИСЛОТУиокислот природио 0 гор)1 я дргис;ииокислоты, и зяиищсииьк по -соис Пой 1)п 0- окси, и амииогруппям боковык цспсй и по С-консчной ка 1)с)окси,иПО 1 Групп и кяр 001 с.сильных Г) ппям боковк 1;спси, :я,сПс) защитив.с групп и Выдслссм Ссс: оО иродмкта В Видс со,и и,и ко.илскся.ПОЛУ чсии 1 с сосдиисии 5 Об,11 дяют бол с Вы.СОКО 1 ОИО,ОГЧСС,011 ЯКТИВОСГгЮ ИО С),ВИСО пиО с извсстиь;и яияло;)1.Изоорстс иис П,1, с)ст ир с гс 51 сссдх ои;и мпризсрами.В при мсряк д,я Обозия 1 и;я а-я).,О 1;слс) Г1 спо,ЗмОтся сОкряцсии" рсложс 5 миссиси ИРАС - ,111 В.Для обозиячсиия а-а)1:о-:.-скс:ксгсг пр 1- ияты символы ОС 1 м, ОА)я и т,:л Р 1:РО 11 пеТя);лорфснол; Р 1) С лици к, огсксил с) рбодиимид; ДСИ - дииикгОгексилкярс)амид; О ВОС -- таст-бстилоссикярбоииг; ВпгОгмтил; О.)1 -- Оксис кпии:)1 ид; 7. -- 1 С-бсизилоксикяроопил.Определспис тсмисра гуры илявлспия прос)- лилось с помоиью яппярятя д. ТоттсьБю;и, 5 Ш Всй ри 51 ) . 11 с.лс дои ян и 5 ) то до) ТО;0 Изоорстспис отиоситс 5 к спосооу получсния ис оиисяииьк В гПтс)яту)с псптидов, содсржаПк от 16 до 39 ямииокислот посседоватсльности чсловсчсского адрснокортикотропного гормоия (АКТГ-цсловска), в которык в консчпс). НО.10 жсиии и 1:одитс 51 а-а)инооксикислота.Извсстси способ иолучсиия псптидов с послсдоватсльиостьк) АКТГ-человска в которык ИЯ ОД 51 ЩИИС 5 В .-СОИСЧОК ИО.10)КСНИИ ОСТЯ. ток Х,-ссри зямсщси ия остаток 1-пролипа и, и Ос тяток (-с, анип, за к,почя 101 циЙся В то. То защищсицыс по -кону псптиды кондеисируют с зящ пцсииыми по С-концу псптидами извсстиыз способом с последующим удялеиисм защитцык групп ацидолизом.Полчсииыс псптиды имеют Низкую биолоГичсск",О активнось - до 00 д актиВности ириродиого гормоия. краткос время ик биолоГис.скОГО дсЙстви 5.СоЛасио изоорстсю прсдложси спосоо ИОЧСИИ 51 ПС 1 ОВ С ПОСЛСДОВВТСЛЬНОСТЬ 10 АКТГ-чслозскя с длииой пепи от 16 до 39 аминокислот, содсржящпк , Х-коиечиом положсиии а-ямииооксикис.оту, я вместо ряда амийош Данчи, Иштван Шеи,я Сирмаи, Ласло Спорниошслойцой хроматографии проводилцсь на сцликагеле по Штало со следующими системамирастворителей.Этилацетат - (пиридин - уксусная кислота - вода 20: 6: 11) =8: 2.Этилацетат - (пиридин - уксусная кислота - вода 20: 6: 11) = б: 4,Этплацетат - пиридицмуравьиная кислота - вода 50: 20; б: 5,5.Хлороформ - метанол 98: 2.Хлороформ - метанол 95: 5.П р и м е р 1. Аминооксиацетилтирозил --серил - метпонил - глута мил - гистидил -- фецилаланил - аргинил - триптофил -- глццил - лизил - пролил - валил - глицил - лизиллизил - аргинил - пролил -- валил - лизпл - валил - тирозил - пролил - аспарагцнил - аланил - глицил -глутаминовая кислота.0,600 г (0,143 моля) ВОС - аминооксиацетил - тпрозил - сер ил - метпоцил -- у -ОВц 1 - глута мил - гистидил - фенил ал анил -- аргццил - триптофил - глицил - в - ВОС -- лизил - пролил - валил - глицил - в -- ВОС - лцзцл -- е - ВОС - лизил - аргпнил - аргцнпл - пролил - валил в в в- лизил -- валил - ОВц 1 - тирозил - пролил - ОВп 1 - аспартил - аланил - глицил -- у - ОВп 1 - - глутамцл - ОВпт ЗНС 1 растворяют в смеси из 4,8 мл трифторуксуспой кислоты, О,б мл воды и 0,6 мл анпзола. Раствороставляют стоять прп комнатной температурев течение 1 час, а затем разбавляют 60 млэфира. Выпавший осадок отфильтровывают,промывают эфиром и сушат в вакууме наднятцокисью фосфора и гидроокпсью калия.Получают 0,538 г (87%) замещецного трифтор ацетата октакозапептида.Получешый трифторацстат октакозапептида пропускают через колонку с Дауэкс 1 К 8 вацетатной форме, Лцстат октакозапептида наносят ца колонку с ионообменником ВатманСМ, разделение проводят с помощью аммопийацетатцого буфера (0,01 М, рН 4,5; 0,4 М,рН 6,7). Содержащие целевое вещество фракции собирают и лиофилизуют, Получают0,22 г (34%) октакозапептида,Лминокислотный анализ показал следующеесоотношение компонентов: лизни 4,05 (4); гцстидпп 0,93 (1); аргинин 3,08 (3); аспарагцн0,99 (1); серии 0,79 (1); глутамиповая кислота2,05 (2); пролин 3,09 (3); глпцин 3,04 (3);аланип 0,92 (1); валин 3,12 (3); метпонин0,60 (1); тирозин 1,88 (2); фенилаланин 0,85(1).Применяемый в качестве исходного вещества гидрохлорид защищенного октакозапептидаполучают следующим образом:А. трет-Бутилоксикарбониламинооксиуксусная кислота.316,0 г (2,27 моль) трет-бутилоксикарбонилгидроксиламипа растворяют в 2680 мл этанола и к раствору при охлаждении добавляют207,8 г (5,19 моль) гидроокиси натрия и350,4 г (2,52 моль) монобромуксусной кислог 10 15 20 25 30 зй 46 45 50 60 65 ты. Рсакццоццую смесь кипятят В течение20 мип, затем отгоняют растворитель, Остатокрастворяют в 1940 мл воды и подкисляют дорН 3 концентрированной НС 1. После 2 час охлаждения и перемешивания отфильтровываютвыделившиеся кристаллы. Сырой продукт(419 г) крпсталлизуют цз смеси хлороформац н-гексаца. Выход 388,8 г (86%); т. пл. 115 -116 С,Найдено, %: С 43,9; Н 6,9; Х 7,1.С,НО,.Вычислено, %: С 44,0; Н 6,8; Х 7,2.Б. трет-Бутилоксикарбоццл - аминооксиацетцл - тирозил - серил -- мег попил - ХН -1,72 г (9,0 ммолей) трет-бутилоксцкарбоциламицооксиуксусной кислоты и 4,50 г(10 ммоль) хлоргидрата метилового эфира тирозилсерилметиоцина растворяют в10 мл дцметилформамида. Раствор охлаждаютдо 0-"С и оорабатывают 1,11 мл (1 О ммоль)метилморфолина, а затем 1,85 г (0,9 ммоль)дициклогексилкарбодиимида. Реакционнуюсмесь перемешивают в течение 1 час при 0 Сц оставляют стоять при комнатной температуре до следу)сщего дня. После этого выпавшу)юдцциклогексилмочевину отфильтровывают,фцльтрат упарцвают, а остаток растворяют в200 мл этилацетата. Раствор промывают 1 н.НС 1 (2 Ъ;100), 8%-ным раствором КНСО 3(2 К 100), водой (1 Х 100), затем сушат и упарпвают. Полученный мстпловый эфир тетрапсптида (4,5 г) растворяют в 45 мл метанола,раствор смешивают с 1,26 мл (26,0 ммоль)гидразицгидрата и реакционную смесь оставляют стоять ца ночь прц комнатной температуре. После этого раствор упаривают, остатокрастирают с этилацетатом, отфильтровывают,осадок промывают этилацетатом и эфиром цвысушивают пад концентрированной сернойкислотой. Получают 3,30 г (62,5%) гидразидазащищенного тетрапептцда. Температураплавления перекристал;шзованцого из водыпродукта около 137 С,Найдено, %: С 49,0; Н б,б; К 14,4.С.Нз,Х,О.Вычислено, %: С 49,1; Н 6,5; М 14,4.В. Хлоргидрат трет-бутилокспкарбонил -амццо -- оксиацстил - тирозил - серцл --- метионил - у - ОВц 1 - глутамил, гистидцл - фен илаланил - аргинил - трпптофил -- глиццл - в - В ОС - лизил - пролил - валил - глицина.0,41 г (0,70 ммоль) трет-бутилоксикарбоцпл - амццооксиацетил - тирозил -- сер илвметионин - Х,Н растворяют в 5 мл дцметплформамцда. В охлажденный до - 20 С раствор по каплям вливают 0,4 мл этилацстата,насыщенного НС 1 (4,4 н,), а затем 0,105 мл(0,85 ммоль) трет-бутилнитрита. Реакционнуюсмесь перемешивают при - 10 С в течение5 мин, затем охлаждают до - 20 С и к нейдобавляют раствор 0,96 г (0,70 ммоль)у - ВШ - глутамил - гистидил - фенилаланил -- аргипцл - триптофил - глицил - е - ВОС -(2,8 ммоль) диизопропилазииа в 8 мл лимстилформамида. Реакционную смесь перемешивают при температуре от5 ло 0 С в течение1 час и оставляот стоять иа ночь при 0 С,После этОГО растВОр мпариВя 10 т я Остаток псрстирают с 8"-ным раствором двууглскислогонатрия. Осадок отфильтровывают, промываютВодои: сушат. Получают 0,93 г (69",о) защищенного тстрадскапептила. Последнии суспсцзируют В 6 мл метанола и оорабатывают раствором кгОргидрата ииридша, приготовлеиного из 1,35 мл пиридина и 1,35 мл концснтрированиой соляной кислоты. Получсниый раствор разбавляот 50 мл воды, выпавшийхлоргидрат тетрадекапсптида отфильтровываот, промывают водой, а зятем суцят Выкол0,78 г (57 Ото ); т, пл. 202 - 204 С; Ьз 0,18.С 9,НззХзО,С 18 (1959,66),Г. трет-БутигОксикарбонил - амииооксиацстил - гирозил - серил -- мстионил - 1 --- ОВН 1 - глутамил - гистплил - 11 сниг 2.12 нил - аргинил - триптофил глиц; л . - е -- ВОС -- лизил -- е - В ОС - лизи, аргииил -- аргинил - пролил - валил - ; - 25-- ВОС лизил - валил - ОБс 1 -тирозил- пролил -аспа ртил - аланил -- г.ицил -- у - ОВп 1 - гг;тамтг - ОВН( ЗНС).0,346 г (0,176 миллимоль) хлоргидрататрет-бутилоксикарбонил - аминооксиацстил - 30тирозил - серилмстионил --- -ОВп 1 -глутамл -- гистидил - фс нилаланил - Яргинил - триптофпл - гл ипил -- е -- ВОС --- лизил- - пролил - валил - глнпша. 0 400 г(0,176 ммоль) е - ВОС - лизил е - ВОС - 35- лизил - е - ВОС -- лизиларгииил -- аргинил - пролил - - вагцл - е - ВОС -- лизил - валил - тцрозил - пролил в р -- ОВп 1 - аспартил - ал анил - глицил -- глутамил - ОВп 1 ЗНС 1 и 0,281 г (1,05 ммоль) 40пентаклорфенола растворяют в 3,3 мл диметилформамида и к раствору добавляют0,025 мл (0,18 моль) триэтиламина, а затем0,074 г (0,36 ммоль) лициклогсксилкарболимида. Реакциопную смесь оставляОт стоятьпри комнатной температуре двое суток, затсмотфильтровывают выпавшую дициклогексилмочевину, а фильтрат разбавляют 30 мл эфира. Выпавсций продукт отфильтровывают, промывают эфиром, а затем сушат. 50Гидроклорид защищенного октакозапептидаполучают с выкодом 0,640 г (87%); т, пл.208 - 212=С; й0,22. С 94 Нз ХмО 9 С 1 з4182,29 . рил - метионил - 1 - ОВП 1 - гл) тамил -гистили, 1 стттлалаииларг;цил - триптофпл - глицил - е - БОС - лизил -- пролил - валил - глпцил -- е - ВОС -- лизил - е - ВОС - лцзил - аргшпл - аргинил - пролил - валил - е - В ОС - лцзил - валил - ОВс 1 - тирозил - пролил - )1 - ОВт( - аспартил - аланцл - глицил -- ОВ п 1 -- глутазитл -- ОВН 1 ЗНС раствориот в смеси из 4,8 мл трифторксспой кислсттт 1, 0,6 1, Волы и 0,6 .1 л янизоля. Раствор 1 ст 111 л 51 От 0105 ГГ В тсчсиис 1 ч с нри кз:н 3 Г:О:1 ем.с 1 Гмрс. 1 Затсз разс 12 ВГяОт 60 зГ эфип. ВьлссгивцПиС 5 ОСЯЛОК ОТфцсТ)101 ЗЫВЯОТ, ИПО.,ЫВ 210 Т ЭС 1 И- рОм и смшят Б Ватт мс исЛ П 5 Гносцс 11 с)10 сфо. р 1 и Гилроокись 10 ка;и 51. т рифтОрацс 1 чт зясцц. ис:ИС 1 ГО ОКТЯС 032 ПСПТИЯ ПОГ 1 М 1 ПОТ С 1 ВКОДОМ 0532 г (86.5",Ъ)Пок.0 ипы сырси три)торацстат пств 1 р 51.10 Г В 10 м,1 ВОЛЫ и ПГОПгс 1.Яю 1011 сз к 1 лОН 1 Л с Лмэкс 1 Х 8 в Яцетатиой фопмс. Полмчеицы раствор, соЛсрткяпии 2 с Ят Ок Гакоз,пс 1 тдя, нянОс 1, ся на колон , зянолнсннм;0 ионообмснной смолой Ват., и СМ. Разлслсицс НРОВОЛЯТ с позопв 0 ГРЯЛНСгПОГО э,юиРОВ;- ния аммонийацетатцым буфером (0,01,51, рН 4,5; 0,4 М, рН 6.7). Фракции, содсрттсащис цслс:Ой продукт, лио 11 или 31 ют. Получают 0,23 г (42 ") Октя:,Озацсптича. С 001 ИОШСНИС ТИРОЗИЦ - - ТРИН ГОфаи Р;131151- ется 2,10.Лз 1 НОкислоный анал 13 ПО;,ЯЗЯГ содсР 5 санис к 01 пои.,Ов В слелтоттсз соотцоптсиии: лизин 3,89 (4); гистндин 0,07 (1); Яргцнпц 3,00 (3); аспарапи 1,10 (1); ссрин 0 97 (1); гзмта Ннов 151 кис,тот 1 1,9- (2); 111:1:,),1 О (3); глицин 3.06 (3); аланш (1,15) (1); Валш 2,84 (3); мсттонин 0,68 (1); тирозин 1,94 (2);фснилаланин 1,0(1 (1).Примененный В качестве исколного вещества трнгидроклорнл защищенного октакозапсп- ТИЛЯ ПОЛ 1110 Т С;1 СДСОЩ 13 ОО 123011.А. трат-Вутоксикарбоннл - 1.-сс-азпнооксипропионовуо кислоту получают из 4,09 г (29 ммоль) 0-х-с 1 ромпропиоцот 01 кислоты, 3,62 г (65 ммоль) гидроокиси кали 5. и 4,39 г (33 моль) трат-бутилоксикарбонпл в . гидроксиламина по способу, указаниому в примере 1. Сырой продукт растворяют В эфтрс и ОбраоатываОт 6,3 ъз (32 ыоль) д 1 цикгОГскснламина.Получают дицнк,1 огсксиламонийную соль трат-б 1 тистокситсрбонил-Г. - О; - амипооксипропионовой кислоты с выколом 6,7 г (60 Оо), т. пл. 157"С. Дициклогскспламопишую соль суспендпруют в эфире, суспепзию встрякивают с 0,2 и. серной кислотой, эфирную фазу упариваОт и получают 3,05 г (50 ос) трет-бтсттоксикарбопил-Е - сс - аминооксипропионовой кислоты, т. пл. 110 в 1 С; а 1 зо = - 91 (С=-1, этанол).Найдено. ,: С 46,6; Н 7,5:6.8.Г,Н, -.И;.10 15 20 т 2 ;00 40 45 50 55 50 Б, трет-Бутилоксикарбонил - а-аминооксипропиопил - тир озил - сер ил - метионпл -- Х.Нз.1,44 г (7,0 лмоль) трет-бутилокс 1 ктроопил - а - аминооксипропионовой кислоты и 3,50 г (78 ммоль) хлоргидрата мстплоиого эфира тпрозил - серил - метионина растворяют в 12 мл димстилформамида. Раствор охлаждают до 0 С и обрабатывают 0,85 мл (7,8 ммоль) К-метилморфолина, затем смешивают с 1,48 г (7,2 ммоль) дициклогексилкарбодпимида. Реакционную смесь при ОС перемешивают в течение 1 час и оставляют стоять ночь при комнатной температуре.Отфильтровываот выпавцую дициклогсксплмочсвипу, фильтрат упаривают, а остаток перетирают с этилацетатом. Продукт отфильтровывают, промывают этилацетатом и эфиром, а затем высушивают над концентрированной серной кислотой. Гидразид защищенного тстрапептида получают с выходом 2,1 г (50%); т. пл. 147 С (после перекристаллизацни из иоды); Я0,43,Найдено, %; С 49,6; Н 67.СыН 4 оК 605.Вычислено, %: С 50,0; Н 6,7.В. Хлор гидр ат трет-бутилоксикар бон 1 л - -аамппооксипропионил - тирозил - ссрил - метионил - у - ОВц 1 - глутамилгистидил - фенилалапил - арганил - триптофил - глицил - е - В ОС - лизил -- пролил - валил - глицина.0,266 г (0,44 моль) трет-бутилоксикарбонил - а - аминооксипропионил - тирозил - серил - метионил - МН растворяют в 3,2 мл диметилформамида и раствор охлаждаот до - 20 С, Прп перемешивании по каплям вводят 0,41 мл этилацетата, насыщенного НС (4,4 н.), затем 0,07 мл (0,59 ммоль) трет-оутилнитритг. Реакционную смесь перемешивают при - 10 С в течение 5 мин затем охлаждают до - 20 С и добавляют к ней раствор 0,600 г (0,438 ммоль) глутамил - гистидил -- фенилаланил - аргинил - триптофил -- глицил - е - ВОС - лизил - пролил - васиг - глиципа, и 0,31 г (1,8 ммоль) диизопропилэтиламина в 5 мл диметилформамида, Реакционную смесь в течение 1 час перемешивают при температуре от - 5 до 0 С, а затем оставляют стоять ночь при 0 С. На следующий день диметилформамид отгоняотт а остаток перетирают с 8%-ным раствором двууглекислого натрия. После фильтрования,промывки водой и последующей сушки получа 1 от 0,70 г (81%) защищенного тетрадекапептида.Из 1 мл пиридина и 1 мл концентрированной соляной кислоты готовят раствор хлоргидрата пиридина и добавляют его к суспендированному в 5 мл метанола защищенному тетрадекапептиду. Полученный таким образом раствор разбавляот 50 мл воды, выпаишии осаок о; -ТЛ тт.тттттт ттт т ттт т тттттттт ттт т ттт т тттт ттть тица получают с выходом 0,513 г (59,5%);200 90 псС. Я 2 0 ОГ. трет-Бутплоксикарбонил -- а-аминоокси. пропиоппл - тироз 11 л - ссрилмегионпл - ОВц 1 - глутамилгистидил - фенплаланил - аргинил -- триптофил -- глицил - е - ВОС - лизил - пролил - валил - глицил - е -- ВОС в - лизил - аргинил - аргипил пролил в вал - е - ВОС -- лизил - валил - ОВ - тирозил - пролил - аспартилаланил - глицил - у --- ОВц 1 - глутамил - ОВп 1 ЗНС. 0,348 г (0,176 ммоль) хлоргидрата трет-бутцеоксикарбони; -- а - аминооксипроппонил -- тирозил - серил метионил - 7 ОВп 1 -- глутампл - гистидил - фенилаланил - аргинил - триптофил - глицил - е - ВОС -- лизпл - про,1 г - валил - глицин а 0,400 г (0,1/6 ммолси) - е - ВОС - лизил -- лизпл - аргинил - аргинил - пролил - валил - е - ВОС - лизил - валил - ОВп -- тирозил - пролил - Д - ОВц 1 - аспартил - аланил - глицил -- р - ОВц 1 - глутамил - ОВЫ ЗНС и 0,281 г (1,05 ммоль) пептахлорфенола растворяют в 3,3 мл диме лформамида. 1( раствору добавляют 0,025 мл (0,18 ммоль) триэтиламина, затем 0,074 г (0,36 ммоль) дициклогексцлкарбодиимнда (1:СС). Реакционную смесь оставляют стоять при комнатной температуре в течение двух суток, затем отфильтровывают дициклогексилкарбамид, а фильтрат разбавляют 30 мл эфира. Выделившийся продукт отфильтровывают, промывают эфиром, а затем сушат. Хлоргидрат защищенного октакозапептида получают с выходом 0,658 г (89%); т. пл. 175 - 177 С; Й0,25. П р и м с р 3. Атминооксипропион 1 г - тирозил - ссрил - метионил - глута мил - гистидил - фснилаланил - аргинилтриптофил - глицил - лизил - пролил - валил - глицил - лпзил - лизил - аргинил - аргинил - пролил - валил - лизил - валил -- тирозил - пролил -- аспартилаланил -- гл 11 цил - глутаминовая кислота.0,600 г (0,142 ммоль) трет-бутилоксикарбонил - 0 - а-аминооксипропионил - тирозил - серил - мстпонил - глутамил - гистидил -- фенплаланил -- аргинил - триптофплглпцил е - ВОС - лизил - пролил -- валил - глипил - е - ВОС - лизил - е - ВОС - лизил - аргинил - аргинилпролил - валил - е - ВОС - лизил - валил - ОВц - тирозил - пролил -- ОВц 1 - аспартил - аланил - глицил - у - ОВп - глутамил - ОВц 1 НС растворяют в смеси из 4,8 мл трифторуксусной кислоты, 0,6 мл воды и 0,6 мл анизола. Раствор оставляют стоять при комнатной температуре в течение 1 час, а з тем разоавляют 60 мл эфира. Вьивши 1 оса,Ок 0 фи;птровыиаот,9Выход трифторацета октакозапептида составляет 0,546 г (88,5 Оо)Трифторацетат растворяют в 10 мл воды и трифторацетатиые ионы с помощью ионообмснной смолы Дауэкс 1 Х 8 обменивают на апетатные ионы, Полученный таким образом раствор, содержащий апетат замещенного октакозапептида, вносится на колонку, заполненную ионообменной смолой марки Ватман СМ.Целевой продукт выделяют градиентным элюиронан нем аммонийацетатным буфером (0,01 М, рН 4,5; 0,4 М, рН 6,7). Фракции, содержащие целевое вещество, собирают и лиофилизуют, Выход октакозапептида составляет 0,245 г (39%). Содержание метионинсульфоксида 2,57%. Соотношение тирозина - триптоф а н а р а в но 2,07.Лминокислотный анализ: лизин 4,35 (4); гистидин 0,97 (1); аргинин 3,13 (3); аспарагиновая кислота 1,06 (1); серии 1,00 (1); глутаминовая кислота 1,92 (2); пролин 2,90 (3); глицин 3,00 (3); алании 1,00 (1); валин 2,92 (3); метионин 0,87 (1); тирозин 2,21 (2); фенилалацин 1,06 (1),П р и м е р 4. а - Лминокси - р - гидрооксипропионил - тир озил - сер ил - метионил - глутамил - гистидил - фенилаланил -- яргицил - триптофил - глицил - лизил -- пролил - валил - глипил - лизил - лизил - аргинил - аргинил в прол - валил -- лизил - валил - тирозил - пролил - аспартил - аланил - глицил - глутаминовая кислота.0,600 г (0,142 ммоль) трет-бутилоксикарбон ил - а - а миноокси - 1 з - гидрооксипр опионил - тир озил - серил - метионил - у --- ОВ 01 -- глута мил - гистидил - фенилаланил - аргинил - триптофил - глицил -- е - ВОС - лизил - пролил - валил -- глицил - е - ВОС - лизил - е - ВОС -- лизил - аргинил - аргинил - пролил -- валил - е - В ОС - лизил - валил -- ОВп 1 - тирозил - пролил - Р - ОВц 1 -- аспартил - а - аминооксипропионил - глицил - у - ОВп 1 - глутамил - ОВШ ЗНС 1 растворяют в смеси из 4,8 мл трифторуксусной кислоты 0,16 мл воды и 0,6 мл анизола. Смесь оставляют стоять при комнатной температуре в течение часа, а затем разбавляют 60 мл эфира. Выделившийся осадок отфильтровывают, промывают эфиром и сушат над пятиокисью фосфора и гидроокисью калия в вакууме. Получают 0,400 г (65/О) трифторацстата замещенного октакозапептида.Сырой трифторапетат растворяют в 8 мл воды и пропускают через колонку с Дауэкс 1(8 в ацетатной форме.Полученный таким образом раствор, содержащий ацетат октакозапептида, наносится на колонку, заполненную ионообменной смолой марки Ватман СМ-о 2, и эл 1 оируется градиентным эл 1 оироваиисм аммоцийацетатным буфером (0,1 М, рН 4,5; 0,4 М, рН 6,7), Фракции, содержащие целевое вещество, собирают и 10лиофилизуют. Получают 0,240 г (41,54) октякозапептида, пептидное содержание которого по измерениям методом поглощения ультрафиолетовых лучей составляет 81,6 О(1. Содержание метионина - сульфоксила 4,4. Соотношение тирозина - трпптофапя равно 2.13.Лминокцслотный анализ: лцзш 1 3.92 (4);гистидин 1,00 (1); арпшиц 3,15 (Э; ясцярягин 0,99 (1); серии 0,83 (1): гл тами:овал 10 кислота 1,94 (2); пролин 3,00 (3); глицш 1 3,05(3), ала 1 гин 1,04 (1); валиц 2,92 (3); мстио 1 цш 0,79 (1); тирозиц 1.83 (2): фсццляляциц 0,97 (1).П р и м с р 5. В-Лмицо - а - гилрокси 11 ропио нил - тирозил - серил -- мстиогцп - глутамил - гистидил - фенилаланил -- яргиШ 1 л - трипфтофил - глипил - лиз 1 п - прол ил - валил - гл ипил - л цз 1 п - л изил -- аргинил - аргинил - пролил - вялп - 20 лизил - валил - тирозил - пролиляспартил - алапил - глшпп - глутямицовая кислота.0,600 г (0,142 ммоль) ВОС - /Э-а-амицоокси - р-гидроксипропионил - тирозпл - серпл 25 - метионил - у-ОВп 1 - глутамил - гистидил -- фенилаланил - аргцнил - трпптофил -- глицил - е-ВОС в лизил в пролилв - глипил - е-ВОС - лизил - е-ВОС - лиз 1 п --- аргинил - арп 1 нил - пролил - вялил 30 - е-ВОС - лизил - валил -- ОВ 111тцрозил - пролил - р - ОВП 1 - аспяртцл -- аланил - глицпл - у-ОВ 1 П - г:1 утямил -- ОВп 1 ЗНС 1 растворяют в смеси из -1,8 мл трифторуксусной кислоты 0,6 мл волы и 0,6 мл З 5 анизола. Раствор оставляют в течение 1 часпри комнатной температуре, а затем добавляют 60 мл эфира. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром и сушат цял цятиокисью фосфора и гидроокц 1 сью калия в ва кууме, Трифторапетат замешенного октакозяпептида полчают с выходом 0,533 г (86,5,/о).Сырой трифторацетат растворяют в 10 млводы и пропускают через колонку с Дауэкс 1 Х 8 в ацетатной форме. Полученныи раствор, 45 содержащий ацетат замещенцого октякозапсптида, наносится на заполненную иоцообмецной смолой марки Ватман СМколонку и элюируется аммонииацетатным буфером линейным буферным градиентом, (0,01 М, рН 4,5; 0,4 М.рН 6,7). Фракции, содержащие целевое вещество, собирают и лиофилизируют. Получают 0,250 г (431 О) октакозапептида, содержя 1 цсго 81,0 о пептида. Содержание метионцнсульфоксида 4,4 О/о. Соотношение тирозица - триптофана составляет 2,05.Лминокцслотный ацализ; лизин 3.76 (4);гистидин 0,8 (1); аргинин 3,05 (3); аспаряп 1 н 1,00 (1); серин 0,73 (1); глутямицовая кислота 1,94 (2); пролпн 3,00 (3); глиц 1 ги 295 (3); б 0 алании 1,05 (1), валин 2.82 (3); меп 1 оциц 0,78490284 12 Предмет изобретения Составитель А. Нестеренко Редактор Л. Герасимова Техред 3. Тараненко Корректор О. ТюринаЗаказ 717/5 Изд. Юо 1994 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж.35, Раушская наб., д. 45Типография, ир. Сапунова, 2- пролил - валил - глицил - лизил - лизил - аргинил - аргинил - пролил - валил - лизил в валил в тирозил в пролил в аспарагинил - глицил - алании - глутамил - аспартил - глутамил - серил - алании,1,00 г (0,214 ммоль) трет-бутилоксикарбоил - В-а-а миноокси - р - гидрокси - пропион - тирозил - сер ил - метионил - у-ОВц 1 - глутамил - гистидил - фенилаланил - аргинил - триптофил - глицил -- в-В ОС - лизил - пролил - валил - глицил - в-ВОС - лизил - в-ВОС - лпзил -- аргинил - аргинил - пролил - валил -- в-ВОС - лизил - валил - ОВц 1 - тирозил - пролил - Р - ОВц 1 - аспартил - глицил - аланил - у - ОВц 1 - глутамипил -- ОВц 1 - аспартил - ОВц 1 - аспартил у - ОВц 1 - глутамил - серил - аланил -- ОВц 1 ЗНС 1 растворяют в смеси из 8 мл трифторуксусной кислоты, 1 мл воды и 1 мл анизола. Раствор при комнатной температуре оставляют на 1 час, а затем разбавляют 200 мл эфира, Выделившийся осадок отфильтровывают, промывают эфиром и сушат в вакууме над пятиокисью фосфора и гидроокисью калия. Трифторацетат замещенного дотриакоптапсптида получают с выходом 0,90 г(88 о 7 )Сырой трифторацетат растворяют в 20 мл воды и пропускают через колонку с Дауэкс 1 х,8 в ацетатной форме, Полученный раствор, содержащий ацетат замещенного дотриаконтапептида, наносится на заполненную ионообменной смолой Ватман СМколонку.Разделение проводят при помощи линейного градиентного элюирования аммонийацетатным буфером (0,01 М, рН 4,5; 0,4 М, рН 6,7). Фракции, содержащие целевое вещество. собирают и лиофилизуют. Получают 0,46 г (467 о) дотриаконтапептида. 1. Способ получения пептидов с последовательностью АКТГ-человека, содержащих в Х-конечном положении а-аминооксикислоту о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, от пептидов последовательности от АКТГ - " до АКТГ - " содержащих в М-конечном положении а-аминооксикислоту и вместо ряда аминокислот природного человеческого АКТГ другие аминокислоты и защищенных по Х-конечной аминооксигруппе и аминогруппам боковых цепей, а также по конечной карбоксильной группе н карбокспльным группам боковых цепей, отщепляют защитные группы, и полученные соединения переводят в соли или комплексы известным спосооом.2. Способ по и. 1, отличающийся тем,что в качестве К-конечной аминооксикислоты 20 используют аминооксиуксусную кислоту или.О- пли Л-сс-аминооксипропионовую кислоту нли Й- или Е-а-аминоокси+оксипропионовую кислоту.3, Способ по п. 1, отл ич ающийся тем, 25 что в качестве исходного вещества используютпептид, в котором аспарагин в 25 положении замещен аспарагиновой кислотой или глицин в 26 положении замещен на А 1 а, или аланин в 27 положении замещсн на глицин.30 4. Способ по пп. 1 - 3, отличающийсятем, что в качестве исходного вещества используют пептид, в котором аминоокси и аминогруппы защищены трет-бутилоксикарбонильной группой, и карбоксильные группы за щнщены трет-бутильной группой.5. Спосоо по п. 4, отличающийся тем,что защитные группы удаляют ацидолизом.6. Способ по пп. 4 и 5, отличающийсятем, что защитные группы отщепляют три фторуксусной кислотой.