Способ получения производных андростан-17-она

(31) Р 2632677.2 (33) фрг Гасударственный комитет СССРОпубликовано 07. 12 . 82 . Бюллетень ЛЪ 45 по делам изобретений и открытий(53) УДК 547.689. .6,07(088,8) Дата опубликования описания 07.12.82 ИностранцыАльфред Вебер, Марио Кеннеске и Хельмут Даль,.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ АНДРОСТАН-ОНАв,о(сик,)о зло(бн Я,)2 Огде , значения, метил, фе организма 3805, спо Вт, В и и имеют указанные а В,е - водород, этил, или ментируют культурой микроМусоЬасСег 1 ипт врес КВВ- обной к отщеплению боковой Изобретение относится к получению новых производных андростан-онаобщей формулы где- простая или двойная связь;и = 1 или 2;В - водород;В - низший алкил или в том слу 2чае, когдаи = 2, также водород, являющихся новыми промежуточными продуктами для синтеза многочисленных фармакологически активных стероидов.Использование известного микробиологического метода определения 17-алкильной цепи у 17-алкилзамещенных стероидов с помощью микроорганизмов вида МусоЬасегца 113 позволяет 2получать новые промежуточные продукты общеи формулы . 4 ель изобретения - расширение ар 5сенала новцх производных авдрастан"она, являющихся промежуточнымипродуктами в синтезе фармакологически активных стероидов.Поставленная цель достигается тем,что производное стерина общей фор- мулы3 98062цепи от стерина с последующим выделением целевого продукта.Процесс проводят в таких растворителях, как низший спирт, монометиловый эфир гликопя, диметилформамидили диметилсульфоксид, целевой продукт имеет высокий выход.Пример 1,А, В колбу Эрленмейера емкостью750 мл помещают 200 мл стерильногопитательного раствора, содержащего13 дрожжевого экстракта, 0,4 Я гидро.фосфата натрия, 0,3 й дегидрофосфатакалия и 0,23 "Тагата (к) 02" и доводярН до 6,7, производят прививку декантатом сухой культуры МусоЬас 1 ег 1 цвпрес МРР 1-Ви в течение 3 днейпроизводят перемешивание при 30 С соскоростью вращения 190 об,/мин.В, В ферментер емкостью 50 л с40 л стерильного питательного раство.ра, содержащего 1,233 дрожжевогоэкстракта (653-ного), 0,68 дигидрофосфата калия и 0,2 "Тагата0,2",и доведенного до рН 6,0, вводят200 мл выращенной культуры МусоЬасег 1 цв прес и форкультуру при 30"С инкубируют при продувании воздуха(2 м/ч )в течение 48 ч,С. 400 г холестерина растворяютв 6 л Формальдегиддиметилацеталя,перемешивая при комнатной температуресмешивают с 400 г кизельгура и порциями прибавляют 200 г пятиокиси фосФора, после чего массу перемешиваютв тецение, 2 ч. при комнатной температуре. Раствор отделяют фильтрованиемот нерастворенных компонентов, которые промывают затем формальдегиддиметилацеталем, после чего растворительотгоняют в вакууме. После добавления40раствора кислого углекислого натриятвердый неочищенный продукт отфильтровывают, промывают водой и послесушки получают 440 г 3 р-метоксиметок-си-холестена. Перекристаллизован 45ное из ацетона соединение имеет т.пл.79-80 С. 400 г полученного указаннымобразом Зр-метоксиметокси-холестена эмульгируют со 120 г "Тегина (ф10 л полностью обессоленной воды и40 мл 1 н.раствора гидроокиси натрияпри 95 С в течение 30 мин с помощью"Диспакс( 1" реактора РР-6-6 (фирмы "Джанке и Кункель", ФРГ). Затемэмульсию стерилизуют в течение 20 мин 5при 120 фС.Д. Ферментер емкостью 50 л заполйяют 40 л стерильного питательного 8фраствора, содержащего 2,04 Согпзеер11 оцог 0,3 диаммонийгидрофосфатаи 0,251 "Тагата( 02" и доведенногодо рН 6,5, затем производят прививку2 л форкультуры МусоЬасйег 1 цв зрес,продувают воздухом(0,5 м/ч ), перемешивают (250 об/мин) и производят инкубирование в течение 24 ч при 30 С.Затем к культуре прибавляют эмульсию3/3-метоксиметокси-холестена, (полученную в соответствии с разделом С),после чего в течение 120 ч производятферментацию. После завершения ферментации культуру три раза экстрагируютхлористым этиленом, каждый раз используя по 5 л последнего, этиленхлоридный экстракт Фильтруют и упариваютв вакууме. Полученный остаток(156 г ) хроматографируют на колонке,заполненной силикагелем, продукт перекристаллизовывают из этилового эфира уксусной кислоты, в результатечего получают 86 г Зр-метоксиметокси-андростен-она с т.пл. 129/131132 С.Пример 2,А. В колбе Эрленмейера емкостью2 л с 500 мл стерильной питательнойсреды в условиях, описанных в примере 1 А, выращивают МусоЬасеег 1 цв пресИРР В.В. Аналогично примеру 1 С вводятво взаимодействие 10 г ситостерина иполучают,1 г 24-этил- р -метоксиметокси-холестена. Перекристаллизаванное из ацетона соединение имеетт. пл. 70-71 С. 10 г полученного указанным способом 24-этил-/-метоксиметокси-холестена эмульгируют в течение 10 мин с 4 г "Тегина( и 300 млводы при 95 ОС с помощью "Ультра-Турракс(11" (Фирмы "Джанке и Кункель",ФРГ), Эмульсию стерилизуют в течение20 мин при 120 С.С. В каждую из 20 колб Эрленмейера, причем каждая с 85 мл стерильнойпитательной среды, содержащей 2,04СогпзТеер 11 ццог, 0,33 диаммонийгидрофосфата, 0,253 "Тагата 1"0,2".и доведенной до рН 6,5, вводят по5 мл выращенной культуры МусоЬасйег 1 цщ зрес и в течение 24 ч при 30 ОСпроизводят перемешивание со скоростью 220 об/мин;Затем к каждой культуре прибавляют 14 мл суспензии 24-этилр-метоксиметокси-холестена (что соответствует 0,5 г 24-этилР-метоксиметокси-холестена) и в течение 120 ч пои5 9806230 С производят ферментацию на приборе для встряхивания, После обработки, проведенной аналогично примеру 11 Д, получают, 2,1 г Зь-метоксиметокси-андростен-она с т, пл. 130132 С.Пример 3,А. В условиях примера 1 С вводятво взаимодействие 10,5 г стигмастерина и получают 10,75 г 24-этил-Зр-ме отоксиметокси,22-холестадиена. Перекристаллизованное из ацетона соединение имеет т. пл. 103-104 С.В. В условиях, описанных в примере 28, эмульгируют 10 г 24-этил-Зф. 1 з-метоксиметокси,22-холестадиена.С. В условиях, описанных в примерах 2 А и С, получают 85 мл культурыМусоЬасйег 1 ап прес Ьйй 8-3805 ипроизводят смешение с 14 мл суспен-. розии 24-этил-Зр-метоксиметокси,22-холестадиена (что соответствует0,5 г 24-этил-Зр-метоксиметокси,22-холестадиена),После проведения инкубации в течение последующих 120 ч при 30 дС наприборе для встряхивания производятобработку в соответствии с примером1 Д. В результате получают 2,3 г Зр-метоксиметокси-андростен-она зос т. пл. 130-132 С.Пример 4.А. 20 г холестерина растворяютв 300 мл формальдегидэтилацеталя,перемешивая при комнатной температурепроизводят смешение с 30 г кизельгура и (порциями по 15 г) пятиокисифосфора, в течение 24 ч массу пере. -мешивают при комнатной температуре.Раствор отделяют фильтрованием отнерастворенной фракции, промывают ееформальдегиддиэтилацеталем; отраствора отгоняют в вакууме растворитель. Остаток кристаллизуют при 0 С.оПосле добавления раствора кислогоуглекислого натрия отфильтровываютнеочищенный продукт, который промывают водой, в результате чего послесушки получают 22,6 г 3-этоксиметокси-холестена. Перекристаллизованное из этилового эфира уксусной кислот соединение имеет т. пл. 64-66 С.8. Аналогично примеру 28 эмульгируют. 10 г Зр-этоксиметокси-холестена.55С, В условиях примеров 2 А и С получают 85 мл культуры "МусоЬастег 1 цв,прес МКВ 8-3805 и смешенйе с 14 млсуспензии 3-этоксиметокси-холесте 8 6на (это соответствует 0,5 г Зр-этокси.метокси-холестена). После проведения инкубации в течение последующих120 ч при 30 С на приборе для встря.хивания производят обработку по аналогии с примером 1 Д. В результате получают 1,5 г Зр-этоксиметокси-андростен-она с т. пл. 121-123 С.Пример 5.А. 38,67 г холестерина растворяют в 250 мл хлористого метилена и164,2 г монометилового эфира формальдегид-бис-гликольацеталя и приперемешивании и комнатной температуре перемешивают с 60 г кизельгура и30 г пятиокиси фосфора, после чегореакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре.Раствор отделяют фильтрованием отнерастворенной фракции, промываютпоследнюю хлористым метиленом и производят нейтрализацию метанольнымраствором гидроокиси калия. Послеотгонки растворителя в вакууме продукт растворяют в метиловом спирте,производят фильтрование и веществокристаллизуют посредством медленногоиспарения растворителя, В результатеполучают 25 г 31 ь-(2,5-диоксагексилокоси)-5-холестена с т, пл. 41-42 С.В. В условиях, описанных в примере 28 эмульгируют 10 г 3-(2,5-диоксагексилокси)-5-холестена.В условиях, описанных в примерах 2 А и С, получают 25 мл культурыМусоЬасйег 10 щ прес МВВ 8-3805 ипроизводят смешение с 14 мл суспензии Зр-(2,5-диоксагексилокси)-5-холестена, что соответствует 0,5 г3(-(2,5-диоксагексилокси)-б-холестена,После осуществления инкубации втечение последующих 120 ч при 30 Сна приборе для встряхивания производят обработку аналогично примеру 1 Д.В результате получают 1,75 г Зр-(2,5 диоксагексилокси)-5-андростен-онас т. пл. 65-67 ОС.Пример 6.А. 12 г холестерина суспендируютв 100 мл ацетальдегиддиметилацеталя,при перемешивании и комнатной температуре производят смешивание с 25 гкизельгура и порциями с 12 г пятиокиси фосфора, после чего в течение45 мин реакционную смесь перемешиваютпри комнатной температуре, Растворотделяют фильтрованием от нерастворимой фракции, последнюю промывают хло 98062 ристым метиленом и раствор нейтрализуют метанольным оаствором гидроокиси натрия; После отгонки растворителя в вакууме полученный неочищенный продукт перекристаллизовывают из ацетона при добавлении активированного угля,.В результате получают 10,2 г ,3/3-(1-метоксиэтокси)-5-холестена с т. пл. 94-95 С.В, Аналогично примеру 2 В эмульги о руют 10 г ЗР-(1-метоксиэтокси)-5-холестена,При соблюдении условий, описанных в примерах 2 А (и С), получают 85 мл культуры МусоЬас 1 ег 1 ы зрес ИКК В, и производят смешение с 14 мл суспензии ЗуЬ-(1-метоксиэтокси 5-холестена (это соответствует 0,5 г ЗР-(1-метоксиэтокси-холестена). После инкубирования в течение последующих 120 ч при ЗОО С на приборе для встряхивания производят обработку по аналогии с примером 1 Д. В результате получают 1,89 г ЗЪ-(1-метоксиэтокси)-5-андростен-она с т. пл. 25111"118 С.Пример 7.А. 19,33 г холестерина смешивают в 20 мл хлористого метилена с 23,6 мл винилэтилового эфира и 85 мг паратолуолсульфокислоты (безводной) и реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре. После нейтрализации раствором кислого углекислого натрия производят экст рагирование раствором хлористого натрия, сушку над сернокислым натрием, после чего растворитель отгоняют в вакууме, Маслообразный неочищенный продукт хроматографируют на силикагеле при использовании в качестве элюирующего средства смеси гексана и этилового эфира уксусной кислоты. В результате получают 18,4 г ЗЪ-(1-этоксиэтокси)-5-холестена в виде бесцветного воскообразного вещества.В. В условиях, описанных в примере 2 В, эмульгируют 10 г 3-(1-этоксиэтокси)-5-холестена.С. При соблюдении условий, описанных в примерах 2 А .и С получают 85 мл культуры ИусоЬасСегцщ зрес ЙВВ Ви производят смещение с 14 мл суспензии 3-(1-этоксиэтокси)-5-холестена, что соответствует 0,5 г55 3-(1-этоксиэтокси)-5-холестена, Пос ле этого инкубируют в течение послеДующих 120 ч на приборе для встряхиВания при 30 ОС. Обьединенные культуры 8 8экстрагируют хлористым этиленом,.экстракт упаривают в вакууме, остатоксмешивают с 70 мл метилового спирта,12 мл воды и 6 мп концентрированногораствора НС, после чего в течениеч смесь нагревают при температурекипения с обратным холодильником.После охлаждения до 12 С продукт реакции осаждают прибавлением 100 млводы и затем отфильтровывают, Послеперекристаллизации из ацетона получают 0,62 г 5-андростен-Зр-ол-онас т. пл, 138/148-149 С,Пример 8.А 38,7 г холестерина растворяютв 500 мп хлористого метилена, при0 С, приоготовленный раствор смешивают с 25 мл окиси этилена и 0,5 мпэфирата трехфтористого бора. Реакционную смесь выдерживают в течениеночи при комнатной температуре, затем производят экстрагирование водой,сушку над сернокислым натрием и отгон-ку растворителя в вакууме, Неочищенный продукт (50 г) хроматографируютна силикагеле при использовании вкачестве элюирующего средства смесигексана и этилового эфира уксуснойкислоты. В результате получают 10 г3-(2-оксиэтокси) -5-холестена, ст. пл. 9 1-95 С,В, При соблюдении условий, описанных в примерах 2 А (и С) получают85 мл культуры МусоЬасегца зресййй Ви производят смещение с14 мл суспензии ЗД-(2-оксиэтокси)-5-холестена, что соответствует0,5 г 35-(2-оксиэтокси) -5-холестена.После проведения культивации в течение 120 ч при 30 ОС на приборе длявстряхивания производят обработку поаналогии с примером 1 Д, В результатеполучают 2,1 г 3-(2-оксиэтокси)-5-андростен-она с т. пл. 173/175-177 ОС,Пример 9.А. Согласно примеру 1 С, вводятво взаимодействие 20 г 5 Ы-холестан-ЗЪ-ола с формальдегиддиметилацеталем, в результате чего получают21,5 г 3-метоксиметоксиЫ-холеста-на. Перекристаллизованное из ацетонасоединение имеет т. пл. 65-68 С.В. При соблюдении условий, описанных в примере 2 В, эмульгируют10 г Зр-метоксиметоксиЫ-холестана.С. При соблюдении условий, описанных в примере 2 А (и С) получают 85 млкультуры ИусоЬасйегцщ прес ЯВКЕформула изобретения,5гдеВэ 1 фзначения, а кэтил, ферменторганизма ИусВ, спосо20ковой цепи отщим выделение, - водород, метил илиируют культурой микрооЬасйег 1 це прес ййЮ.бной к отщеплению бостерина, с последуюм целевого продукта.ики информации,нимание при экспертизеСША Н 3684657публик. 1972. О Н оиная связь;- простая. ил и - 1 или 2; Й - водород; Составитель И. ФедосееваРедактор И. Ковальчук Техред С.Иигунова Корректор О. Бил Тираж 445 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета ССС по делам изобретений и открытий 13035, Иосква, Ж, Раушская наб., д397/ филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная,9 980628 10 Ви производят смешение с 14 мл К - низший алкил или в том слу 2 суспензии 3 Р-метоксиметокси 5 о;холе- чае, когда и2", также стана (это соответствует 0,5 г 3/3- водород, -метоксиметоксиЫ-холестана), Пос- о т л и ч а ю щ и й с я тем, что ле проведения инкубации в течение 5 производное стерина общей формулы 120 ч при 306 С на аппарате для встряхивания .производят обработку согласно примера 1 Д. В результате получают В 2,05 г 3/3-метоксиметокси-андростан- фен, -17"она с т. пл, 97-98 ОС. 1 О