Способ получения литиевых солей бромсодержащих 8-замещенных (имидазо2, 1-iпуринил-3) -д-рибофуранозил-5 -фосфатов

)5 С 07 Н 19/23 БРЕТЕН ВУ обу поений - х 8-заИзобретен лучения новых литиевых соле мещенных (и О-рибофуран формулыие относится к спохимических соеди й бромсодержащи мидазо 2,1-пурин озил-фосФатовф 0"С-ил)ф- общей ГОСУДАРСТВЕННЫ И. КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ(56) Тгоп)е -., Воз Е, 0 оп)осс А. Веас 11 опзо 1 пцс 1 е 1 с Асс Вазез ей 2-асейуеп 1 с ез 1 егз.Зупт)езз апб епгуп)айс ечаоаЬоп о 1сЬеп)1 са 1 у аобИ 1 еб пасео 1 без - Ецг, .ВосЬеп)., 1987, 162; М 2 р; 433 - 437.(54):СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЕВЫХ СО-.ЛЕЙ БРОМСОДЕРЖАЩИХ 8-ЗАМЕЩЕННЪХ (ИМИДАЗО 2,1-ПУРИН ИЛ-З)ф-С)-РИ БО ФУРАН ОЗ ИЛ-ФОСФАТОВ(57) Изобретение касается нуклеотидов, вчастности получения трилитиевой соли (84-(бромацетил)фенил имидазо 2,1-пуринил-ЗфО-рибофуранозил-трифосфатаили литиевой соли (8-4-(бромметил)-фенил 1 имидазо 2,1-11 пуранил-З)-О-рибофура"нозил,5 -циклофосфата, которые могутбыть использованы в качестве флуоресцентных аналогов адениловых нуклеотидов для где Я 1 атом водорода и В 2 - группа Фор селективнои модификации активных (или регуляторных) центров соответствующих ферментов, имеющих в районе связывания экзо-ИН 2-группы молекулы субстрата определенную нуклеофильную группу, например - ЗН, а также в биологии для регуляции уровня адениловых нуклеотидов в клетках различных тканей. Цель - создание новых полезных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией Ка-солей аденозин,5- циклофосфата или Ка-солей аденозин-диили трифосфата с 1,1-(1,4-фенилен)бис(2-бромэтаном) Мольное соотношение = 1:(5- 20)1 в среде смешивающегося с водой полярного растворителя (й,й-диметилформамид, диокса н, гекса мета пол, 1-метилпирролидон) в присутствии водного , а раствора ацетата лития (рН 5 - 6) при 30- 40 С. Выход, %; спектр флуоресценции при Лвозб нм Жпах, нм, брутто ф-ла: а) 9, 325, 425, С 2 оН 1 вВг 1 зй 5014 Р 2 Н 20; б) 11, 325, 425, С 1 оН 1 вВг 12 И 5011 Р 2 2 Н 20; в) 15, 325, 425, Ф С 2 оН 1 б В г 1 Н 506 Р Н 20, 1 3, и. ф-л ы, 2 табл. лы Н - О-Р - и где и = 2 или 3, или 81 и Я 2.,0 Ь,+ 0 +образуют группу формулы - Р - О -1,Получаемые описываемым способомновые соединения могут быть применены вкачестве флуоресцентных аналогов адениловых нуклеотидов для селективной модификации активных (или регуляторных)центров соответствующих Ферментов, имеющих в районе связывания экзо-ИН 2-группы молекулы субстрата определеннуюнуклеофильную группу, например -ЯН. Кроме того, новые соединения могут быть использованы в молекулярной биологии для регуляции уровня адениловых нуклеотидов в клетках различных тканей.Цель изобретения - разработка простого одностадийного способа получения новых реакционноспособных флуоресцентных производных в ряду циклических 1,И -производных адениловых нук 6леотидов,Указанная цель достигается взаимодействием аденозин,5-циклофосфата или аденозин-ди- или -трифосфата с симметричным бис-(а-бромметил)кетоном при мольном соотношении реагентов, равном 1:(5 - 20) соответственно в среде: смешивающийся с водой полярный органический растворитель - 0,1 - 1,0 М водный раствор ацетата лития (рН 5,0 - 6,0) при 30 - 40 С с последующим выделением целевого продукта известными приемами.П р и м е р 1. Трилитиевая соль (8-(4- (бромацетил)фенилимидазо(2,1-)пуринил -3)-/3-О-рибофуранозил-трифосфата.К раствору 110 мг(0,2 ммоль) динатриевой соли аденозин-трифосфата в 8 мл 0,1 М литий-ацетатного буфера (рН 6) добавляюто раствор 320 мг (1 ммоль) 1.1-(1,4-фен илен)бис(2-бромзтанона) в 20 мл свежеперегнанного диметилформамида. Реакционную смесь термостатируют при 30 С в течение 24 ч, затем добавляют 15 мл воды и Ркстрагируют эфиром (Зх 100 мл). Водный слой после Ркстракции упаривают при пониженном давлении и 35 С. К остатку добавляют 2 мл безводного Ртанола, затем 2 мл безводного дизтилового эфира и полученную суспензию центрифугируют, Осадок отделяют и высушивают в вакууме. Выделение целевого продукта осуществляют с помощью препаративного высоковольтного Рлектрофореза на бумаге в 0,025 М литийэцетатном буфере (рН 6). Полосу бумаги, содержащую получаемое соединение, идентифицируют в УФ-свете по флуоресценции, вырезают и Рлюируют водой. Элюат упаривают до обьемэ 0,5 мл, добавляют 2 мл безводного Ртанола и затем 5 мл безводного эфира. Осадок отделяют центрифугированием, промывают указанной смесью и высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора. Получают 12 мг (90 ) целевого продукта.Физико-химические свойства полученного соединения представлены в табл. 1,П р и м е р 2, Дилитиевая соль (8-(4- (бромацетил)фенил)имидазо(2, И)пуринил -3)-Р.О-рибофуранозил-дифосфата.В условиях, аналогичных описанным в примере 1, из 94 мг(0,2 ммоль) динатриевой55 Формула изобретения1. Способ получения литиевых солей бромсодержащих 8-замещенных(имидазо 12, И)пуринил)-Р-Р-рибофуранозил- фосфатов, общей формулы соли аденозин-дифосфата получают 15 мг(11%) целевого продукта.Физико-химические свойства представлены в табл. 1.5 П р и м е р 3, Литиевая соль (8-4-(бромметил)фенилимидазо(2,1-1)пуринил-З)-ВО-рибофуранозил,5-цикл офосфата.В условиях, аналогичных описанным впримере 1, из 70 мг (0,2 ммоль) натриевой10 соли аденозин,5-циклофосфата получают продукт, который очищают с помощьюпрепаративной бумажной хроматографии всистеме н-бутанол-уксусная кислота-вода(5:2:3), Элюат, содержащий целевой продукт15 осторожно подщелачивают разбавленнымраствороМ гидроокиси лития (рн 6-6,5) и далее обрабаывают как описано в примере 1.Получают Я мг (150 ) целевого продукта.Физико-химические свойства представ 20 лены в табл. 1.П р им е р ы 4 и 5, Дилитиевая соль18-4-(бром а цетил)фен ил)имидазо(2,1-1) пури нил-З)-,В-О-рибофуранозил-дифосфата,25 Процесс проводят в условиях, описанных в примере 2, при значениях параметров, указанных в табл. 2.П р и М е р 6 (сравнительный),В условиях, аналогичных описанным в30 примере 1, вводят во взаимодействие 275 мг(0,5 ммоль) динатриевой соли аденозин- трифосфата и 1,22 г(5 ммоль) 1,4-дибромбутандиона,3. Через 48 ч по данным ТСХреакционная смесь представляет собой .35 сложную смесь трудноразделимых продуктов, не содержащую флуоресцирующих сое-.,динений.Проведение процесса за пределамиуказанных параметров. приводит к сниже 40 нию выхода целевого продукта, а в случаеувеличеня мольного соотношения нуклеотид:бис(бромметил)кетон не наблюдаетсясущественного увеличения выхода.Таким образом изобретение позволяет45 получать в достаточно простых условиях реакционно-способные алкилирующие производные аде ниловых нуклеотидов,обладающие выраженными флуоресцентрыми свойствами (их квантовый выход.,;.квантовому выходу 1,М -Ртеноаденозина,50 т,е, 0,5, в отличие от слабофлуоресцирующих 7-оксо-хлорметилпиримидо(2,1-)пуринил-З)-,В-О-рибофурэнозил-фосфатов).ос-сн в3 о 11 ОЙ где Й 1- водород; Й,О ОНЙ - группа формулы н с-Р где и -2 или 3, Ь-аили Й 1 и Й 2 образуют группу формулы 1713904 о т л и ч а ю щ.и й с я тем, что натриевые соли аденозин-ди-, или -трифосфата, или аденозин,5-циклофосфата, соответственно, вводят во взаимодействие с 1,1-(1,4- 5 фенилен)бис(2-бромзтаноном) и римолярном соотношении реагентов 1:(5-20) соответственно, в среде: смешивающийся с водой полярный органический раствори- тель - 0,1-1,0 М водный раствор ацетата 0 лития(рН 50-6,0) при 30-40 С,2. Способпоп.1, отличающийсятем, что в качестве органического растворителя используют И,й-диметилформамид, 5 диоксан, гексаметапол, 1-метилпирролидон, 1713904сч еХ ГВ еХ Ое т:дте аоф аа1, а ейе1 ОХ ХюдЗй 1д е ео 1- аЛг 3 охххЛ 1 С 31 Е Фсдяо к1- еаО бО1 йд хо ММ М СгМ .ю ююю%3 С 1 сюд 1 юг Х 1 Е1 Е1 1 Д 1 счЕ 1 1 1хЗ юд1 2 1 1 1 й 1 дсх1 т Ф 1-3 1 ХМф гд слБФ 1 1 йсЧ от 1Х 1 й --- 1С 1О 1 М 1 1 юОю1тм Е 11 Хв й 1 1 1 ЕДсм О 1 С 3 1 Х 1 1 - - ой 11 1 ОО 1 11 О1 1 1 Х 1 й1Х юФ 1 Мою1 с1 юю1 Е 1 Сююс + Х 1 Л От 1 юио 1 аО 1ХЕ 1 юг 3 11Х 1 О 1 1 ю3 1 1- ют О1- С1 Л 3 ХХа 1 Сю ГЧ1 О 3 ою13ст т 11 й Х 1ОоаСг С С 1 1 11 1 1 1 1 3 1 1 1 1 1 1 1 1 111 Мю Ч,с1 1 1 1 1с с1 1 сч М 111 1 3 11 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 3 3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 11 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 33 оюсс1 1 1 1 1 11713904 10 Таблица 2 Составитель Г. Коннова ехред М.Моргентал Заказ 660 Тираж Подписное 8 НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям пр 113035, Москва, Ж-ЗБ, Раушская наб., 4/Б ГКНТ СС йроизво венно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 10 едактор С. Патрушева Т Корректор М. Максимиш