Способ диагностики инфаркта миокарда

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 3958 9) 33 48 ВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ ГОС ПО Д ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВИДЕТЕЛЬСТВУ АВТОРСК 8,8) БЬе 3.3. Ю. 1973, 7.ИАГНОС ТИКИ(71) Всесоюзный кардиологический научный центр АМН СССР(57) Изобретение относится к медицине, точнее к кардиологии, предназначено для диагностики инфаркта миокарда (ИМ). Цель изобретения - ранняядиагностика заболевания. Порцию крови для определения активности ферментов помещают в изотонический К,Иафосфатный буйер 0,005 М, рН 7,4,(0,154 М БаС 1), содержащего 10 МЭДТА, Кровь центрифугируют при 850"10 мин. Эритроциты дважды отмывают0,154 М ИаС 1 и лизируют 20 объемами0,005 М,К, Иа-йосйатного буфера рН7,4, содержащего 10 М ЭДТА. Эритроциты цельной крови из пальца пациента лизируют тем же буфером в соотношении 1:9. Активность супероксиддисмутаэы (СОД). определяют при 25 С на спектройотометре по ингибированию восстановления синего нитротетразолия О, генерируемого при окислении ксантина ксантин-оксида" зой. За единицу активности СОД принимают кол-во фермента, необходимое для 503 ингибирования реакции. Активность глутатионпероксидаэы (ГП) определяют при 30 С по окислению И АДРН в сопряженной с глутатион-редуктазой системе при использовании гидроперекиси трет-бутила и СБН в качестве субстратов. За единицу активности ГП принимают кол-во фермента, необходимого для окисленияЩ 1 ммоль И АДРН в условиях определения. Активность СОД резко возрастает уже через 2 ч в эритроцитах при ИМ, достигает максимума через10 ч С от начала болевого приступа, оставаясь еще до 2 сут, активность ГП у тех же больных, напротив резко уменьшается, достигая минимума в те же сроки, оставаясь на пониженном уровне до 2 сут, Достоверное увеличение активности СОД и уменьшение актив" ности ГП в эритроцитах при ИМ выявляются т.о. весьма рано, уже через1-2 ч после приступа. 1 ил., 2 табл.-ъ,. -э Навеска (1 мг,на 25 мл буфера) 14,6 ед=11 с 1 9,8 мг 2,9 мг 7,6 мг 1132395Изобретение относится к медицине,в частности к кардиологии, и можетбыть использовано для диагностикиинфаркта миокарда (ИМ),Цель изобретения - ранняя диагностика заболевания.На чертеже показано графически изменение активности СОД (1) и ГП (2) в эритроцитах больных инфарктом миокарда.Способ осуществляют следующим образом.Кровь для определения активности ферментов берут в количестве 0,2 мл и помещают в 0,8 мл изотонического (0,154 М ИаСХ) К,Иа-фосфатного буфера 0,005 М, рН .7,4, содержащего 1(У М ЭДТА. Кровь центрифугируют в Рефриже го раторной центрифуге - при 850 ц 10 мин., Эритроциты дважды отмывают 0,154 М ИаС 1 и лизируют 20 объемами 0,005 М К,Ба-фосфатного буфера рН 7,4, со" держащего О М ЭДТА. Эритроциты гб цельной крови, взятой из пальца, лизируют тем же буфером в соотношении 1:9 (объем/объем). Все операции проводят при 0-(+4) С. При определении активности супероксиддисмутазы (СОД) Характеристика ЭДТА НАДФ"Н веществ Реактив 1. Растворить в 20 мл фосфатного буфера 0,05 М рН 7,4 (в мерной колбе на 25 мл) 9,8 мг ЭДТА, затем НАДФ Н 7,6 мг ОБН. Влить 11 р,1 ОББО-гейисСазе и довести буфером до 25 мл, Брать для заполнения кювет по 650 1.Реактив 2. ВООНС-бутила (М.в.= =116,246; Н=1,3761) 13 р 1 исходно 82гемоглобин охлаждают при - 10 С смесью хлороформ - метанол (3:5).Активность (СОД) определяют при 25 С на спектройотометре Н 1 СасМ(Япония) по ингибированию восстановления синего нитротетразолия О, генерируемого при окислении ксантина ксантин-оксидаэой. За единицу активности СОД принимают количество фермента, необходимое для 507 ингибирования реакции. Активность глутатионпероксидазы ( ГП) определяют при 30 С на аналитической установке "РР" (Финляндия) по окислению М АДРН в сопракенной с глутатион-редуктазой системе при использовании гидроперекиси трет-бутила и ОБН в качестве субстратов. За единицу активности ГП принимают количество фермента, необ-ходимого дпя окисления 1 моль И АДРН в условиях определения. Содержание гемоглобина (в ед на 1 г гемоглобина) определяют при помощи стандартных тест-наборов фирмы "Меях" (Финляндия) цианогемоглобиновым методом на анализаторе "РР". Смесь (Ч= =0,65 мм) для определения ОБН-пероксидазы на "РР" 1 в 340 нм (см. табл. ),го раствора растворить в 10 мл буфера, полученный раствор развести еще в 10 раз, Брать для запуска реакции100 р 1 ( см. табл, 2 ) .Образец для анализа вносить в О п 1.Смесь для определения СОД на спектрофотометре "НСасМ",Смесь 1: Ъ 950,и 1, Л - 560 нм.11 а СОз ЭДТА Ксантин 105,99 336,2 152,1 817,7 М.в. С (конечная концентрация) 12,5 10 М 10 М 10 М 0,05 М Навеска (1 мг, на 1 мл ис мл буфера) 154,9 мг 0,98 мг 0,597 мг ходного ра- створа 20 25 30 35 40 45 50 55 11,1 мг раствора ксантина (исходный) 1 растворить в 0,5 мл 0,5 н.ИаОН в мерной колбе на 25 мл, Довести до метки дистиллированной водой(НО), НО хранится в холодильнике втечение месяца,Ксантин-оксидаза. Развести исходный фермент таким образом, чтобы добавление 300 р 1 к 1950 п 1 в кюветедавало скорость 0,016-0,020 ед,опт/мин,Для приготовления смеси и разведенияксантин-оксидазы используется 0,05 Мфосфатного буфера рН 7,8. Образецвносить в 10-20 р 1.Определив активность СОД и ГП вдинамике, строят кинетические кривые,отражающие изменения активности (см,чертеж). Активность супероксиддисмутазы (кривая 1) резко возрастала уже через 2 ч в эритроцитах.больных ИМ, достигала максимальных значений приблизительно через 10 ч и оставалась на повышенном уровне до 2-х сут после болевого приступа, тогда как активность глутатионпероксидазы у этих же больных, напротив, резко уменьшалась, достигала минимальных значений в те же сроки и оставалась на пониженном уровне до 2-х сут. Начиная с 3-х сут после начала заболевания, выявлялась отчетливая тенденция к нормализации уровня активности СОД и ГП в эритроцитах больных ИМ, причем к 14-21 сут активность обоих исследованных ферментов достигала контрольных значений. Достоверное увеличение активности СОД и достоверное уменьшение активности ГП в эритроцитах больных ИМ выявляется весьма рано - уже через 1-2 ч после болевого приступа. П р и м е р 1. Больной С 46 лет. При поступлении предъявлял жалобы на интенсивную давящую боль за грудиной с иррадиацией в левое плечо, резкую слабость, потливость. Объективно; состояние средней тяжести, Температура тела 37,2 . Правильного телосложения, Кожные покровы бледные. Область сердца визуально не изменена, верхушечный толчок определяется в 5 межреберье. Границы относительной сердечной тупости расширены на 1,5 см кнаружи от средне-ключичной линии. Тоны сердца приглушены, правильный ритм прерывается единичнымиэкстрасистолами частотой 4-6 в мин,Пульс 75 уд/мин, АД=130/90 мм рт.ст. В легких веэикулярное дыхание, хрипов нет. Со стороны органов.пищеварения и мочевьщелительной системы патологии не выявлено. Предположительный диагноз: острый инфаркт миокарда. Больному сделали анализ крови (через 1 ч после болевого приступа).СОД (ед/г Нв) 9806; ГП (ед/г Нв) 15,19; КФК (ммоль/ч л) 4,01; МВ-КФК (ммоль/ч л) 0,49.Как видно, активность СОД повысилась, а активность ГП снизилась через 1 ч после возникновения болевого приступа. Активность же основных ферментов, тестирующих инфаркт миокарда (КФК, МВ-КФК), через 1 ч после возникновения болевого приступа не меняется. На основании данных по изменению активности ферментов СОД и ГП можно предположить диагноз инфаркта миокарда. Больному сделанаЭКГ, Ритм синусовый, прерываетсяединичными желудочковыми экстрасистолами. Электрическая ось отклоненавлево. Горизонтальная позиция сердца.Отмечается смещение амплитуды зубца5 1323958 Н. элевация сегмента 8-Твы Э 1 4 сокии (+), остроконечный Т, Ди-"5агноз: ИБС, острый трансмуральный передне-перегородочный инфаркт мио 5 карда. Желудочковая экстрасистолия, Таким образом, диагноз инфаркта миокарда подтвержден с помощью ЭКГ. ДинамикаСОД3 ч. 92255 ч. 93557 ч. 11657 10 15 активности ферментов:ГП КФК МВ-КФК15,98 5,67 2,6615,24 8,09 3,4715,51 15,58 10,53 Пример 1 наглядно демонстрирует, что изменения активности КФК и МВКФК произошли гораздо позже (активность КФК увеличилась лишь к 7-му, а.МВ-КФЕ - к 3-му ч от начала боле вого приступа, в то время как изменения активности СОД и ГП произошли уже через 1 ч после начала заболевания.25 П р и м е р 2, Больной В-н, 60 лет. При поступлении предъявлял жалобы на давление и сжимающие боли за грудиной, возникающие при физической на, - грузке и в покое, иррадиирующие в ле- З 0 вое плечо. Объективно:.состояние удовлетворительное, правильного телосложения. Видимые слизистые цианотичны. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Область сердца визуально не изменена. Границы относительной сердечной тупости: левая - на 0,5 см кнаружи от средне"ключичной линии, верхняя и правая не изменены. Тоны сердца приглушены. На верхушке про слушивается грубый систолический шум. Акцент 11-го тона на аорте. Пульс 2 уд/мин, АД 140/80 мм рт.ст. Предположительный диагноз - инфаркт миокарда, нестабильная стенокардия. Больному сделан анализ крови:СОД (ед/г НВ) 4331; ГП (ед/г НВ)17,18; КФК (ммоль/ч л) 4,03,На основании анализа крови (активность СОД и ГП не изменена) диагноз инфаркта миокарда отвергается.На ЭКГ - признаки рубцовых измененийнижней локализации. В момент болевого приступа - групповая желудочковая экстрасистолия. Диагноз: ИБС,нестабильная стенокардия.В стационаре у больного возниксильный приступ болей эа грудиной,сопровождающийся пароксизмальной желудочковой техикардией. Через 1,5 чпосле возникновения болей, анализкрови: СОД 8948; ГП 13,17; КФК 4,02,На основании данных изменения активности СОД и ГП у больного предпола.гается диагноз инфаркта миокарда.ЭКГ: Подъем Б - Г, 11, 111 АЧР., Диагноз: Инфаркт миокарда нижней локализации. Активность КФК: через 4 ч -6,02, через 8 ч - 20,17.Таким образом, активность КФК изменилась только к 8-му ч от началазаболевания, тогда как активностьСОД и ГП изменилась уже через 1,5 чи на основании изменения активностиСОД и ГП был правильно поставлендиагноз инфаркта миокарда. Формула изобретения Способ диагностики инфаркта миокарда путем исследования активности ферментов крови, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью ранней диагностики, в эритроцитах крови определяют активность супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы и при увеличении активности первого и снижении активности второго относительно нормы диагностируют инфаркт миокарда.11323958 ф %ю Валеева оставител Техред М. Корректор М.Шароши Редактор Е,Копча з 4859 Тираж 775 ВНИИПИ Государственно по делам изобретени 3035, Москва, Ж, Ра