Способ определения углеводов в молочных смесях

(191 (11) ЗШС 010330 Мье 440 1 ДЯ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМ,Ф ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(56) 1. Качераускене Г.Д., Маргелите Ю.В. Применение З,б-динитрофталевой кислоты для количественногоопределения углеводов. Тезисы докладов 111-й научно-технической конференции Литовского филиала ВНИИИС,1975, с, 202.2. Мошазе Т. МЖа 1. Л. Ог 8 ап 1 сАпа 1 уз.1.з ХХЧ 11, КарЫ Регегш 1 пас 1 опоЕ 1.ас 1 озе 1 п М 11 Е Рию 11 гес 1 Мц 11 сапд 1,осгозе апй Бисгое 1 п Соп(1 епзеоМ 111 ю 11 Ь 3,6-Р 1 п 1 ггорИа 11 с АсЫ . -(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УГЛЕВОДОВ В МОЛОЧНЫХ СМЕСЯХ, предусматривающий удаление белковых веществ, фильтрование исследуемой пробы и смешивание с реактивом, выдержку, измерение оптической плотности и определение количества лактозы и мальтоэы по калибровочным графикам стандартных растворов лактоэы и мальтозы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и повышения его точности, после фильтрования отбирают две равные части фильтрата и добавляют в них 0,57.-ную З,б-динитрофталевую кислоту, при этом выдержку одной части реакцион ной смеси ведут при 72-75 С и определяют количество лактозы в ней, а выдержку второй части - при 82-100 С С с последующим определением суммарного количества лактозы и мальтозы в ней, а по разности вычисляют количество мальтоэы.1108Изобретение относится к молочнойпромьпВпенности, а именно к методам фтехнологического контроля молочныхпродуктов и может найти применениена молочных комбинатах изготовляю 95щих детские молочные смеси, и в научно-исследовательских лабораториях.Известно применение З,б-динитрофталевой кислоты для количественного определения углеводов в молочных продуктах. По известной методикеопределяют оптическую плотность исследуемых растворов, а процентноесодержание прямо редуцирующих углеводов вычисляют по калибровочной кривой.глюкозы и соответствующей форму-.ле. Для определения содержания сахарозы проводят ее кислотную инверсию 13,Наиболее близким к предложенному20по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ определения углеводов вмолочных смесях, предусматривающийудаление белковых веществ, фильтрование исследуемой пробы и смешивание с реактивом, вьдержку, измерение оптической плотности и определение количества лактозы и мальтозы 2по калибровочным граФикам стандартныхрастворов лактозы и мальтозы 23,Известный способ заключаетя втом, что к 2 см разведенного иосветленного раствора исследуемогопродукта в пробирке добавляют по1-3 см реактива А (1,0 г З,б-ди- З 5нитрофталевой кислоты (ДНФК) и0,5 г безводного К СОЗ растворяют в500 см дистиллированной воды) иреактива В (125 г безводного К СО 5растворяют в 450 см дистиллированной воды, добавляют 25 г НаЯО идоливают водой до 500 см), выдерживают в кипящей водяной бане 10 мин,охлаждают в течение 3 мин, в пробирку добавляют 20 см дистиллированной 45воды, перемешивают и производятизмерение оптической плотности (ОП)раствора на спектрофотометре придлине световой волны 450 нм. Покалибровочному графику лактозы находят содержание лактозы в случаеисследования коровьевого молока.При определении количества лактозы исахарозы этим методом сначала определяют содержание лактозы,производят 55инверсию сахарозы общеизвестным способом с НО, а после ее инверсии оп"ределяют сумму всех редуцирующих са 355 2харов, количество которых вычисляют по калибровочному графику глюкозы. По разнице результатов исследования сахаров до и после инверсии сахарозы и по соответствующей формуле вычисляют количество сахарозы и лактозы,Недостатком этих способоа является невозможность осуществления раздельного определения редуцирующих углеводов, например, лактозы и мальтозы, которые являются составной частью молочных продуктов, в частности, детских молочных смесей.Цель изобретения - упрощение и повышение точности определения углеводов в молочных смесях.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения углеводов в молочных смесях, предусматривающему удаление белковых веществ, фильтрование исследуемой пробы и смешивание с реактивом выдержку, измерение оптическбй плотности и определение количества лактозы и мальтозы по калибровочным графикам стандартных растворов лактозы и мальтозы, после фильтрования отбирают две равные части фильтра и добавляют в них 0,5 -ную Зб-динитрофталевую кислоту, при этом выдержку одной части реакционной смеси ведут при 72-75 С и определяют количество лактозы в ней, а вьдержку второй части - при 82-100 С с последующим определением суммарного количества лактозы и мальтозы в ней, а по разности определений вычисляют количество мальтозы.Доза внесения З,б-динитрофталевой кислоты 0,5 -ной концентрации составляет 1 см на 10 см реакционной смеси, как наиболее оптимальной при проведении реакции. Увеличение концентрации и дозы реактива вызывает увеличение массы исследуемой пробы молочной смеси.На фиг, 1 показано влияние времени вьдержки на реакцию углеводов с 0,5%-ной З,б-динитрофталевой кислотой; на фиг.2 - влияние температуры на эту реакцию.Как видно из Фиг.1 реакция происходит равномерно в интервале от 10 до 20 мин вьдержки и тем самым является благоприятным временем выдержки для определения углеводов. Оптимальное время выдержки реакционной смеси 15 мин. Лактоза начинает реагировать с 0,57-ной 3,6-динитрофталевой кислотой при 72 ОС, мальтоза при 82 С (фиг.2), отсюда следует, что в интервале температур 72-75 С реагирует лишь лактоза и можно определить ее, а в интервале 82-100 С - сумму лактозы и мальтозы. Выще 100 С проводить реакцию нецелесообразно, так как достижение более высоких температур потребовало бы дополнительных затрат и более дорогой среды подогревания. Реакцию для определения суммы лактозы и мальтозы лучше всего проводить в бане кипящей воды, т.е. при 100 С.Сравнение результатов определения углеводов, полученных предполагаемым способом и йодометрическим методом, представлены в табл.1.Способ определения углеводов в молочных смесях осуществляется следующим образом.Молочная смесь взвешивается разбавляется в теплой воде (40- 50 С), фильтруется. После фильтрования отбирают две равные части фильтрата в количестве от 1,0-1,5 см в пробирки вместимостью 25 см,в них добавляют по 1 см реактива А и по 0,5 см реактива В и объем в обоих пробирках доводят до 10 см дистиллированной водой. Реакционная среда имеет рН ) 10. Одну пробирку выдерживают в водяной бане при 75 С, а другую в кипящей водяной бане в течение 15 мин, затем охлаждают и измеряют ОП растворов на спектрофотометре при длине световой волны 450 нм. Затем по калибровочному графику стандартных растворов лактозы и мальтозы и по формуле вычисляют содержание углеводов. По результатам исследования раствора первой пробирки находят количество лактозы (Л), а по результатам исследования раствора второй пробирки находят общую сумму лактозы и мальтозы (Л+М). По разнице результатов находят содержа" ние мальтозы: (Л+М) - Л = М.В предлагаемом способе для проведения реакции реактивы А и В применялись измененного состава, а именно: А, (0,57.-го раствора З,б-динитрофталевой кислоты) и В 1(1,0 Я-го раствора МаОН).П р и м е р. Взвешивают в химическом стакане 5,0 г молочной смеси. Навеску растирают в теплой (45 С)С 100А- количество лактозы,7.,- концентрация раствора,мг/см, вычисленная по калибровочному графику,Ч - объем фильтрата, взятыйдля реакции,см,- количество продукта, соответствующее 1 см раствора.Для определения количества мальтозы вторую пробирку с растворомвыдерживают в кипящей водяной бане 15 мин, после чего охлаждают до40 комнатной температуры и измеряют ОПна спектрофотометре при длине световой волны 450 нм относительно где Л С,(Л+М) определяют по формуле: Лц 50 где Л+М- количество лактозы и мальтозы, 7.;- концентрация раствора,мг/см, вычисленная по ка-либровочному графику, - объем фильтрата, взятый для реакции, смэ,- количество продукта, соответствующее 1 см раствора. 55 7 дистиллированной воде, переливаютв мерную колбу вместимостью 100 см,охлаждают до комнатной температурыи добавляют по 1 см осветлителейцинка уксуснокислого и калия железистосинеродистого. Объем доводятдистиллированной водой до метки,перемешивают и фильтруют. Затем вдве градуированные пробирки вливают О по 1 см реактива А, по 1,5 смприготовленного выше фильтрата ипо 0,5 см реактива В . Объем в обоих пробирках доводят дистиллированной водой до 10 см и перемешивают.15 Далее для определения количествалактозы одну из пробирок с растворомвыдерживают в водяной бане при 75 С15 мин, после чего охлаждают докомнатной температуры и измеряют ОП 20 на спектрофотометре при длине световой волны 450 нм относительно воды.Количество лактозы (Л) определяютпо формуле:1108355 Далее вычисляют количество мальтозы (М) по формуле: М " (Л + М) " Л Результаты определения лактозы и мальтозы в молочной смеси показа" ны в табл,2.Предлагаемый споссб определения углеводов позволяет селективно определить количество редуцирующих углеводов лактозы и мальтозы, чего Таблица 1 Установленное количество углеводов, 7 Йодометрическим Предлагаемым способом методом Лактозы Мальтозы Общая сумм ьтозы ктозы 0 1,0,12 7 0,82 2,6 а б л и ц Количество лактозы оличество мальтозы ктическое Установленое актическое Установ ленное 75 С 100 2 2,6,93 2178 Фактическое количество углеводов, 7 П раствора при проведенииеакции при нельзя осуществить химическим илиспектрофотометрическим методом, таккак оба углевода являются альдосахаридами и имеют схожие редуцирующие свойства. Кроме того, предлагаемый способ отличается простотой ибыстротой провецения анализа посравнению с хроматографическим методом, является менее сложным по 10 сравнению с прототипом, так какдля анализа применяются упрощенныереактивы А, и В13 108355 ставитель А.ульяновахред О.Неце Корректор М. Демчи едактор К. Волощук Тираж 823 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5