Способ получения суммы фенольных соединений, обладающей желчегонным и противовоспалительным действием

l ю 1 В е СТ акун тво СССР20,09.71. ЕНИЯ СУИМЫ ФЕБЛАДАЮЩЕЙ ЖЕЛГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЙЗ ОПИСАНИЕ ИК АВТОРСКОМУ СВ(71) Харьковский.научно"исследова- . тельский хиеко-фармацевтический институт и Тернопольский государственный медицинский институт(56) 1,. Авторское свидетельс И 309709,.кл. А.61 К 35/78, (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ, О ЧЕГОННЫИ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ ДЕЙ" СТВИЕИ путем экстракции растительнот го сырья этанолом, упаривания экст. ра 1 ста, растворения остатка в воде и очистки полученного водного раствора органическим растворителем, о т л ич а. ю щ и й с я тем, что, с целью расаирения сырьевой базы, экстракции 7 В-ным этанолом подвергают измельченные соцветия арнйки горной (Агп 1 са еопйапа 1.), при соотноще" нии сырье:экстрагент 1:9-:12, водный раствор госле очистки хлороформом обрабатывают бутанолом при соотношении 1:2-1:3 и упаривают,о35 1 10173Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности икасается получения природных полифенолов, которые могут Ьыть использованы в качестве лекарственного средства,Известен способ получения полифенолов путем зкстрагирования соцветий бессмертника 504-ным зтанолом, упаривания, растворения остатка в воде с последующей обраЬоткойего смесье этилацетата и этанола (11.Недостатком этого способа является ограниченность сырьевой базы 15в связи с природным происхождением сырья.Целью изобретения является расширение сырьевой базы.Поставленная цель достигается 20тем, что согласно способу получения суммы фенольных соединений,обладающей желчегонным и поотивовоспалительным действием, включающему экстракцие растительного сырья 25этанолом, упаривание экстракта,растворение остатка в воде и очисткуполученного водного раствора органическим растворителем, измельченныесоцветия арники горной (Агп 1 са поп- зоСапа О зкстрагирует 78-821-нымэтаналом при соотношениисырье:экстрагент 1:9-1:12, а водный растворпосле .очистки хлороформом обраЬаты,вают бутанолом при соотношении1:2-1:3 и упаривают.Способ осуществляется следующим.образом.Измельченные цветочные корзинкиарники горной экстрагируют 78-82 ным этанолом, экстракт упаривают доводного остатка, который очищаютот липофильных веществ обработкойхлороформом, очищенный водный раствор обрабатывают бутанолом в соотношении 1;2-1:3, бутанольное извлечение упаривают досуха и измелЬчают, Выход целевого продукта составляет 3,75-4,й .П р и м е р , 1 кг измельченныхкорзинок арники горной (Агп 1 са пкеСапа О экстрагируют десятикратнымколичеством 80-ного этилового спирта. Полученный экстракт упаривают ввакууме (ост. давление 100 -140 мм рт. ст.) при 80-90 оС до густого остатка (0,5 л), разЬавляютдвукратным количеством дистиллированной воды, , а водный раствор обрабатывают хлороформом в соотношении2:1 к полученному раствору с цельюудаления липофильных веществ, очищенный .таким образом водный растворобрабатывают бутанолом в соотношении 1:2-1:3, Бутанольные извлеченияупаривают под вакуумом до полного удаления растворителя, сухой остатокизмельчают. Получают 45 г (что составляет 4,54 от веса сухого сырья)аморфного желтовато-коричневого порошка со специфическим запахом,слабо горького вкуса, плохо.растворимого в холодной воде, растворимого в горячей воде, 94-ном спирте, нерастворимый в ацетоне, бензоле,хлороформе,Сумма полифенольных соединенийарники горной обладает выраженнымжелчегонным действием, противовоспалительным эффектом и по желчегонной активности не уступает фламину,Преимущество препарата арники заключается.в более выраженном действии на синтез желчных кислотСравнительное изучение желчегонной активности препарата суммы фенолов арники горной и фламина показывает, что при однократном введениипо 25 мг/100 она примерно одинакова. Увеличение скорости секрециижелчи составляет соответственно 19 и2 М . При повторном введении препаратов в течение 7 дней в среднеи на16 под влиянием препарата арники ина 204 - фламина, При более продолжительном повторном введении препаратов (в течение 14 дней) желчегонное действие суммы фенольных соединений арники проявляется почти в 1,5раза больше.по сравнению с таковым,.фламина. Прирост, показателя общегоколичества выделившейся желчи за четыре часа наблюдения составляет 37 ьпод влиянием первого препарата и264 - второго,Под влиянием суммы Фенольных со-,единений арники горной концентрацияжелчных кислот в желчи увеличиваетсяво всех опытах: при однократном введении препарата суммарная концентрация желчных кислот возрастает в среднем с 1421+139 до 1978+134 мг.1, ипри повторном - в среднем с 155868до 2140+156 мг А (через 7 дней) и с.2157+206 до 2728+259 мг.Ф (,верез 14дней),фламин также вызывает увеличениесодержания желчных кислот, однакония с желчью холатов и билирубина,0 что свидетельствует о торможении синтеза и секреции печенью как желчных кислот, так и билирубина.Уже на 7-Й день после введенияскорость секреции желчи возрастаи ла с 2,9+0,1-3,0+0,2 мг/мин/100 до3,1+0,1-3,4+0,1 иг/мин/100 или почти на 106, а на 14-й день - с 2,8+0,13,2+0,1 до 2,9+0,1-4,4+0,1 иг/мин/100или на 1 о"ь, достигнув исходного уров.ня.ФПрименение препарата суммы феноль: ных соединений арники способствуеточень быстрому восстановлению нарушенного четыреххлористыи углеродомИ синтеза желчных кислот, причем в.большей мере, чем применение фламина.Уже на 7-й день наблюдения суммарнаяконцентрация желчных кислот болеечем в 2 раза превышает, контрольныйуровень. Она достигает 1826+38 иг.1против 1421+139 иг.1 у интактных животных, В аналогичных опытах Фламинтакже приводит к повышению показателя суммарной концентрации, но не отакой степени, как препарат; арникиМгорной (соответственно 1667+70 и1826+38 мг А),К 14-му дню суммарная концентрация желчных кислот под влиянием препаратов арники возрастала с 1086+82до 1963+133 иг, а фламина - до 1783++144 мг А, И в первом и во второмслучае этот показатель намного превосходит контрольный уровень (1421++139 игА).Под влиянием препарата суммы фенольных соединений арники. быстро восстанавливается содержание и билирубиВиа в желчи. Уже на 7-й день концентрация его увеличивается в средфф нем с 13,81+1,280 до 18,81+1,831 иг.,особенно за счет пигмента, конъюгированного с: глюкуроновой кислотойс 10,56+1,100 до 15,25+3,724 мг.Ъ.На 7-й день заболевания под влиИ яниеи препарата арники показательобщего количества выделяемых с желчью желчных кислот увеличивается с1,358+0,094 до 3,558+0,034 иг/100/ч,3 101лишь при повторном введении, При од, нократном введении прироста этогопоказателя желчегонного действия Фламина не происходит.При однократном введении суммыФенольных соединений арники горнойвыделение желчных кислот возрастаетв среднем с 2,867+0,208 до 4,666++0,51 (р (0,05) мг 7 ч/100 или на 633,в тои числе тауроконъюгатов на 42 ь игликонъюгатов - в три раза. В меньшей мере действие проявляется подвлиянием фламина - соответственнона 8,3 и 434.Эффективность влияния на дистрофию печени белых крыс суммарногоФенольного препарата арники горной всравнении с Фламином,Опыты поставлены на 40 белых крысах массой 120-160 . г. Острую дистроФию печени вызывали путем введенияпод кожу 501-ного масляного растворачетыреххлористого углерода по 0,4 млна 100 г массы животного ежедневнов течение 4 дней. С целью профилак"тики некрозов на иесте введения ядадозу последнего делили пополам и вводили в обе задние лапы в Области бедра,Об эффективности полученного средства судили по данным определенияФункционального состояния печени,проводимого на 7-й,и 14"й день от, начала введения четцреххлористого углерода. В качестве тестов Функционального состояния йечени служили:скорость секреции желчи за каждыйиз четырех часов наблюдения, общееколичество желчи, подученное на 4.ч,концентрация в желчи кислот (суииарно и раздельно конъюгированнцхс таурином и глицином), билирубина(суимарно, прямого и непрямого) и холестерина, а также общее количество этих ингредиентов, выделяющихся с желчью,На 7 и 14-й день после начала воздействия на животных четыреххлористого углерода интенсивность секрециижелчи была намного ниже по сравнению с интактныю, На 7-й день наблюдения скорость секреции желчи не превышала 2,9+0,1 - 3,0+0,2 мг/мин/100против 3,1+0,2-3,3+0,1 в контроле, ана 14-й день,- 2,9+0,1-3,2+О,1. Вэти сроки наблюдения за 4 ч было получено 714+3,2 и 720+24 мг/100 желчи или на 15 и 14 меньше, чем у инт-тактных крыс, Происходило также зна 7338 4 чительное уменьшение концентрации желчных кислот в желчи (на /-й день почти вдвое), в том числе конъюгированнцх с таурином и глицином, а также билирубина. Практически не изменялась концентрация холестерина в желчи, Еще в большей иере наблюдалось снижение показателей выделе5 .1 017338 б значительно превосходя нормальный , весом правой и левой лапки судили о уровень (в среднем 2,867+0,208), степени воспалительного отека (контПротивовоспалительное действие рольные данные). Препарат мышам суммы фенольных соединений арники вводили внутрь в дозах 1 О мг/100, горной. 3 25 мг/100 и 50 мг/100 эа 2 ч доМышам весом 20-25 г в толщу бед- введения формалина. ра правой задней лапы вводили 0,1 мл По разнице в весе лапы у мышей кон 1 ь-ного раствора формалина, Спуетя трольной группы и получавших препа ч животных забивали и на уровне рат арники судили о противоотечном тазобедренного сустава отрезали обе 1 в действии.лапы, их взвешивали. По разнице между Результаты приведены в таблице,1 ФВлияние суммы фенольных соединений арники горнойна отек лапы, вызванный у мышей формалином Доза в мг/100 Величина отека Противовоспалительный эффект,Вещества мг 4 формалин 405+16 ф 100 Формалин+ препарат 3 Я+28 87,6 12,4 10 Формалин+ препарат 315+21 77,7 22,3 Формалин+ препарат 21,0 50 320+19 79,0 Из данных таблицы видно, что у мы-, шей под влиянием формалина развивается отек лага. Максимальная величина отека лапы в контроле составляет 405+16 мг (100 ь). У мышей,3 получавших препарат, отек лапы значительно меньше.Во второй серии опытов изучали действие веществ на асептический отек лапы крысы, Опыты проводились на крысах массой 120-180 г. Животные были распределены на две группыКрысам первой группы (подгруппы 1,2,3) под апоневроэ задней лапы вводили О,1 мл 2,53-ного раствора формалина, 0,00 Я раствора серотонина, 5 декстрана, Крысам второй группы (подгруппы 4,5,6)одновременно с флогогенными веществами и спустяч вводили препарат арники горЯ ной в дозе 25 мг/100, В последующие дни препарат вводили 2 раза в день до дня исчезновения отека. Объем лапы измеряли онкометрически по методу И, А. Салямоиа, О противовоспалительном эффекте судили по разнице в вели-. чине отека лапы контрольноь группы и животных, получавших одновременно с флагогенными веществами фенольные вещества.После введения формалина мак 1 симальная величина отека наблюдаласьспустя б ч и сохранялась в пределахэтого уровня в течение последующих6 дней, На .10-й день, сравнительнос первым днем, отек лапы уменьшалсяпочти в 2 раза и составил. 58,1,к 12-13 дням отек лапы постепенноуменьшился, объем ее достиг исходной величины,Под влиянием декстрана максималь-.ное развитие экссудативной фазывоспаления отмечалось спустя 60 мин,серотонина " 3 ч. Затем произошлопостепенное уменьшение объема лапы,достигающее исходных величин после.введения декстрана спустя 72 ч и серотонина - спустя 48 ч. Максимальныйотек на фоне действия декстрана составил 133,3+6,71, серотонина 108,6+4,9 ьУ крыс, которым одновременно сфлогогенными веществами вводили суммуфенольных соединений арники, отек, посравнению с контрольными данными,на всех моделях был значительно меньСоставитель Е ВолковаТехред.С,.Мигунова Корректор И.Демчик Редактор С. Тимохина Заказ 3423/9 Тираж 713ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Иосква, Х, Раушская наб.; д, 4/5ю Подписное филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 7 10173 ше, Наступило также сокращение време.мени возвращения объема лапы к исходной величине, У крыс, получавших препарат, на формалиновой модели величина отека,.составила 57,4 ь, т.е. в з два раза меньше, чем в контрольной группе. На шестой день отмечалось возвра".щение объема лапы к исходной величи-. 1 вне. Величинафотека лапы у крыс, кото 38 8рым вводили препарат арники на фо-н не действия серотонина, составляла 88,5+6,4) декстрана - 100+5,М. Следовательно, величина отека, в отличие от контрольных данных, соответственно моделям на 32,й, 16,63 .и 25,6 меньше.Эти данные указнвавт, что сумма Фенольных соединений арники горной обладает выраженным противовоспалительным действием,