Штамм бактерий bacillus sp. для получения биоцида микромицетов

(56) 1, Авторское свидетельство СССРВ 751382, кл. А 23 К 1/00, 1980,2, Патент США ЬЬ 3992525, кл. А 61 К35/74, 1976,4 Изобретение относится к микробиологии, касается получения нового штамма бактерий-антагониста микроскопических грибов и может быть использовано в различных областях, где есть необходимость подавления жизнедеятельности микромицетов: в техйике, в сельском хозяйстве, в медицине,Целью изобретения является получение штамма бактерий-продуцента биоцида против микромицетов, разрушающих смазочные материалы,Предлагаемый штамм бактерий Васюцз зр. ВД отличается тем, что подавляет рост микромицетов иэ 11 родов; АИегпаг 1 а, Азрегд 11 цз, Реп 1 с 1111 цв, РЬа 1 орйога, Оос 1 аб 1 ца, Ясорцаг 1 орз 1 з, КЬцзК 1 а, 1 аз 1 об 1 р 1 об 1 а, Рцзаг 1 цт, ОгесЬз 1 ега, Тг 10 гасЫца-деструкторов различных смазочных материалов и сплавов, возбудителя болезней злаков ОгесЬе 1 ега гомгата, что делает возможным использование продуктов ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНВЕДОМСТВО СССР1 ГОСПАТЕНТ СССР)(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ ВАС ШЗ ЗР. ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЦИДА МИКРОМИЦЕТОВ 157) Использование: микробиологическая промышленность, получение биоцидов микромицетов и касается нового штамма для получения биоцидов, Сущность изобретения: штамм бактерий Васцз зр, выделен из консервационного масла К, защэпцающего алюминиевый сплав, Депонирован в ВКМ под номером ВД, Штамм продуцирует биоцид против грибов рода ,Азрег 911 цз, Репс 1 цв, РЬа 1 орЬога, Атегпага, Рцзаг 1 цв и др. 2 табл,метаболизма предлагаемого штамма в технике в составе биоцидов для сохранения смазочных матерйалов, а также в сельском хозяйстве для обработки злаков.Штамм бактерии ВасИцз зр. ВД выделен из консервационного масла К, защищавшего алюминиевый сплав АМцв ходе натурных испытаний в течение 16 мес на сельской станции в тропическом климате Республики Куба,Штамм бактерий Вас 1 цз зр, ВД депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР.Штамм бактерий Васйцз зр, ВД имеет следующие характеристики,Морфологические признаки,Клетки палочковидные, почти прямые, с загнутыми концами, 0,7-0,8 х 2-4 мкм, подвижные. Реакция по Граму положительная, Образуют термоустойчивые эндоспоры, овальные, в клетке расположены центрально Спорангий не расширен,Способ определения активности штамма, Использован метод прямого антагониз ма, при котором индикаторные культуры микроскопических грибов засевалиодновременно с культурой штамма продуцента (перпендикулярными штрихами к штриху бактерии-продуцента на чашки Петри, со держащие питательную среду БСА (сусло- агар и МПА в соотношении 1:1), Через 5-7 дней инкубации в термостате при температуре 30 С учитывали результаты опыта. Критерий оценки результатов - величина эоны Культуральные признаки,Через 18 ч при 37 С на агаре Хоттингера штамм образует желтоватые колонии диаметром 1-3 мм, плоские с неровным краем, более светлым, чем центральная часть, с возрастом формируется сетка морщин,На жидких средах растет с образованием складчатой пленки, слабой мути и небольшого осадка.Физиолого-биохимические признаки.Пределы температур для роста 20- 50 М, оптимум 37 С. Пределы рН для роста 5,5 - 9,5, оптимум 7,0. Аэроб. Границы роста определены на агаре Хоттингера. Для спорообразования необходимо введение в среду дрожжевого экстракта. Азот утилизирует в виде мочевины, нитратов, Штамм образует каталаэу и оксидазу. Реакция Фогес-Проскауэра положительная. Ферментирует с образованием кислоты углеводы: глюкозу, маннит, ксилозу, арабинозу, Не утилизирует лактозу, сахарозу, дульцит, салицин, рамнозу, мальтоэу, сорбит, трегалозу, галактозу, целлобиоэу. Образует индол. Восстанавливает нитраты. Активно гидролизует желатин, казеин, крахмал, мочевину. Не расщепляет тирозин, эскулин. Аргининдегидролазной и лецитиназной активностью не обладает, фенилаланин не дезаминирует.Чувствителен к антибиотикам: олеандомицину, эритромицину, ристомицину, ампициллину, неомицину, пенициллину, линкомицину, стрептомицину, канамицину, левомицетину,Растет на средах в присутствии лиэоцима (0,001 ф), азида натрия (0,02 ф ), хлорида натрия (2-10), а также на простой синтетической среде Ми на среде Сабура.Испытание культуры на токсичность: по методике Госфармакопеи Х не выявлено токсигенных или патогенных свойств микроба.Хранение штамма, Сохраняется в лиофильно высушенном состоянии в обезжиренном молоке, а также в пробирках на агаре Хоттингера. торможения роста микромицетов предлагаемым штаммом бактерий (в мм).П р и м е р 1, Бактерии ВасПоз зр.ВД засевают одновременно с микро 5 мицетами-деструкторами смазочных материалов по способу определения активностиштамма (см, табл. 1).П р и м е р 2. Бактерии ВасИ 1 цз зр.ВД засевают так же, как описано впримере 1, с микромицетом Огесйеегагозсгаса-возбудителем элаковой гнили, Через 5-7 дней культивирования зона задержки роста гриба составила 60 мм.П р и м е р 3, Бактерии Васйцз зр. В -15 1792 Д засевают так же, как в примере 1, смикромицетами-деструкторами различныхсплавов, Результаты отражены в табл. 2,Таким образом, как показано на примерах, предлагаемый непатогенный штамм20 бактерий ВасИ 1 оз зр. ВКМВД обладаетшироким спектром антифунгальной активности, выявленной на 11 штаммах микроскопических грибов, принадлежащих к 10родам,Всего было испытано 20 штаммов грибов иэ 11 родов. В остальных случаях, неприведенных в примерах, штамм бактерийВасИцз зр. ВКМВД также подавлялрост микромицетов, По чувствительности к30 штамму-продуценту индикаторные культуры можно расположить следующим образом: - высокочувствительные штаммы (зоназадержки роста 30 мм) - 12 (АзрегдИ 3 озсеггеоз Т 3 тов 61, РепсИИцв суапеов (Ва 1 п.35 апс Багс,) В 1 оогде 183, Реп 1 с 1131 цвзсо 1 оп 1 егцв Тров 203., Реп 1 с 1111 цв1 гедцепсапе 9/езс 11 пд 191, РЬ 3 аоррбога1 адегЬегдИ (МеИп а, Мапп 1.) Сопапс 243,РЫа 3 орйога 1 аес 393 аса (3 адегЬ. а. МеИп)40 Сопапс 231, О 1 ос 1 ас 31 ов Ьосгус 1 з Ргеозе 273.,Бсоро 3 аг 3 орз 1 з Ьгеч 3 сао 31 з (Басс.) Ва 3 п 1 ег263, КМзйа сгугае УК, 3.аз 1 ойросас 3 теоЬговае (Рас.) бгЮ ес МацЫ ВКМГ 31890, Гцзаг 1 цв завЬцс 1 пцв Гост ВКМГ 45 31860, Огес 3 тз 1 егэ гозсгаса (ОгесЬз 1 ег). ВсЬагбзоп ес Ггазег ВКМГ).;- умеренночувствительные штаммы (эона задержки роста 20-30 мм) - 6 (Азрегдйцзп 1 дег чап Т 3 едйев ВКМГ, АзрегдИцз0 Яачцз (31 п 3 с) Гг. ВКМГ, А 1 сегпаг 1 аа 1 сегпаса (Гг.) Кезе 3 ег 23, Реп 3 с 113 цвсйгузодепцв Т 3 совВКМГО, Гцзаговзо 1 ап 3 (Магс.) Арр. есччг, чаг. агд 3 Иасеов (Гг.)В 1 а 3 113, Тгс 3 гасЫцв гозецв ч. Веува5 ВКМГ);- малочувствительные штаммы (эона задержки роста 10-20 мм) - 2 (АзрегдИцзозсцз (Вап,) Тров ес СпогсЬ 73, Гцзаг 3 цвзо 3 ап 3 (Магс,) Арр. ес ччг. ВКМГ).1814659 На основании приведенных данных можно рекомендовать штамм бактерий ВэсИоз зр, ВКМВД для использования его в качестве перспективного продуцента антифунгального вещества с целью 5 создания биоцидов, повышающих биостойкость различных смазочных материалов и сплавов. Ввиду отсутствия токсигенных и Таблица 1 10 Подавление бактерией ВасПоз зр, ВД роста микроскопических грибов-деструкторов смазочных материаловВеличина зоны торможения оста, мм35 45 Деструктор смазок Деструктор смазок Деструктор технических масел Деструктор консервационных смазочных мате иалов30 50 Таблица 2 Подавление бактерией ВасИцз зр, ВКМВД роста микроскопических грибов-деструкторов сплавов.Зона торможения роста ин икато ного штамма Индикаторный штамм микроми- Характеристика индикаторного штамма етов 1 ТгЮгасйогп гогеое ч, Веуп 1 а В КМ ЕДеструктор алюминиевыхмедь-марганецсодержащих оплавов Деструктор стальных сплавов, покрытых консервационными смазочными материалами, защищенными йротивомик обными и иса ками Гозагогп заеЬоспот Росс ВКМГОпатогенных свойств штамм представляет интерес в плане использования его метаболитов в растениеводстве, ветеринарии и медицине.формула изобретения Штамм бактерий ВасИоз зр, ВКМ В 1792 Д для получения биоцида микромицетов.Деструктор алюминиевых сплавов Деструктор стальных,оксидных алюминиевых и магниевых сплавов, а также возбудитель аспергиллезов у животных Деструктор сплавов, покрытых консервационными(Рэт,) Огтт. ет МавЫ ВКМГ 3189035 смазочными материалами Деструктор алюминиевых О гессЕга гозтгата(ОгесЬзег) Й 1 сЬагдзоп ет Вазег ВКМЕсплавов, покрытых консервацион ными, смазочными мате иалами 60 Составитель Л.БлинковаТехред М.Моргентал Корректор А.Козориз Редактор Л,Волкова Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 1841 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4 Я