Способ получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 9) (1 ИС 12 Н 1( 19 38 с НИЕ И БРЕТЕН ТОРСКО К ауч- е- воз- дрожЦельюение Фупособа Изобрет огни, а имие от н дрожжеи с н иновых кисл производств киму при пищ ов ти, а такжлеоэидов,спо торые раты ны как преп йых исследо Способ образом. ствляют следую ния ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР(53) 663.14:636.85(088.8) (56) Авторское свидете; .ство СССР ,Ф 947186, кл. С 12 Р 19/38, 1981,Петков П., Тулева Б., Костов В. Намалявана съдържанието на нуклеиновите киселини в БассЬагапусев .саг 1 эЪегдепз 1 я через въездействие с рибонуклеази. - Ас 1 а ш 1 сгоЫо 1. Ъп 1 Е. У 3, 1979, 30-36.Авторское свидетельство СССР М 767204, кл. С 12 Б 15/00, 1980. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДРОЖЖЕЙ С НИЗКИМ СОДЕРЖАНИЕМ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот, применяемых в кормопроизводстве и пищевой промышленности, а также к способу получения нуклеозидов, которые могут быть примененосится к биотехноспособу получения одержанием нуклеименяемых в кормоевой промьппленнособу получения нукмогут быть применемедицине и в науч 2ны как препараты в медицине и н ных исследованиях. Цель изобрет ния - расширение Функциональных можностей способа: получение иэ жей одновременно двух продуктов дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот и нуклеозидов, Способ обработки дрожжей заключается в следующем: дрожжевую суспензию нагревают в течение 15-30 мин на кипящей водяной бане, затем осадок отделяют центриФугированием, промывают его, разводят водой, устанавливают рН = - 9,0-10,5. К дрожжевой суспензии добавляют Ферментный препарат 5 -экзонуклеазы и щелочной ФосФатазы из АсМпошусез сое 1 хсо 1 ог, Смесь при непрерывном перемешивании вьдерживают при 37-40 фС. Спустя 30 мин после начала процесса гидролиза в дрожжевую суспенэию добавляют хлористый магний концентрации 5 10 - 1 10 М.-1 Длительность гидролиза 5-6 ч . Дрожжи с низким содержанием нуклеиновых кислот отделяют от надосадочной жидкости, содержащей нуклеозиды. 1 з.п. Ф-лы, 2 табл., 1 ил. зобретения является расшициональных возможностей счет получения нуклеозиа чертеже приведен граФик, поий способСуспензию дрожжей БассЬагошусеясегенхяае прогревают на кипящейводяной бане в течение 15-30 мин,промывают водой, вводят в качестве1гйдролизующего агента препарат изкультуры АсС 1 пошусея сое 1 со 1 ог ипроводят гидролиз при 37-40 С, рН =щ 9,0 - 10,5 в присутствии хлористого магния в течение 5-6 ч, При этомодновременно получают два продукта:иуклеозиды и дрожжи с низким содержанием нуклеиновых кислот.Используемый ферментный препаратполучают на основе известного штамма АсСхпошусея сое 1 соХог ВКПМ Б.П р и м е р 1 . Навеску дрожжейБассЬагошусея сеген 1 яхае в количестве 60 г разводят в воде (1;5) и нагревают,на кипящей водяной бане в течение 1 5 мин, затем осадок центрифугируют, промывают водой и берутнавеску в количестве 38 г, разводятее водопроводной водой до 48 мл иподщелачивают водным раствором аммиака до рН = 10,0,0,8 г ферментного препаратаАсСхпошусея соеХсо 1 ог (активность5 -экзонуклеазы 51800 ед/г и фосфатазы 1036 ед/г) растворяют в 5 млводы,К полученной дрожжевой суспензиидобавляют раствор ферментного препарата 5 -зкэонуклеазы и щелочной фосфатазы и выдерживают при 37 С в те-чение 5 ч . В суспензию добавляют хло 35ристый магний концентрации 5 10 Мчерез 30 мин после начала процесса.Но окончании процесса осадок - дрожжи с.низким содержанием нуклеиновыхкислот от надосадочной жидкости, содержащей нуклеозиды, разделяют центрифугированием при 5000 об/мин в тетечение 15 мин. Остаточное содержаНие нуклеиновых кислот в дрожжах0,53 , степень гидролиза нуклеиновыхкислот 88%.Надосадочную жидкость качественноанализируют с помощью жидкостной хроматографии под давлением в,0,05 МБа-формиатном буфере с рН = 4,654,8. Результаты анализа показываютналичие в надосадочной жидкости нук"леозидов: гуанозина (2), аденозина (3), цитидина (4), уридина (1 )(см, чертеж).55П р и м е р 2. Навеску дрожжейБассЬагашусея сегеняае разводят вводе (15) и нагревают на кипящей во" дяной бане в течение 20 мин, затем осадок центрифугируют, промывают водой, и берут навеску в количестве 24,3 г и разводят в 52 мл воды, водным раствором аммиака подщелачивают до рН = 9,0.0,4 г ферментного препарата (активность 5-зкзонуклеазы 45000 ед/г, активность фосфатаэы 915 ед/г) АсС 1. - гошусея сое 1 соХог суспендируют в 5 мл воды.К дрожжевой суспензии добавляют раствор ферментного препарата, раствор хлористого магния концентрации 11 О М, гидролиз проводят при 40 С в течение 6 ч . Ос та точное с оде ржание нуклеиновых кислот в дрожжах 0,721, степень гидролиза нуклеиновых кислот 90%.Надосадочную жидкость качественно анализируют с помощью жидкостной хроматографии под давлением, как в примере 1, Результаты анализа показывают наличие в надосадочной жидкости нуклеозидов: гуанозина, аденозина, уридина, цитидина (см. чертеж).П р и м е р 3. Навеску дрожжей БассЬагошусея сегенхя 1 ае разводят в воде (1:5) и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30.мин, затем осадок центрифугируют, промывают водой, берут навеску в количестве 47,3 г и разводят в 65 мл воды, водным раствором аммиака подщелачивают до рН = 10,5.0,55 г ферментного препарата АсС- пошусея сое 1 со 1 ог (активность 5-экзонуклеазы 51800 ед/г, фосфатазы 1036 ед/г) растворяют в 5 мл воды.К дрожжевой суспензии добавляют раствор ферментного препарата и вы" держивают при 38,5 С в течение 5,5 ч. Через 30 мин после начала гидролиза добавляют хлористый магний концентрации 7,5 1 О М. Осадок от надосадочной жидкости отделяют как в примере 1. Остаточное содержание нуклеиновых кислот в дрожжах 0,98 ., степень гидролиза нуклеиновых кислот 87 .Надосадочную жидкость качественно анализируют как в примере 1 . Результаты показывают наличие в надосадочной жидкости нуклеозидов: гуанозина (2), аденозина (3 ), уридина (1 ),цитидина (4) (см. чертеж).Характеристика качества получаемого белково-углеводного продукта, ко58979510 ЗМ 1 при 37 - 40 фС олучаемый елково-угеводный про" укт (дрожжи низким со ержаниемуклеиновых ислот) Исх Компоненты рожж 0 15 Сырой протеин ф 5 41,57,142,3 6,36 39,9 Лип иды20Углевод 6,0 Нуклеиновыкислоты 0 5,0 Влажност Таблица Получаемый тандартыАО/ВОЗ Аминокислоты ные елков о-уг"еводный и продукт,5 5,2 Треонин 5 15 торый может быть использован в кор" мопроиэводстве и в пищевой промьппленности, дана в табл. 1 и 2.1ф о р м у% а изобретения 1, Способ получения дрожжей с низким содержанием нуклеиновых кислот, включающий прогрев, последующее охлаждение, обработку клеток гидролизующим агентом с последующим отделением биомассы дрожжей от жидкой фазы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью расширения функциональных воэможностей способа эа счет получения нуклеозидов, суспензню дрожжей ЯассЬагошусез сегечвхаепрогревают на кипящей водяной бане в течение 1 5-30 мин, а в качестве гидролизующего агента используют ферментный препарат из АсИпошусев сое 1 соХог ВКПМ 8-464.2. Способ по п. 1, о т л и ч а - ю щ и й с я тем, что гидролиз ведут при рН 9,0 - 10,5 в присутствии 6 0 М хлористого магния в течение 5-6 ч. Таблица1558979 Составитель Г, Осиповедактор Н, Гунько Техред М,Ходанич Коррек але ах 491 аказ 820 одписи зобре ЯВШИ аущ оизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Уагород, ул. Га 101 сударственного113035,омитета по осква, Жниям и открытиямпри ГКНТ СССая наб., д. 4/5