Способ получения рибонуклеиновой кислоты из клеток дрожжей

)5 С 12 М 15 ГЕНИ ВТОРСКОМУ С ТЕЛЬСТВ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБ(71) Институт микробиологии АН БССР,Всесоюзный научно-исследовательский ипроектно-конструкторский институт микробиологических производсгв(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ КЛЕТОКДРОЖЖЕЙ(57) Изобретение относится к биохимии, аименно к способам выделения нуклеиновыхкислот, в частности РНК, которая применяется в медицине, сельском хозяйстве и явИзобретение относится к биохимии, а именно к способам выделения нуклеиновых кислот, в частности РНК, являющейся сырьем для производства нуклеотидов и нуклеозидов и применяющейся в медицине,Цель изобретения - повышение степени чистоты полученного препарата РНК и сокращение продолжительности процесса выделения.Основу предложенного способа составляет совокупность следующих приемов: биомассу дрожжей кипятят 15 мин в растворе, содержащем 0,2 М хлористый натрий и 0,01-0,04 М СаС 2, с рН 7,5, доведенным ИаОН. После удаления клеток центрифугированием РН К из экстракта осаждают в форме кальциевой соли путем дополнительного 708845 А 1 ляется исходным сырьем для получения нуклеотидов и нулеозидов. Цель иэобретения - повышение степени чистоты получаемого препарата РНК и сокращение продолжительности процесса выделения., Способ заключается в зкстракции РНК из биомассы кормовых дрожжей в присутствии 0,2 М йаС и 0,01-0,04 М СаС 12, рН 7,5, при кипячении в течение 15 мин, удалении клеточного дебриса, осаждении РНК из экстракта в виде соли Са путем дополнительного внесения в экстракт СаО 2 до 0,1-1,0 М. Регенерацию РНК из ее солиосуществляют согласно стандартной процедуре вытеснения ионов кальция из комплекса с РНК минеральной кислотой, Способ позволяет получить целевой продукт 97-ной чистоты с выходом до 73от теоретически возможного при сокращении времени выделения до 4 - 5 ч. внесения в экстракт СаС 12. Свободную РНК из ее комплекса с кальцием выделяют обработкой кальциевой соли РНК кислотой (напрмер, серной) в течение 5-30 мин,Отличительными признаками предлагаемого способа являются: 1) осуществление экстракции РНК из клеток в присутствии 0,01-0,04 М СаСЬ; 2 осаждение РНК из экстракта в форме кальциевой соли с последующим. разрушением комплекса обработкой минеральной кислотой.Предлагаемый способ позволяет сократить время выделения конечного продукта, т.е. РНКв 3 раза(с 14,5 до 4-5 ч) иувеличить степень чистоты целевого продукта с 78 до 90 - 97 ф.Формула изобретения Способ получения рибонуклеиновой кислоты из клеток дрожжей, предусматривающий экстрагиравание биомассы раствором хлористого натрия при слабощелочных рН и посьшеннай температуре и осаждение РНКиз экстрактаотличаю щийся тем, что, с целью повышения степени чистоты целевого продукта и сокращения продолжительности процесса, в раствор для экстракции РНК вносят СаС 12 в концентрации 0,01 - 0,04 М и РНК осаждают в виде кальциевой сали путем внесения в экстракт СаС 12 в концентрации ОЛ - 1,0 М с последующим переводом соли РНК в свободную кислоту обработкой минеральной кислотой. Составитель Н,АлександрушкинаТехред М,Моргентал Корректор М,Максимишинец Редактор А.Долинич Заказ 403 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 П р и м е р 1. В реакционный сосудвносят 400 мл Н 20, 25 мл 4 М ИаС, 15 мл 1М СаС 12 и 60 мл 0,625 М ЯСОН. После доведения раствора до кипения к нему прибавляют 100 г.сухого БВК (биомасса СапаЫа 5аайаза производства Новополоцкого завода БВК). Смесь перемещивают в течение15 мин, после чего биомассу дрожжей осаждают центрифугираванием (5000 9, 10 мин)и промывают 200 мл раствора, содержащего 0,2 М ИаС 1 и 30 мМ СаС 2.Супернатанты, полученные после обоихцентрифугирований, объединяот и в суммарный раствор (500 мл) вносят 40 мл 2 МСаС 1 (конечная концентрация 0,16 М) и образававщийся осадок кальциевой соли РНКотделяют центрифугированием (5000 9,10 мин). Осадок суспендируют в 75 мл Н 20,прибавляют к суспензии 0,35 мл 1 М Н 2304и суспензию перемешиваат в течение 15 20мин. Осадок РНК отделяют центрифугиросанием (5000 ц, 10 мин), промывают 100 мл1-20 и высушивают при 60 С в термостате,Выход препарата РНК составляет 5,57 г,он содержит 97% основного вещества, что 25соответствует выходу 72% от теоретическивозможного,Р еличины ат ношений Е 2 еа:Еаза иЕОС ь.7 я Раствора целевого продукта составляют 2,2 и 0,47 саответственна. 30Содержание фосфата.9,24%,П р и и е р 2, Условия выделения совпадают с описанными с примере 1, эа исключением того, что вместо дрожжей СавсРдаглатаза используют дрожжи Яасс 1 агавусез 35сегэу 1 в 1 ае, Сапбба зсаи и СапдбазаСопсоа, Степень чистоты целевого продукта 96,1; 95,2 и 95 Я соответственно, авыход целевого продукта (% ат теоретически возможного) 71,8; 72,3 и 72,7 с порядке 40перечисления обьектос,П р и м е р 3, Условия примера совпадают с описанными в примере 1 за исквочением гого, что используются различныеконцентрации ССС 2 (0-70 мМ) с среде для 45 экстракции РНК и различные концентрации СаС 12 (40-1000 мМ), вносимого в экстракт для осаждения РНК.Требованию получения целевого продукта не только с высокой степенью чистоты (до 97%), но и с высоким выходом(60 - 73,9 О) удовлетворяют сочетания анализируемых параметров, предусматривающих концентрации СаС 12 с среде экстракции 10-40 мМ и концентрации СаС 12 вносимого в экстракт для осаждения РНК 100 - 1000 мМ.Таким образом предложенный способ позволяет получить до 73,9, от теоретически возможного количества РНК из эукариатических клеток (дрожжи), причем достигается высокий уровень чистоты конечного продукта до 97,1 ф. Затраты же времени на всю процедуру составляют всего 4-5 ч, Предлагаемый метод технологичен и может быть успешно использован в условиях производства без дополнительных научных исследований,Применение предлагаемого изобретения внесет существеннцй вклад в обеспечение потребности медицины, сельского хозяйства и научнцх исследований как в самой РНК, так и получаемых из нее нуклеазидах риба ряда,