Способ получения рибонуклеиновой кислоты

(5 ТВЕННЫЙ КОМИТЕТЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМСССР ГОСУДА ПО ИЗО ПРИ ГК Е ИЗОБРЕТЕ ИС АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ учения рибонуклеиновой кислоты из сухой плазмолизованной биомассы микроорганизмов из кормовых дрожжей. К 20,0 г сухого белково-витаминного концентрата добавляют 0,2 л предварительно нагретого до 40-50 С 0,5-6,0%-ного раствора МаС и термостатируют в течение 40-50 мин при 40-50 С, доведя предварительно с помощью 5 М раствора КаОН рН суспензии до 7,0-7,2, После термостатирования охлаждают суспечзию проточной водопроводной водой до комнатной температуры, доводят 5 М раствором МаОН рН до 8,9-9,1 и оставляют при перемешивании при комнатной температуре на 50-60 мин. 5 табл,л. К. 9 научно трукторх произВ,В,Коту исследовательскийский институт микодствсов, А.А.Дунаев и 88.8)видетельство СССР12 Р 19/34, 967,ОЛУЧЕНИЯ РИБОНУКЛТЫние; медицинска,. и мипромышленность, для Изобретение относится к медицинской и микробиологической промышленности и может быть использовано для получения рибонуклеиновой кислоты (РН К) из сухой плазмолизованной биомассы микроорганизмов, в частности из кормовых дрожжей (БВ К),Цель изобретения - удешевление способа получения РНК и расширение сырьевой базы,Для выделения РНК к 20,0 г сухого белково-витаминного концентрата (БВК) добавляют 0,2 л предварительно нагретого до 40-50 С 0,5-6,0% раствора МаС (см.табл.1) и термостатируют в течение 40-50 мин при 40-50 С (см,табл.2,3), доведя п редварител ьно с помошью 5 М раствора ИаОН рН суспензии до 7,0-7,2. После терл 1 остатирования охлаждают суспензию проточной водопроводной водой до комнатной температуры, доводят 5 М раствором ИаОН рН до 8,9-9,1 и оставляют при перемешивании при конатной температуре на 50-60 мин. Затем центриф об/мин в течение 30 0-5 С из экстракта шлам, рН супернэтд лотой (см,табл,4) до Образовавшийся осадокцентрифугированием при 800чение 20 мин при комнатнойзатем ресуспендируют в 40 мвого сплрта (см.табл,5) и петечение 30 лин, Отмытую тРНК ссаждают центрифуги8000 об/мин в теченле 20 миной температуре и высушиваюсушильном шкафу при 30-35нии 2-5 мм рт,ст. РНК отделяют 0 об/мин в теемпературе, а л изопропилоемешивают в аким образом ованием при н при комнатт в вакуумном С и при давле(21) 4785943/13(54) СПОСОБ ПНОВОЙ КИСЛО(57) Использовабиологическая гированием при 3500 мин и охлаждении при осаждают клеточный та доводят серной кис- ,5-1,5.Полученный препарат анализируют насодержание фосфопа по Спирину азота поКьельдалю, влаги по ГОСТ 14870-69,В результате проведенных процедурвыделения и очистки РНК из БВК, полученный препарат соответствуе.г требованиям инормам ТУ 6-09-10-1048-75,Из 20,0 г БВК получено 0,83 г РНК счистотой 84% при выходе 80 мас.%,П р и м е р 1. К 100,0 г БВК добавляют1 л нагретого до 50 С 3,0%-ного раствора 10ИаО, Экстракцию ведут при рН 7,0 при постоянном перемешивании при 50 С в течение ЗО мин, затем суспензию охлаждают докомнатной температуры проточной водопроводной водой, рН доводят 5 М раствором йаОН до 9,0 и продолжают экстракциюеще в течение 60 мин,По окончании описанной процедуры отделяют клеточный шлам центрифугиоованием при 3500 об/мин и охлаждении до ОС, 20Прозрачный супернатант - экстракт нуклеиновых кислот доводят 5 М раствопомН 2504 до рН 1 О, Осадок отделяют центрифугированием при 8000 об/мин, после чегоресуспендируют его в 200 мл изоп ропилового спирта, который удаляют центрифугиоованием при 8 ООО об/мин, затем осадоквысушивают при комнатной температуре ивакууме. Выход РНК около 60% от теоретического с содержанием основного продукта88%,П р и м е р 2. К 20,0 г БВКдобавляют 0,2 ЗОл предварительно нагрг-ого до 50 С 3 Ооного раствора ЙаО и далее как в примере 1до осаждения РНК из экстракта сеоной кислотой,В 16 центрифужных пробирок отбирают 35по 2 мл экстракта и осаждают РНК различными кислотами при рН 0,25-4,50. осадокотмывают аналогично примеру 1. ВыходыРНК представлены в табл,4,40 П р и м е р 3, В 9 центрифужных стаканов помещают по 5 г БВК и 0,025 л дистиллированной воды и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Экстракцию проводят десятикратными объемами растворов йаС различных концентраций(0- 29,3%) аналогично примеру 1, Выходы РНК представлены в табл,1.П р и м е р 4, 20,0 г БВК суспендируют в 0,2 л предварительно нагретого до 50 С 3,0%-ного раствора КаО и далее по примеру 1 до получения прозрачного супернатанта - экстракта нуклеиновых кислот. Супернатант делят на 3 равные объема и проводят осаждение РНК аналогично примеру 1, Осадок отмывают в первом варианте этиловым спиртом, Во втором - изопропиловым спиртом, в третьем - дистиллированной водой. Отмытую РНК высушивают под вакуумом при комнатной температуре. Результаты представлены в табл.5,Формула изобретения Способ получения рибонуклеиновой кислоты, включающий экстракцию РНК из исходного сырья раствором хлористого натрия, сначала при рН 7,0, затем при рН 9,0, уцаление клеточного шлама, осаждение РНК минеральной кислотой, отделение осадка, промывка его спиртом и высушивание конечного продукта. о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью удешевления способа и расширения сырьевой базы, в качестве исходного сырья используют сухой белково- витаминный концентрат, экстракцию осуществл яют 0,5-6,0%-ным раство ром хлористого натрия сначала при 40-50 С в течение 40-50 мин, затем при комнатной температуре в течение 50-60 мин, осаждение РНК осуществляют раствором серной кислоты при рН 0,5-1,5, а промывку проводят изопропиловым спиртом,1717599 Э абл ца; Содержание РНК г мл 1,05 м е ч а н и е, Зкстракцию РНК проводят сначала при рН 7 и 50 С в течение 30 мин,ари рН 9 и комнатной температуре в течение 40 мин. Пр ате 2 д птическая плотность и и рН 7 3 5 С.265 0,250 О "70 0,270 0,305 П р и м е ч а н и е. Экстракцию РНК проводят с помоьцью 3,о НОГО раствооа хтрия сначала при рН 7 в течение 40 мин, а заем при рН 9 в течение 50 мин. ли ца 3 птическая плотн 260 о 39 П ри меч ария сначала орист растворатуре,1,16 1,29 1,34 1,56 1,32 1.10 1,17 0.85,133 ,185 ,240 ,290 ,340 325 0,3100,3300,3350,3500,3400,345 еЗкстракцию РНК проводят с помоцью 3 и рН Уи 50 С, а затем при рН 9 и комнатной те( 64,5577,6 П римхлористо кстрэкцию РН 1 ООСВОдит эналОГинносм, тэол. 11 с Бомошько растВООэ ани атрия Таблица 5 РТС (ИР,И н и е. Зкстрэкцико - 1кислоть; ОЯ 1 0 г.,:. -," В 1 л","ОВСДГт :Л- ли меч ГО СЕРНО ОМехг.ед ч,5О Гентап едактор С.Патру 1 ГВВЭ :,Оер-.,но Ге, Ьдо.:о 3 И Заказ 851ВНИИПИ"ОДОИСНОЕОетеним и Откр 1 тидм ООпскаВ наб 4 ЯИГ 1 Э"тееннОГО комитета;:О 1 Г;б 113035, Москаа, УА-ЗО,а" ОизВОДстаенно-изДэтельск комои нетатент" Г с, жГОООД, 1"л,ГЭГэоинэ 101