Способ получения пептидов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИРЕСПУБЛИК К 5/О А 61 К 37/02 ОПИ ИЕ ТЕНИ АТЕНТУ(О)ОН; Хтил и = 0,-С. -алкбладающихнтиинфек оЦБ 85/021.85 ной а ользо стимулирующеи тивностью, что жет быть испЦель - созданых и менее в медицин более ак еществ ук нов ных.4.07.(0Э., ЛюбкМир, 196 нного класс не дегидра К,С(0)МН ,) -С(О)М выше; Кдного эф -лы 111: тез веду ф-лы 11: ациеи соСН-С(О)О тиды,6. К СК,Н- бенз-- (С К см укцини инения С(О)ОН ид(54) С (57) И СОБ ПОЛУЧЕНИЯ П бретение касает сти получения с пеп ине с после- рательпутем инияобес- монии выш и и Х с обходим защитн над ок а малот сти избх группсью алюксичны лы 1: В.,-С(0)-МН-(СН,);С(0) МНСН С -алкил; К . - Н инокислоты: -МН Н Н общей дрогеноли вые вещестчивают выж мышей) до С(О) Кз фКьНХ-(Сн)де К1Саток ваемост 1003. 1 табл. ся к способуовых биологиИзобретение отно чения пептидов и активных соедин т найти применени ель изобретения - пептидов - малото пол ний, которые в медицине. получение ноче ичных соедивысокой имм нфекционной нений, обладающихностимулирующейактивностью.Пример ол нт ептаноил-О.-Р-алании СО Н)и К - -МНСН( 3 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ П(НТ СССР(51)4 С 07 6 // А. М-Гептаноил-П-гамма-глутамил (альфа-бензиловый эфир)-глицин.К раствору 897 мг (13,0 ммоль) глицина и 1,3 г (13,0 ммоль) триэтиламина в 10 мл воды добавляют 5,0 г (11,2 ммоль) М-гептаноил-П-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-оксисукцинимидного эфира в 100 мл диоксана. Полученную реакционную смесь оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение 80 ч. Этот раствор затем выливают в 300 мл этилацетата, отделенную органическую фазу промывают 103-ной хлористоводо-. родной кислотой, водой и раствором15 дд 3 1507212 рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют в условиях вакуума до сухого состояния. Остаток превращают5 в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота 3,43 г (выход 747).В. Н-гептаноил-П-гамма-глутамил-глицил-П-алании.10К раствору 2,0 г (4,78 ммоль) Я-гептаноил-П-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-глицина. 1,75 г (5 ммоль) соли паратолуолсульфокис 1лоты сложного бензилового эфира П-аланина, 506 г (5 ммоль) триэтиламина и 675 мг (5 ммоль) 1-оксибензотриазола в 100 мл тетрагидрофурана добавляют 3,03 г (7,17 ммоль) 1-циклогексил-(2-морфолиноэтил)карбоди имидного мета-п-толуолсульфоната. Эту реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч и выливают в 300 мл этилацетата, после чего органическую фазу отде ляют и промывают 107-ной хлористоводородной кислотой, водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и раствором рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом маг ния и концентрируют в условиях вакуума. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота 2,7 г. 2 г твердого вещества в 75 мл метанола с 400 мг 10%-ной гидроокиси палладия на древесном угле взбалтывают в атмосфере водорода при начальном давлении, равном 50 фунтам на 1 кв.дюйм, в течение 4 ч. Катализатор фильтруют, 40 фильтрат выпаривают при пониженном давлении, после чего остаток растворяют в воде и лиофилизируют с образованием 1,23 г (выход 907) целевого продукта в виде белого твердого ве щества. Полученное соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.П р и м е р 2. М-Гептаноил- -гамма-глутамил-глицил-глицин50 К холодному раствору (О С) 13,0 г (31 ммоль) М-гептаноил-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир) - глицина и 3,91 г (34 ммоль) М-оксисукцинамида в 400 мл тетрагидрофурана добавляют 7,0 г (34 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. Эту смесь оставляют для перемешивания при 0 С в течение 1 ч и при комнатной температуре в течение 18 ч. Твердые вещества фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота с образованием 15,4 г (987) целевого промежуточного продукта.В. И-Гептаноил-гамма-глутамил-глицил глицинК 2,0 г (3,07 ммоль) сложного оксисукцинимидного эфира И-гептаноил- -0-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-глицина в 100 мл диоксана добавляют 446 мг (5,95 ммоль) глицина и 0,55 мл (3,9 ммоль) триэтиламина в 1 О мл воды. Полученную реакционную смесь оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение 18 ч. Этот раствор выливаютв 100 мл этилацетата, после чего органический слой промывают 2,57-ной хлористоводородной кислотой, водой и растворомЪрассола. Органический слой отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют до сухого состоянияОстаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота с образованием 1,7 г белого твердого вещества, 1,5 г твердого вещества в 75 мл метанола, содержащего 200 мг 103-ной гидроокиси палладия на древесном угле, встряхивают в атмосфере водорода при давлении 50 фунтов на 1 кв,дюйм в течение 3 ч. Катализатор фильтруют, фильтрат концентрируют в условиях вакуума. Остаток растворяют в воде и лиофилизируют с образованием 1,12 г (выход 903) целевого продукта. Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.П р и м е р 3. К-Гептанол-П-гам- ма-глутамил-глицил-Р-серии55 1 СН 3(СН) д 1 и Ед - -ЙНСНСОН)А. Сложный оксисукцинамидный эфйр М-гептаноил-гамма-глутамил (альфа-бензиловый эфир)-глицина. и К- -ИНСН(СН ОН)СОН).12 6П р и м е р 7. Х-Гептаноил-гамма глутамил-глицил-амин пентаноная кислота (К, - СН (СН ) ,К- Н и К- -ИН(СН ) СОН) .В результате замены 3-аминомасляной кислоты 470 мг (4,0 ммоль) 5-аминопентановой кислоты и выполненияпроцедуры, описанной в примере б,получено 520 мг (выход 422) целевогопродукта, т.пл, 122-124 С. Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.П р и м е р 8, Х-Гептаноил- -гамма-глутамил-глицил-аминогексановая кислота (К, - СН з(СН ) г; К - Ни Кз НН(СН) СОН).Снова повторяют процедуру опи санную в примере 6, с заменой З-амико. масляной кислоты 530 мг (4,0 ммоль) 6-аминогексановой кислоты, в результате чего получено 520 мг (выход 407) целевого продукта в виде белой пены, Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.Проведены биологические исследования соединений, полученных предлагаемым способом, и соединений сравнения на мышах Ва 1 Ь С, зараженных К 1 еЬ"зде 11 а, вызывающих пневмонию, Результаты приведены в таблице, где указан метод введения испытуемых соединений, процент выживания, т.е. процентживотных, выживших при введении испытуемых соединений, и плацебо, т.е. процент животных, выживших в случае, когда проперат не вводился.Испытуемые соединения вводились за 24 ч в указанных дозах перед зара" жением и в укаэанных дозах во время заражения. Испытания проводились в сравнении с известным соединением РК. Что касается токсичности,то в испытуемЫх дозах предлагаемые соединения не проявляли таковой, их можно отнести к категории малотоксичных соединений.Проведенные испытания показали, что предлагаемые соединения малотоксичны и обладают более высокой иммуностимулирующей и антиинфекционной активностью, повышая выживаемость мыпей Ва 1 Ь С К 1 еЬве 11 а, вызывающей пневмонию. 30 формула изобретения Способ получения пептидов общейформулы 5 15072Используя в качестве исходных продуктов 2,0 г (3,98 ммоль) сложного(4,02 ммоль) триэтиламина при выполнении процедуры, описанной в примере ЗВ, получают 902 мг (выход 767)целевого продукта, т.пл. 130-132 С.Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.П р и м е р 4. К-Гептаноил-гамма-глутамил-глицил-альфаамино 5масляная кислота (К, - СН (СН ),В Н и К ИНСН(СН СН )СО Н).Повторяют процедуру, описанную впримере ЗВ, с использованием в качестве исходных продуктов 2,0 г(4, 02 ммоль) триэтиламина, в результате чего получено 632 мг (выход577) целевого продукта, т.пл. 140141 С. Соединение охарактеризованос помощью ЯИР-спектроскопии.П р и м е р 5. М-Гептаноил-гамма-глутамил-глицил-аминопропионовая кислота (К, - СН з(СН ) ,К- Н и К- -ЯН(СН )СОН) .При выполнении процедуры, опнсанной в примере ЗВ, с использованием в качестве исходных продуктов1,5 г (3,0 ммоль) сложного оксисукцинамидного эфира И-гептаноил-гамма-глутамил(альфабензиловый эфир) - 40(3,9 ммоль) триэтиламина, получено500 мг (выход 437) целевого продук,та, т.пл. 135-138 С. Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии,П р и м е р 6. М-Гептаноил-гамма-глутамил-глицил-аминомас"ляная кислота (К, - СН(СН) , 50К, - Н и К, - -ЫН(СО,),СО,Н),Повторяют процедуру, описаннуюв примере 6, при замене 3-аминопропионовой кислоты на 410 мг (4,0 ммоль)4-аминомасляной кислоты, в результате чего получено 600 мг (выход503) целевого продукта, т.пл. 140142 С. Соединение охарактеризованос помощью ЯМР-спектроскопии.