Способ определения противомозговых антител

Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик АВТОРСКО ВИДЕТЕЛЬСТВ 1) Дополнител72) Авто ретения стовский государственный орденамедицинский институт(71) Заявите 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТИВОМОЗГОВЫХ АНТИТЕЛвых антиткрови болявляетсясмешиваюкомплемен20 ч припротивомоактивностисходнойСпособ едицине, а ет быть ис- отивомозготропной акбольных не- заболеват, рассеян, а также в деления стея противоания сывотелен и труводится четки, затем аливка, прилипиды иисследоваования трекой лабора- анта-морфоскорени, что при осущестния противомозгоИзобретение относится к мименно невропатологии, и можпользовано для определения првых антител, обладающих нейтивностью, в сыворотке кровикоторыми нервно-психическиминиями (острый энцефаломиелиный склероз, шизофрения и др.)условиях эксперимента для опрепени сенсибилизации к мозгу.Известен способ определенимозговых антител путем исследовротки крови больного 1.Однако известный способ длидоемок, так как забор ткани прорез 24 ч после введения сывороследует проводка в формалине, зготовление срезов, окраска напоследующее микроскопическоение образца. Проведение исследбует наличия в штате клиничесторин врача-морфолога и лаборлога.Целью изобретения являетсяи упрощение способа.Цель достигается темвлении способа определе ел путем исследования сыворотки ьного отличительной особенностью то, что сыворотку крови больного т с гомогенатом мозга крысы и том, выдерживают смесь 18 - ф - 12 С, и определяют наличие зговых антител по увеличению и кислой протеазы по сравнению с на 20% и выше.осуществляют следующим обраУ больного из вены берут кровь 2,5 мл,приготавливают сыворотку имл этой сывороки с 0,1 мл комплемента добавляют к 1 мл 20%-го гомогената мозга крысы, приготовленном на физиологическом растворе (гомогената мозга одной крысы достаточно для проведения 5 исследований). Отбирают аликвотную часть, центрифугируют и в надосадочной жидкости определяют активность кислой протеазы. Оставшуюся часть смеси о выдерживают 18 - 20 ч при 8 - 12 С, затемцентрифугируют для отделения осадка и в надосадочной жидкости определяют активность кислой протеазы.Активность кислой протеазы исследуют,используя в качестве субстрата гемоглобин944581 Таблица 1 До инкубации После инкубации 0,230 32 387,4 0,365 48 581,0 П р и м е ц а н и е: 387,4 - 1003581,0 - хх = 1503 зи выражают в мгк тирозина на 100 мг ткани. Увеличение активности фермента после 8 ч пребывания в холодильнике минимум на 20 О/о-ов по сравнению с исходными величинами свидетельствует о наличии в исследуемой сыворотке противомозговых антител.Пример /, Б-ной Г. 38 лет. Диагноз: рассеянный склероз, церебро-спинальная форма, экзацербация. Проведено обследование.Из вены берут 2,5 мл крови, готовят сыворотку и 1 мл этой сыворотки с 0,1 мл комплемента добавляют к 1 мл 20/О-го гомогсната мозга крысы, который был предварительно приготовлен путем гомогенизации 1 г мозга в 5 мл физиологического раствора. Отбирают половину обьема и ставят на инкубацию в холодильник при 1 ОС на 8 ь Вторую половину центрифугируют в течение 15 мин, при 5000 об/мин, а затем к 0,2 мл центрифугата добавляют 0,4 мл 0,005 М ацс тато-фосфапкн о буфера (рН 3,8) и 0,2 мл 20",-го раствора гемоглобина, смесь инкубируют 1 и прн 37"С. Реакцию останавлнвакп 0,8 мл 20 О/о-ой трихлоруксусной кис. литой (ТХУ). в контрольную пробу ТХУ доба ил я ют до субстрата (геом оглоби на ) .11 ослс остановки реакции трихлоруксусной кислотой пробы цеи грифугируют 15 мин при 5000 об/мин и кмл центрифугата добавляют 2 мл 9,5 и. ХаОН и 0,5 мл реактива Фолина (разведенного перед употреблением в 2 раза). Пробы колориметрируют при длинс волны 680 нм, и результат выражают в мкг тирозина (100 мг ткани за 60 мин). Активность кислой протеазы проведена в таол. .Г 1 ревыпл.ние активности фермента после инкубации сыворотки крови с мозгом составляет 50/ что позволяет заключить о значительном количестве антител в исследуемой сыворотке. Пример 2. Больной Г., 35 лет. Предположительный диагноз: маниакально-депрессивный психоз. Проведено обследование.Из вены берут 3 мл крови, готовят сыворотку и 1 мл ее с 0,1 мл комплемента до бавляют кмл 20 О/о-го гомогената мозгакрысы, который готовят предварительно путем гомогенизации 1 г мозга в, 5 мл физиологического раствора. Половину объема помещают на инкубацию в холодильник при 10 С на 8 ч. Вторую половину центрифугируют в течение 15 мин при 5000 об/мин, затем к 0,2 мл центрифугата добавляют 0.4 мл ацетато-фосфатного буфера (рН 3,8) и 0,2 мл 20/о-го раствора гемоглобина, Смесь инкубируют 1 ч при 37 С. Реакцию останав(а ливают добавлением 0,8 мл 20 О/о-ой трихлоруксусной кислоты (ТХУ). В контрольную пробу ТХУ добавляют до субстрата (гемоглобина). После остановки реакции трихлоруксусной кислотой пробы центрифуги руют 15 мин при 5000 об/мин и к 1 мл центрифугата добавляют 2 мл 0,5 н ИаОН и 0,5 мл реа кти ва Фол и на (разведенного перед употреблением в 2 раза). Пробы колореметрируют при длине волны 680 нм, а результат выражают в мкг тирозина (100 мг ткани 25 за 60 мин).Активность кислоты протеазы приведенав табл. 2.Предварительный диагноз - маниакально-депрессионный психоз, диагносцированный клинически, подтвержден лабораторным ЗОисследованием, так как аутоиммунныи компонент, свойственный шизофрении, в данном случае отсутствует.Предлагаемый способ прост, высокоспецифичен и надежен и может найти широкое применение в клинике для определения противомозговых антител в сыворотке крови больных с целью ранней диагностики нервно-психических расстройств аутоиммунной природы.944581 Таблица 2 До инкубации мкг/100 мг Е 0,290 29,4 366,0 0,210 28 338,0 П р и м е ч а н и е: 366,0 - 1003338,0 - хх = 92 формула изобретения Составитель С. Малютина Редактор ПКоссей Техред А. Бойкас Корректор Ю. Макаренко Заказ 5186/4 Тираж 74 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам Изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Способ определения противомозговых антител путем исследования сыворотки крови больного, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, сыворотку крови больного смешивают с гомо 20 генатом мозга крысы и комплементом, выдерживают смесь 18 - 20 ч при 8 - 12 С и После инкубации- Ь 1-:-." определяют наличие противомозговых антител по увеличению активности кислой протеазы по сравнению с исходной на 20% и выше. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Авторское свидетельство СССР657807, кл. А 61 В 1 О/00, 1976.