Ди-натриевая соль 2-(1, 2, 4-триазолил-3-азо)-1, 8 диоксинафталин-3, 6-дисульфокислоты в качестве реагента для обнаружения белков при электрофорезе в полиакриламидном геле

Союз СоветсиикСоциалистическихРеспубпии ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУва делам изааретенкй и атарыткй(53) УДК 547.9 бй. .4(088.8) Дата опубликования описания 17.06.82 М. Юсупов, Н. В. Скребцова, Т. П, Копиця, Г. ф. Касымова, Н. И. Корякина и В. К. Буриченко(72) Авторы изобретения Институт химии им, В, И. Никитина-1,8-ДИОКСИНАФТАЛИН,6-ДИСУЛЬФОКИСЛОТЫВ КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ БЕЛКОВПРИ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ ОК ОН-к-с 300 в ка л елеи тмыяв ва Изобретение относится к новому химическому соединению, конкретно, к динатриевой соли 2-(1,2,3-триазолил" -3-азо)-1,8-диоксинафталин -3,6-дисульфокислоты формулы скоторое может быть использованочестве реагента для обнаруженияков при электрофореэе в полиакрамидном геле.Известно применение красителамидового черного 10 Б 11, кумголубого й21, зеленого прго (,3;1 для обнаружения белков вакриламидных гелях,Недостатками укаэанных красиляются длительность процессания избытка красителя с геля,кратная смена раствора уксусной кислоты, трудность удаления фона, вызванного разложением красителя, что затрудняет количественную оценку белков депситометрированием и снижение качества анализа белков при длительном отмывании красителя.Цель изобретения - расширение ассортимента реагентов для обнаружения белков, обладающих улучшенными свойствами.Поставленная цель. достигается ди" натриевой солью 2"(1,2,1-триазолил" -З-азо)-1,8-диоксинафталин,6-ди-:; сульфокислоты общей формулы.Соединение общей формулы получают азосочетанием диазотированного 3-амино"1,2,1-триазола с хромотроповой кислотой в уксусной среде. Азосочетание диазосоединения с хромотройовой кислотой проводят при эквимолярном соотношении исходных компонентов , или при незначительном избытке ди ,аэосоединения.Время отмыванияфона красителя Время проявления белковых зон,мин Краситель 30"60 Кумасси голубой 15 й10 3 93 г 5Ниже приводятся конкретные примерыполучения и использования динатриевойсоли 2-(1,2,4"триаэолил-азо)-1,8-диоксинафталин"3,6-дисульфокислоты вкачестве реагента для обнаружения белков при электрофорезе в полиакриламидном геле,П р и м е р 1. 1,68 г (0,02 моль.)3-амино,2,4-триазола в 16 мл ледяной уксусной кислоты приливают к1;16 г 0,02 моль) нитрата натрия в7 мл концентрированной серной кислотыпри температуре от 0 до 5 С. Через5 мин к смеси диаэотированного 3-амино,2,4-триазола приливают 7,28 г(0,02 моль) хромотроповой кислоты прибыстром перемешивании и охлаждении.Выпадает краситель темно-красногоцвета. Получают 5,08 г динатриевойсоли 2-(1,2,4-триазолил-азо- -1,8-диоксинафталин,6-дисульфокислоты.Краситель перекристаллизовывают на754 уксусной кислоты, Выход 51,74.лНайдено,З: С 28,97; Н 2,88,М 13 98С 2 НМ 550 В МаВычислено, 4: 1: 29,09; Н 2,22;М 14,14,П р и м е р 2. Использования соединения общей формулы в качесте реагента для обнаружения белков в полиакриламидных гелях. Динатриевая соль 1,2,3-триазолил-(3-азо)-1,8-динафталин,6-дисульфокислоты Амидочерный 30"60 10 В Формула изобретения ьоДинатриевая соль 2-(1,2,4-триазолил-азо)-1,8-диоксинафталин;6-дисульфокислоты формулы ОК ОК ЯРКЮ-Н. 06 аЭлектрофореэ белков (альбумина и гистона ) в полиакриламидных гелях проводят по методу Панима и Чокли 41 в трубках диаметром 5 мм и высотой100 мм, а также в блоке полиакриламидного геля размером (1 х 150 х 150 мм). После электрофореза гели окашивают 0,23-ным раствором красителя общей формулы в смеси метанол-вода-уксусная кислота(5;5:1). Гели в трубках окрашивают в течение 16 ч, а в блоках - в течение 30 минПосле 6 мин окрашивания на полиакриламидных блоках уже ясно видны окашенные белковые эоны.Применение красителя общей формулы для обнаружения белков в полиакриламидных гелях позволяет определять белки при концентрации 10- - 10 И и не требует отмывки геля от избытка красителя, что очень удобно при серийном анализе белков.В случае же известных красителей амида-черного 10 Б и кумасси голубого В, проявление белковых зон в ПААГ требует более длительноговремени, и необходимо длительное отмывание ЛААГ от избытка красителя, что значительно удлиняет время анализа белков.В таблице приведены результаты сравнения.предлагаемого красителя с известными,в качестве реагента для обнаружения белков при электрофореэе в полиакриламидном геле.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1, йаув 1 опд 5., Иапо У.".1., Ргерагай 1 оп апд ргорегй 1 еэ оГ асгу 1 ан 1 де уе 1 Гог цэе 1 п е 1 есгорЬогеэ 1 э.- Апа 1. 81 осЬев., 1960, ч.1, М 2, р.391396.5 935506 ь2, Реппег С Тгацй В. В., полйакриламидном геле, М., "Мир", Ма 5 оп О.Т., 91 Ваап-СоИе 1 й,1. Оцап 1 с 1- 1971, с. 90.Г 1 сай 1 оп оС сооваээ 1 е Ь 1 це эйа 1 педргойе 1 пэ гп ро 1 уасгу 1 ав 1 де де 1 э Ьаэед. 4. Рапущ 5., СЬа 1 М 1 еу й., Н 1 дЬ оп апа 1.узел оГ е 1 цйед. ануе. Апа 1.810"геэоцйоп асг 1 д 1 1"геэо ц оп асгу аа е де е есйгорсЬеа., 1975, ч.63, й 2, р 595-602. Ьогеэ 1 э оГ 111 эйопеэ.- АгсЬ. В 1 осЬев.3. Маурер Г. Диск-электрофорез. апд В 1 орЬуэ., 1969 ч.130 й 2, Теория и практика электрофореза в Ь,337-346.Составитель О. ГалкинРедактор А. Гулько Техред С,Мигунова Корректор 11 111 вцдкаЯЗаказ 4152/30 Тираж 445 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открмтий113035, Москва, Ж, Раущская наб., д. М 5вфилиал ППП "Патент"; г. Ужгород, ул, Проектная, 4