2-(3 -хлор-1, 2, 4 -триазолил-5 -азо)-1, 8 диоксинафталин-3, 6-дисульфокислоты динатриевая соль в качестве реагента для обнаружения белков

)4 С 07 1) 249/14, 6 27/26 КОМИТЕТОТНРЫТИЯМ ОСУДАРСТВЕННЬО ИЗОБРЕТЕНИЯМРИГКНТ СССР ЗОБРЕТЕНИЯ ЕЛЬСТВУ(56) Каутпапд 8 Иап Ч.З. Ргерагагоп апд ргореггдев ой асгу 1 ашЫе 8 е 1Еог иве е 1 есггорЬогев 1 в. - Апа 1.Вдосйетп. 1960, ч. 1, Р 2, р. 391-396.(4) 2-(3 -ХЛОР,2,4 -ТРИАЗОЛИЛ 5 -АЗО)-1,8-ДИОКСИНАФТАЛИН,6-ДИСУЛЬфОКИСЛОТЫ ДИНАТРИЕВАЯ СОЛЬ В КАЧЕСТВЕ РЕАГЕМТА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ БЕЛКОВ(57) Изобретение касаетсялицеских веществ, в частносоли 2-(3 -хлор,2,4-т гетероциксти ди-МариаэолилИзобретение отн ическому азосое 3 -хлор,2,4 -диоксинафталин динатриевой сол вомуименно-аэо)фокислосится к н инению, а -триазоли З,б-дисул формулы Н МН МаОВ Бозио. стве реагента для обна ни белко ью изобретен являет я поис ния бе ладающ новых реагентов для ков в ряду азосоедин улучшенными свойства щение техники провед наружения белков; со отмывки реагента,уж ий, о какоиза ро ния ащен ста ОПИСАНИЕ Н АВТОРСИОМУ С 2/5 -азо)-1,8-диоксинафталин-З,б-дисульфокислоты, применяемой в качестве реагента для обнаружения белков. Цель - создание нового более эффективного реагента для указанного на-значения. Синтез ведут диазотированием З-хлор-амино,2,4-триаэола МаМО в среде воды в присутствии НС 1 с последующей обработкой выделенного диазосоединения ди-Ма-солью хромотроповой кислоты при 0 - 2 С. Выход61, 1, брутто-ф-ла МаС,Н. Б С 1 МО вх хбНО. Этот реагент для окрашивания белков в полиакриламидных гелях обеспечивает необходимое окрашивание при концентрации белков 10 -10 И и не требует отмывки геля от избытка красителя, как в известном случае.1 табл.Приме р 1, 3, 1 г (0,02 моль) рЗ-хлор-амино,2,4-триазола растворяют в 16 мл НС 1 (1:1) и 1,4 г(0,02 моль) МаМО растворяют в 3,0 млводы. Растворы охлаждают до 0-2 С.Затем к раствору З-хлор-амино,2,4 триазола приливают при интенсивном 1перемешивании раствор МаМОг. Полученное диазосоединение отделяют на воронке Бюхнера, сушат на воздухе. Выход продукта 0,8 г. Получившийся входе реакции 3-хлор-диазо- ф1,2,4-триазол представляет собой порошок бледно-желтого цвета, легкий,рыхлый, обладает взрывчатой способностью,Для реакции аэосоединения 1,820 г(0,005 моль) динатриевой соли хромотроповой кислоты растворяют в 10 млФормула изобретения 2-(3 -Хлор,2 , 4 -триазолилазо)-1,8-диоксинаФталин,б-дисуль-фокислоты динатриевая соль Формулы 11 ИН Ма 8 ВОРа для обнаружения качестве, реагенлков. асход 7%-нойксусной кислоты,Время отмывани Фона красителя расител Соединение 1Амидовый черный10 БКумасси голубойВ.-250 200,-300 200-300 0 Составитель Г,КонновТехред А.Кравчук Редактор И.Горная Корректор Э,Лончакова Заказ 6036/24 Подписно ираж при ГКНТ ССС ВНИИПИ Государственного комитета по иэоб 113035, Москва, Ж, Ра крыти д. 4/ тениям и ская н Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,1 3 151297 воды при нагревании. Раствор охлаждают смесью льда и соли до 0-2 С и приливают к нему при перемешивании 0,840 г (0,005 моль) 3-хлор-диазо,2,4-триазола в 15 мл воды, следя за тем, чтобы температура реакционной смеси .ие превышала +2 С. После прибавления диазосоеДинения перемешивание продолжают в течение часа. 10 Выпадает осадок ярко-красного цвета. Смесь оставляют нй 16-18 ч. Затем выпавший осадок отделяют. Продукт сушат на воздухе. Выход 1,5 г (61,1 Х), Для анализа вещество перекристаллизовывают из смеси этанол:вода=2:1.Результаты элементного анализа: Найдено,Х: С 24,03; Н 3,25.Вычислено, %: С 23,94; Н 3,02.Результаты, неоднократно проведен ных анализов показывают, что азосоединение выделяется в виде кристаллогидрата с шестью молекулами воды и отвечает общей ФормулеНаС, НБС 1 И 508 ХОНГО. 25 П р и м е р 2, ЭлектроФорез белков (рибонуклеазы, гистона) в полиакриламидном геле (ПААГ) проводят в трубках диаметром 5 мм и высотой 100 мм.После электроФореза гели окрашива ют 0,2 Х-ным раствором динатриевой соли 2-(3 -хлор,2,4 -триазолил -азо) -1,8-диоксинаФталин,6-дисульФокислоты в смеси этанол - вода- уксусная кислота (5:5:1). Параллельно для сравнения гели окрашивают0,22-ными растворами амидового черного 10 Б и кумасси голубого Кв смеси этанол - вода - уксусная кислота (5:5:1) .Время отмывания красителей с гелей и расход растворителя даны в таблице.Применение реагента (1) для скрашивания белков в полиакриламидных гелях позволяет определять белки при концентрации 10-10 М и не требует отмывки геля от избытка красителя, что очень удобно при серийном анализе белков.В случае известных красителей: амидового черного 10 Б и кумасси голубого К, необходимо длительное время для отмывания красителя с полиакриламидного геля и большой расход уксусной кислоты, что значительно удлиняет время анализа белков.