Штамм фу-79, продуцент l-амилазы и протеазы
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Текст
Союз СоветсйихСоциалистическихРеслублик ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(61) Дополнительное к авт. свид-ву - (22) Заявлено 15. 07. 80 (21) 2956199/30-15 с присоединением заявки Мо -(51) М. Кл.зС 12 Н 9/28 С 12 М 9/56 Государственный комитет ССС Р по дедам изобретений и открытий(72) Авторы изобретени Т.И.Иванова, А.С.Кривиский, Л.М.Ермакова Г.В.Ставинская, В.А.Удовченко, А.П.ШарапК.А.Калунянц и В.М.Степанов а,с 1) Заявите союзный и селек учно-исследовательский инст и промышленных микроорганизм ШТАММ ВАС 11.1.05 5 ОВТ 11.15 ФУ- ПРОДУЦЕНТ Ы-АМИЛА,".1 Ы И ПРОТЕАЗЫ 111 в ФУ,едлагаемогорезультатевость к рядуов средиившихся послствительногофаголизатаменте 15 а, эа Вас.вцЬй 1 2 30 Изобретение относится к микробиопогической промышленности и касается получения штаммов-продуцентов с-амилазы и протеаэы.Препараты, содержащие с 1,-амилазу и протеаэу, широко используются в народном хозяйстве в животноводстве, пищевой, текстильной, бумажной промышленности.Лучшим иэ известных в настоящее время продуцентов -амилазы, исполь" зуемым в производстве, является штамм Вас,зцЬс 111 в ВНИИ генетика1.13.Известно также, что некоторые штаммы бацилл продуцируют наряду с Й;амилаэой щелочную и нейтральную протеазы 21.Существенным недостатком известных штаммов-продуцентов с 1-амилазы и продуцентов протеазы, в том числе и штаммов, принятых в качестве базовых образцов, является их чувствительность к производственным фагам.В тех случаях, когда фаговый фон на производстве повышается, не исключены операции, сопровождающиеся лизисом культуры.Цель изобретения - получение штамма-продуцента -амилазы и протеазы, обладающего широким спектромфагоустойчивости по отношению к специфическим фагам, встречающимся впроизводственных условиях, и не уступающего лучшим известным штаммам поосновным производственным показателям: уровню ферментативной активности и скорости роста.Новый штамм Вас.вцЬс 10 являющийся предметом призобретения, получен вселекции на фагоустойчивыделенных образцов фагпотомства колоний, разв е 15 посева на газон фагочувштамма Вас.вцЬс 111 в 103 из производственного фер а сеянного культурой штамм11 в У.Таким образом, исходным для полу чения предлагаемого продуцента с 1;амилазы и протеазы штамма Вас.вцЬ с 111 в ФУ, является штамм Вас.вцЬ й 111 в 103. Йа производстве штамм 103 используется, как продуцент ами лолитических и протеолитических фер ментов. Предлагаемый штамм Вас 11 цв вцЬс 111 в ФУв зависимости от условий культивирования может проду.цировать с 1.-амилазу или протеаэу.Штамм Вас 111 ц 5 5 цЬг 111 э ФУ продуцент 3 амилазы и протеазы хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов Всесоюзногонаучно-исследовательского институтагенетики и селекции промышленныхмикроорганизмов и имеет регистрационный М ЦМПМ В,Биологическая характеристика штамма ФУ.Культурально-морФологические признаки штамма Вас,ьцЬг 11(э ФУ,Морфология, Клетки штамма представляют собой грамположительные,спорообразующие палочки размером 1,73,0 х 0,4-0,7 мкРазмер спор;1,0-1,2 хХ 0,5-0,7 мк. 15Мясо-пептонный агар (МПА),Через48 ч роста при 37 С на МПА культураобразует беловатые; выпуклые, морщинистые колонии диаметром 2,5-4 мм,Мясо-пептонный бульон (МПБ) . При 20выращивании в МПБ через 24 ч при37 С без встряхивания на поверхностиобразуется морщинистая пленка, Ростбеэ помутнения среды. При встряхивании на качалке среда мутнеет. При 5стоянии образуется пленка,Агариэованная среда Хоттингера,При выращивании в течение 24 ч при37 С культура образует желтовато-серые круглые, выпуклые, морщинистыеколонии с лопастным краем диаметром3,5-4,5 мм.1 а синтетической среде с минеральным азотом (среда Спецайзена) .Культура растет в виде мелких, круглых колоний диаметром 1-2 мм сероватобелого цвета,На ломтиках картофеля культураобразует морщинистую, складчатуюпленку серовато-белого цвета. Современем пленка ослизняется, 40Желатину разжижает. Крахмал гидролизует.Молоко пептонизирует.Отношение к источникам углерода.Глюкозу, лактозу, Фруктоэу,сахароэуусваивает, 45Хранение штамма производят влиофильно высушенном состоянии встеклянных ампулах.Предлагаемый штамм Вас.эцЬг 111 эФУ-продуцент 1-амилазы и протеазы отличается широким спектром Фагоустойчивости,Штамм ФУстабильно сохраняетпризнаки Фагоустойчивости, что быломногократно проверено в ряде пересевов. В процессе роста он не отцепляет фагочувствительных клонови не вытесняется Фагочувствительнымштаммом (например, У) в смешаннойкультуре. Помимо устойчивости к производственным фагам штамм Вас,ьцЬ"60г 11(э ФУхарактеризуется тем,чтодостигает высокого уровня активности 1,-амилаэы эа более короткий срокФерментации (240 ед/мл эа 44 ч),в то время как .штамм Вас,эцЬг 111 ь , 65Опыт Штамм АС ед/млед/мл 1 ФУ357 14,7 103 210 6,8 315 У9,6 13,8 364 2 ФУ6,4 207 103 333 У3 14,2 342 3 фу103 221 6,3 10,214,2. У ФУ308 Средняя активность по 3 опы- там 354,3 212,7 318,7 6,5 103 9,3 В, принятый в качестве базового образца (304 ед/мл за 62 ч), а также более высокой активностью протеаэы по сравнению со штаммом Вас.ьцЬ- г 111 ь.для проверки ферментативной активности предлагаемого штамма ФУпроводят опыты по глубинному культивированию его в качалочных колбах объемом 750 мл, содержащими 50 мп питательной среды, Для биосинтеэа -амилазы штамм выращивают на среде следующего состава, Ъ: крахмал осахаренный 10, СаСО 0,03; лактоэа 0,3 К 504. 0,3; М 9504 0,015; йаС 1 О, 03; Сц 501 О, 00039; (МН 4) НР 04 О, 841 кукурузный экстракт 1, 2, БВК 0,24, вода водопроводная (рН до стерилизации 7) 2. Число оборотов качалки 180 об/мин. Выращивание осуществляют при 37 С в течение 46 ч. Амилолитическую активность в культуральной жидкости определяют по методу БЕРа.Для биосинтеза используют среду состава, Ъ; крахмал осахаренный 8, СаСО 0,05; Мд 504 0,05; КС 1 0,15; СаС 1 р 0,01; (ИН 4) НРО 1,2, кукурузный экстракт 0,8, БВК 0,4 (рН до стерилизации 7) 4. Число оборотов качалки 220 об/мин. Выращивание осуществляют при 37 С в течение 44 ч. Протеолитическую активность определяют модифицированным методом Ансона (ГОСТ 20264.2-74), Параллельно в этих же условиях выращивают штаммы Вас.ьцЬг 111 эи У,Амилолитическая (АС) и протеолитическая (ПС) активности штаммов Вас. эцЬг 111 э ФУ,103 и Уприведены в таблице.885253 Формула изобретения ЗО Составитель Т.ТуляковаРедактор М.Лысогорова Техред Е.Харитончик Корректор М.Коста Заказ 10446/33 Тираж 531 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4 Из таблицы видно, что амилолитическая активность предлагаемого штамма ФУпревышает активность штам-,мов 03 и Уна 66,6 и 11,2, апротеолитическая активность на 118,5и 52,7 соответственно.Использование штамма Вас,цЬ 111 вФУдля получения -амилазы и протеазы в производственных условиях.П р и м е р 1, Посевной материалполучают выращиванием штамма Вас.ьцЬс 111 ь ФУв колбах в виде пленки вжидкой питательной среде состава,Ъ:крахмал 10; аммоний лимоннокислый2-х замещенный 3; КНРО 4.0,2;МапНРО0,03; Мд 504 УНЯЛО 0,15; Са 504. 0,14;Ге 504, 0,002; Мп 50 0,000125; Сц 5040,00075; л -аминобензойная кислота0,001; вода 86,21 рН 6,0-6,3. Температура 37 оС, Полученным посевным материалом, составляющим 0,01 объемасреды в Ферментере, засевают аппаратобъемом 20 м с 10 м ферментацион 3ной среды следующего состава,1О.крахмал осахаренный 22,5 (10 Ъ вносится сразу, остальное в виде подпитки);СаС 00,03; МаС 1 О, 03: К 504 0,3;Мд 504.0,015; Сц 504.0,00039; БВК 0,24(ИН 4)НР 040,84; кукурузный экстракт1,2;пропинол (пеногаситель) 0,05,Ферментацию ведут при 37 оС с аэрацией в течение 44 ч. Культуральнуюжидкость с амилолитической активностью 240 ед/мл (колориметрическийметод ГОСТ 20264.4-74) высушивают нараспылительной сушилке. Выход готоного продукта равен 72. П р и м е р 2. Штамм-продуцент и среда для приготовления посевного материала те же, что и в примере 1. Культивиоование проводят в ферментере объемом 20 мЬ с 10 .лэ ферментационнойсреды,Ъ: крахмал осахаренный 13; СаСО 3 0,05; КС 1 О, 15;СаС 1 0,01; М 95040, 05; (ИН 4) НР 041,2; кукурузный экстракт 0,8; пеногаситель пропинол 0,05; рН 6,6,Процесс Ферментации идет при 37 Сс аэрацией в течение 38 ч. Культуральную жидкость, имеющую активностьпротеазы, равную 30 ед/мл, определенную по модифицированному методу Ансона (ГОСТ 20265.2-74), высушиваютна распылительной сушилке Выход сухого продукта 60.Таким образом, предлагаемый штамм.Вас,ыЬс 111 ь ФУможет быть использован как продуцент о-амилазы от исходного штамма Вас,вцЬС 111 з 103и других известных штаммов.-продуцентов 1-амилазы и продуцентов протеазы широким спектром устойчивости кфагам, распространенным на Вышеволоцком заводе, ряду фагов, выделенныхна других ферментных заводах, рядулабораторных штаммов фагов, специфичных для Вас,ьцЬс 111 ь.Использование фагоустойчивости 20 штамма ФУпозволит обеспечить более стабильное производство ферментных препаратов. Кроме того, по срав-нению с другими продуцентами, штаммВас.5 цЬЙ 115 ФУобладает более 25 высокими уровнями активности -амилазы и протеазы. Штамм Вас 111 ць ьцЬ 11 в ФУ-продуцент 3,-амилазы и протеазы, Штаммхранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов Всесоюзногонаучно-исследовательского институтагенетики и селекции промышленныхмикроорганизмов и имеет регистрационный номер ЦМПМ В.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе40 1. Авторское свидетельство СССРпо заявке Р 2711504/13,кл. С 12 О 13/10, 1979.2. К 1 ау 1 , Моьег Р.Я. 81 осЬещ.81 орЬуь,йев.Согпецп,ч.34, р.600-604,45 1969
СмотретьЗаявка
2956199, 15.07.1980
ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕНЕТИКИ И СЕЛЕКЦИИ ПРОМЫШЛЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ
ИВАНОВА ТАТЬЯНА ИВАНОВНА, КРИВИСКИЙ АЛЕКСАНДР САМСОНОВИЧ, ЕРМАКОВА ЛИДИЯ МАКАРОВНА, ШУРУПОВА НИНА ПАВЛОВНА, СТАВИНСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА, УДОВЧЕНКО ВЛАДИМИР АЛЕКСЕЕВИЧ, ШАРАПОВ АНАТОЛИЙ ПЛАТОНОВИЧ, КАЛУНЯНЦ КАЛУСТ АКОПОВИЧ, СТЕПАНОВ ВАЛЕНТИН МИХАЙЛОВИЧ
МПК / Метки
МПК: C12N 9/28
Метки: l-амилазы, продуцент, протеазы, фу-79, штамм
Опубликовано: 30.11.1981
Код ссылки
<a href="https://patents.su/3-885253-shtamm-fu-79-producent-l-amilazy-i-proteazy.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Штамм фу-79, продуцент l-амилазы и протеазы</a>
Предыдущий патент: Способ получения биологически активных веществ
Следующий патент: Способ непрерывного брожения сусла в батарее ферментеров при производстве спирта
Случайный патент: Поплавковый расходомер