Способ получения агарозы

Союз Советскнк Социалистических Рвспубпнк(22) Заявлено 190679 (2) 2782436/23-05 (53)М. КЛ. С 08 В 37/12 с присоединением заявки Йо(23) Приоритет Государствеииый комитет СССР ио делам изобретений и открытийОпубликовано 15,0881. Бюллетень Йо 30 Дата опубликования описания 150881 53 УДК 547.458,5(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АГАРОЗЬ: Изобретение относится к химической технологии, в частности к получению агарозы, находящей широкое применение в биохимической и микрьбиологической промышленности, и в виде геля в научных исследованиях в области генетики, биологии, микробиологии, биохимии, медицине. В промышленности агароза применяется в качестве матрицы для получения ионообменных материалов и сорбентов.Известен способ получения агарощы осаждением агаропектина алкилполиэтиленгликольаминами 1Недостатком данного способа является низкий выход целевого продукта.Наиболее близким к предлагаемому является способ получения агарозы, включающий разделение агарозы и агаропектина адсорбцией последнего нерастворимыми адсорбентами. Способ позволяет получить наиболее высокий выход агарозы - 60Агарозу получают следующим образом 100 г агара растворяют при кипячении и перемешивании в деминерализованной воде до концентрации агара 1,5. К прозрачному горячему раствору агара добавляют гель гидроокиси алюминия, Объемное соотношения гель гидроокиси алюминия: раствор агара 1,0:4,0. Суспензию перемешивают по крайней мере в течение 10 мин. Гель гидроокиси алю" миния отделяют от горячего раствора центрифугированием на лабораторной стаканчиковой центрифуге при числе оборотов ротора 2500 об/мин, что соответствует фактору разделения 1100. Прозрачный фугат сливают с осадка геля гидроокиси алюминия и охлаждают. При этом образуется гель агароэы. Гель агарозы проиывают и 1 з сушат ацетоном. Получают 60 г Ьгарозы. Выход агарозы 60. Относительный электроосмос агарозы 0,15 2,Недостатком этого способа явля ется низкий выход агарозы - 60 отколичества агара, так как часть,макромолекул агароэы при адоорб ции агаропектина на геле гидроокиси алюминия связывается с частицами геля силами адгезии и уносится с адсорбентом при разделении суспензии. Наряду с этим часть макромолекул подвергается деструкции(механический разрыв) и при цент рифугировании с фактором разделе 854936ния выше 1000 и не выделяется в виде целевого. продукта.Цель изобретения в . повышение выхода целевого продукта.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу полученияагарозы из водного раствора агараадсорбцией агаропектина на гелегидроокиси алюминия с последующимразделением суспензии адсорбатацентрифугированием и выделениемагарозы, адсорбцию агаропектина проводят на смеси двуокиси кремния с размером частиц 5-100 мкм и гелягидроокиси алюминия при весовом соотношении 0,2-1,0".1,0-1,4 соответственно, а центрифугирование проводят с фактором разделения 700-900.Вдсорбцию проводят при объемномсоотношении смеси двуокиси кремния и геля гидроокиси алюминия и раствора агара 1,0-1,2:2,8-3,2 соответственно.Объемное соотношение смеси гелягидроокиси алюминия и двуокиси кремния:раствор агарозы 1,0-1,2:2,8-3,2 дает возможность осуществить селективную адсорбцию агаропектина но всему объему раствора, Деструкция макромолекул агарозы в растворе при разделении суспензии адсорбента исключается за счет проведения центрифугирования при факторе разделения 700-900. При этом факторе.образуется ламинарный поток фугата относительно осадка. Ламинарным потоком устраняется образование сильных гидродинамических сдвигов, приводящих к деструкции макромолекулы агарозы. 1 аким образом, способ заключается в том, что 100 г агара растворяют при кипячении и перемешивании в деминерализованной воде до концентрации агара 1,5. К прозрачному горячему раствору агара добавля" ют гомогенизированную, при механическом перемешивании, смесь геля гидроокиси алюминия и двуокиси крем ния. Весовые соотношения двуокись кремния:гель гидроокиси алюминия 0,2.1,0:1,0-1,4. Объемные соотношения смесь двуокиси кремния и геля гидроокиси алюминия:раствор агара 1,0-1,2:2,8-3,2, Размер частйц двуокиси кремния 5-100 мкм. Суспензию смеси геля гидроокиси алюминия и двуокиси кремния в растворе агарозы перемешивают в течение 10 мин. Смесь геля гидроокиси алюминия и двуокиси кремния отделяют от горячего раствора агарозы центрифугированием в осадительном режиме, фактор разделения при центрифугировании 700- 900. Прозрачный фугат сливают с осадка смеси геля гидроокиси алюминия и двуокиси кремния и охлаждают, При этом образуется гель агарозы., Гель агарозы промывают и сушат ацетоном. Получают агарозы 85 г. Выход агарозы 85. Относительный электроосмос агарозы 0,15,П р и м е р 1, 100 г агара загружают в 30-ти литровую эмалиро" ванную емкость, заливают 14 л деминерализованной воды и нагревают при церемешивакии механической мешалкой на водяной баке до полного растворения агара (1 ч нри нагревании до 80-85"С). После этого к раствору при перемешивании добавляют 5 л смеси геля гидраокиси алюминия и двуокиси кремния. Весовые соотношения двуокись кремния:гель гидроокиси алюминия 0,2:1,0. Размер частиц двуокиси кремния 60-100 мкм. Смесь добавляют таким образом, чтобы температура суспензии не опускалась ниже б 5-7 ЮС. После добавления всего количества смеси доводят темпера/туру до 80 С и инкубируют при этой температуре в течение 10 мин. Смесь геля гидроокиси алюминия н двуокиси кремния с адсорбированным агаропектином (адсорбат) отделяют от раствора агарозы центрифугированием в осадительном режиме при факторе разделения 900,. Прозрачный фугат сливают с осадка смеси геля гидроокиси алюминия и двуокиси кремния с адсорбированным агаропектином и охлаждают. При этом образуется гель агарозы. Агарозу промывают деминерализованной водой. После этого целевой продукт сушат ацетоном. Получают 170 г агарозы, выход 85. Относительный электроосмос агарозы 0,15. П р и м е р 2. 200 г агара загружают в 30-ти литровую эмалированную емкость, заливают 14 л деминерализованной воды и нагревают при перемешивании механической мешалкой на водяной бане до полного растворения агара (1 ч при нагревании до 80-85 С). После этого к раствору при перемешивании добавляют 4,8 л смеси геля гидроокиси алюминия и двуокиси кремния, Весовые соотношения двуокись кремния:гель гидроокиси алюминия 1, 0: 1, О. Размер частиц двуокиси кремния 5-100 мкм. Пос" ле добавления смеси доводят температуру до 80 С и инкубируют при этой температуре в течение 10 мин. Смесь геля гидроокиси алюминия идвуокиси кремния с адсорбированным агаропектином (адсорбат) отделяют от раствора агарозы центрифугированием при факторе разделения 700.Прозрачный фугат сливают с осадка адсорбата и охлаждают. При этом образуется гель агарозы. Агарозу промывают деминерализованной водой и сушат ацетоном. Получают 167 г агарозы, выход 83,5. Относительный электроосмос агарозы 0,15.П р и м е р 3. 100 г агара растворяют при нагревании до 80-85 фС854936 Формула изобретения Составитель Т. МартинскаяРедактор М. Дылын ТехредС.МигуноваКорректор Е. Рошко Эаказ 6816/33 Тираж 530 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва Ж, Раушская наб., д.4/57филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 в 14 л воды. К раствору при переме-шивании добавляют 5 л смеси геля гидроокиси алюминия и двуокиси крем-, ния. Весовые соотношения двуокись кремния:гель гидроокиси алюминия 0,2:1,4Объемные соотношения смесь двуокиси кремния и геля гидроокиси алюминия:раствор агара 1,0:2,8. Размер частиц двуокиси кремния 60-100 мкм. Смесь добавляют при температуре не ниже 65-70 С. После добавления инкубируют смесь при 80 С в течение 10 мин. Смесь геля гидроокиси алюминия и двуокиси кремния с адсорбированным агропектинОм отделяют от раствора агарозы цейтрифугированием в осадительном ре жиме .при факторе разделения 900. Прозрачный фугат сливают с осадка геля гидроокиси алюминия и двуокиси кремния с адсорбированным агаропек- тином и охлаждают, При этом образу ется гель агарозы. Агарозу. сушат ацетоном. Получают 166 г агарозы, выход 83. Относительный электроосмос агарозы 0,15.П р и м е р 4. 100 г агара растворяют при нагревании до 80-85 С в 14 л воды. К раствору при перемешивании добавляют 5,2 л смеси геля гидроокиси алюминия и двуокиси крем" ния. Весовые соотношения двуокись кремния:гель гидроокиси алюминия 0,2:1,0. Объемные соотношения смесь двуокйси кремния и геля гидроокиси алюминия:раствор агара 1,2:3,2, Размер частиц двуокиси кремния 60-100 мкм Смесь инкубируют при 80 С в течение 10 мин и отделяют адсорбат на центрифуге при факторе разделения 900, Фугат сливают и охлаждают для образования геля агароэы. Агарозу промывают водой и сушат ацетоном. Полу чают 160 г агарозы, выход 80, Относительный электроосмос агарозы 0,15.П р и м е р 5. 100 г агара загружают в емкость и растворяют цри нагревании до 80-85 С в 14 л воды. К раствору при перемешивании добавляют 5,2 л смеси геля гидроокиси алюминия и двуокиси кремния. Объемные соотношения смеси и раствора агара 1,2: 3,2, Весовые соотношения двуокись кремния:гель гидроокиси алюминия 0,2:1,0. Размер частиц двуокиси кремния 110-600 мкм. Смесь инкубируют при 80 С в течение. 10 мини отделяют адсорбат на центрифугепри факторе разделения 900. Фугатсливают и охлаждают для выделенияагарозыугарову промывают водой исушат ацетоном, Получают 130 г агарозы, выход 65. Относительный электроосмос агарозы 0,14,Предлагаемый способ дает воэможность значительно повысить выходагарозы из агара - с 60 по известному способу до 85 по предлагаемому,обеспечивая тем саьым рациональноеиспользование сырья и рабочей силы,1. Способ получения агароэы изводного раствора агара адсорбцией агаропектина на геле гидроокисиалюминия с последующим разделениемсуспенэии центрифугированием и выделением агарозы, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта,адсорбцию агаропектина проводят насмеси двуокиси кремния с размеромчастиц 5-100 мкм и геля гидроокиси алюминия при весовом .соотношении 0,2-1,0:0,1-1,4 соответственно,а центрифугирование проводят с фактором разделения 700-900.2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, адсорбцию проводят при объемном соотношении смеси двуокиси кремния и геля гидроокиси алюминия и раствора агара 1,01,2:2,8-3,2 соответственно.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент Чехословакии Р 154513,кл. С 07 С, опублик. 1974,2.,3. Ваге 1 п 9. Удобный методприготовления агароэы.-"СЬевса 1С Ьеа ь с гуф, 1969, т. 15, Р 10,с. 1002-1004 (прототип).