Способ получения иммобилизованныхферментных препаратов

3пцрролидона (ВТГ 1) и аллилтиоглицидилового эфира (ЛТГЭ) варьируют в широкихпределах (п 1:п) от 1:9 до 9: 1 и такимобразом изменяют число групп, способныхсвязываться с ферментами.11 апримср, смешивают 952 г Б.ВТГ и3,25 г аллилтиоглицидилового эфира и ксмеси добавляют 0,055 г динитрила азоои.сизомасляной кислоты, растворснцыс в 1 млхлороформа, и нагревают 30 час при 65 С.Голучсцпый гслсобразный продукт разбав.ляют 25 мл хлороформа ц осаждают до.бавлсписм пятикратного количества диэти.лового эфира. Образовавшийся осадок высушссвают в вакуумсушильном шкафу. Вы.ход составляет 65,6%. Анализ на содсржаппс мономеров в полученном сополимерссоставляет ВТП 72,7, АТГЭ 27,3",о.1 ример 1, К 1 г сополимера ВТГ 1 -АТГЭ добавляют 50 мл фермснтного раствора (амплоризипа Г 10 Х), который получают предварительным растворением500 мг амилоризина (135 мг по белку) в50 зсл 0,1 М универсального буфера(11 ВО, 11 зРО СН СООН, КаОН) прир 1 3 -4, Смесь тщательно перемешиваютп оставляют при 4 С в течение 6 час,Полученный целевой продукт отмываютот пссвязавшсгося белка и продуктов реакции О,М универсальным буфернымраствором с рН 8,8, Каждую фракцию исследуют па поглощение при 645 нм наСФи па амилолитичсскую активность(ГОСТ 20264.4 - -74). Определяют количество пссвязавшсгося белка. Затсъ иммобилпзовацный амилоризин Г 10 Х промыва.сот водой до полного исчезновения оптичсссссй плотности в промывной воде. Удсль.пая активность иммобилизованцого фсрментцого препарата составляет 10,0 сд/г.Пример 2. К 800 мг сополимсра ВТП -АТГ добавляют 200 мг амилоризинаГ О Х, предварительно раствореного в50 сл. буфера. Смесь перемешивают и оставляют при 4 С в течение 6 час.Остальные процессы проводят аналогично примсру 1,У.ельссая активность иммобилцзованного фермента составляет,2 сд/г.Пример 3, К навескс соцолимсра 1 гдобавляют 50 мл фсрмсцтного растворапп рН 50, содержащего трипсин (25 мг).Смесь тщательно перемешивасот и оставляот при 4 С в тсчепис 12 час.Остальные операции проводят, как впрпмсрс 1,:1 сльная активность иммобилизовацно.го трсспсипс составляет 16 ед/г.Время полуинактивации при 50 С2 О мин,В табл. 1 приведены результаты описывслсого способа и известного при получении иммобцлизоваццбго ферментпого препарата сса основе амилоризина Г 10 Х.Каталитическая активность, ед/гПотери активности прииммобилизации, %Время полуинактпвации при 50, мпн,Температурный оптимум, С 10,0 50 150 52 15 В табл. 2 даны результаты илиясия р 1среды и концентрации препарата па удсль цую активность иммобилизовацсццо амплсризица Г 10 Х.20Таблица 2 Концентрация ферментногопрепарата, 25 ц/мл (прир 1- 8,0 Удегн,ая активность,сд/г (на 1 г носителя), сс., ннс я активность, сл/г (нагспсите,ся рН 30 35 Табси 3 Ферментативный процесс Гидрлспцсцсног.ослиц Гилролизрдкмдс 40 П о к а:5 а се ь нммоби- лизован нм,сс;биссснас.иый трннасн орп. Ин- -пьси ам- о 45Время работы реактора при однократном применении фермента.часКоличество прогидро;псзовавпсегося матсриала (ца 1 г препарата,) гГлубина гидросп- за, %55 21,5 З,О 117,2 652,7 17 38 Из табл. 2 следует, что иммобилизацияцротскаст предпочтительно при рН 3 - 4, а 60 оптимальная концентрация фермента составляет 6 - 8 мг/мл.При внедрении данного способа в про.изводство для получения с 1 абильных фер.ментов нс требуется никаких дополнитель. цых затрат, нс требуется дополнительная 1,0 2,0 4,0 6,0 7,0 8,0 9,0 1 О,О 1,04 2,60 4,20 ,6,43 6,84 4,70 3,32 1,83,04,0 5,5 6,0 7,0 8,0 8,8 7,100.0 0,0 7,50 (,80 7,00 с,80 6,6081018 Составитель О. СкородумоваТехред А. Камышникова Корректор О. Силуянова Редактор Л. Курасова Заказ 251 Тираж 419 Изд,235В 1-1 ИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий13035, Москва, %-35; Раушская наб, д. 4/5 Подписное Загорская типография Упрполигрэфиздата Мособлисполкома 5обработка для активации носителей илц ферментов.Например, прц прочих равных условиях степень гидролиза крахмала при 30 С в тсчсццс 30 мин составляет по предлага. смому способу 70/о, по известному способу 25/о.О преимуществах применения иммобилцзованных ферментов в конкретных процсссах (гидролиз крахмала, гидролиз пищевого белка) и данные о применс 11 иц иммобилизовацного амилоризина для осахаривация крахмала ц иммобилизованного трипсина для получения гидролизата пи. щсвого белка из шрота хлопчатника приведены в табл. 3. Формула изобретения 1. Способ получения иммобилизованных фсрментцых препаратов на основе ферментов или фермсцтных препаратов связыван 1 км их с полимером на основе производного Х-вццилпирролидоца н эфира глицид)доногоо) спирта при пониженной температуре и оптимальном значении рН среды. отл и ч а ю щ и йся тем, что, с целью уве 6личения активности и повышения стабильности препарата, в качсстзс полимера ис.пользуют сополимср Х-винилтиопир)олидона и аллилтиоглицидилового эфира, а свя.5 зывание проводят при 4 - 6 С.2, Способ по и. 1, отличающийсятем, что связывание проводят прц весовом соотношении фермент цли фсрмецтцый препарат: полимер, равном 1:(2 - 8).3. Способ по п. 1, отлцча)ощийсятем, что в качестве фермента используют трипсин, а связывание ведут при рН 4,9 - 5,1,4. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я 15 тем, что в качестве фермсцтного препаратаиспользуют амилоризиц Г 10 Х, а связывание проводят при рН 3 - 4. Источники информации,принятые во внимание прц экспсртизе1. Таджиев М. Х., Ибрагимов Ф., Хасанов Х. Т., Джанбаева Н. Р. и Рахимов М. М. Иммобилизация и стабилизаппя ферментов полимерами с функциональными эпоксигруппами. Прикладная биохимия и микробиология, М., Наука;, т. Х 1 Ъ, вып. 5, 1978, с. 703 - 708 (прототип).