Способ получения препарата “трансфер-фактора

от ч 1 гА Союз Соаетскии Социалистических Республик(22).Заявлено 20,02.79 (21) 2727051/28-13 (53)М. Кл. А 61 Е 35/16 с присоединением заявки Нов(23) Приоритет -Государственный комитет СССР по делам изобретений н открытий(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯПРЕПАРАТА "ТРАНСФЕР-ФАКТОРА" Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано при получении иммунологических стимуляторов.В современной терапии иммунодефи цитных состояний, аллергических и аутоиммунных заболеваний, а также при лечении хронических инфекций и в онкологической практике в качестве вспомогательного средства применя- тО ются низкомолекулярные (ниже 30000- 10000 дальтон) компонены лимфоцитарных лизатов, называемые препарат.ми "трансфер-Фактора" (фактора, переносят;его реципиенту клеточный иммуни тет от донора лимфоцитов). Подобный препарат может быть использован с диагностическими целями и в экспериментальной эммунологии.20Известны способы получения препарата "трансФер-Фактора" из лимфоцитов донорской крови, лимфоидных органов, например миндалин, из которых тем или иным способом (эаморажи вание и оттаивание, Фенольная экстракция, экстракция детергентами) готовят экстракт или лизат. Полученные лизаты или экстракты подвергают диалиэу или ультрафильтрации для выде ления низкомолекулярной Фракции, которую затем лиофилизируют 111,Известен также способ полученйя препарата "трансфер-Фактора" для индукции клеточного иммунитета:препарат зкстрагируют с помоиью тритона Хиз культивированных лимфоцитов, разрушенных замораживанием и оттаиванием, затем вццеляют низкомолекулярную фракцию экстракта с помощью ультрафильтрации на полых волокнах ХМ, РМи М(Амикон, США) и лиофилизируют 21.Однако указанный способ предусматривает в качестве исходного сырья только лимфоциты, источники которых могут быть ограничены. Кроме того, применение детергента (тритона Х) для оптимизации условий зкстракции не обеспечивает получения препарата без привнесенных примесей; в конечном продукте остается тритон Х, обладавший побочной биологической активностью, поскольку способ не предполагает условий для его удаления.Цель изобретения - расширение сырьевой базы для получения препарата,Поставленная цель достигается тем, что в предлагаемом способе полу787031 70,Стафилокок- Иакрофагиковый анти- морскойфагин свинки Из лимфоцитов миндалин, полученный поизвестномуспособу Перитонеальныеклеткиморскойсвинки 767(отличиене достверно) Из плазмыпо предлагаемомуспособу Те же Тот ж Тот жтора" п чсг ия, -; препаратом "трансфеомнатной температуре. ования. апилляров в течение 18 ч куль блица Стабили рованны эритроц 4 РОуберкина з лимфоциов миндаин по изестномупособу Клетки крови ту- беркулиннегативного донора 16отличие недостоверно Тот же е е Иэ плазмыпо предлагаемомуспособу) Оценка реакции с помощью цитоферометра (Оптон). чения препарата "трансфер-фактора" в качестве биологического материалаиспользуют.плазму донорской крови, экстракцию проводят этанолом при конечной концентрации его 3,0-3,5 и насыщении раствора двуокисью угле.рода, а в качестве газа, создающего давление при ультрафильтрации, использукт двуокись углерода при раба чем движении его 0,15-0,20 МПа.П р и м е р . После обычной подготовки к ультрафильтрации (центрифугирования и Фильтрации через мембранный фильтр Владипор Мфй Оч 55) 482 ю 5 см плазмы донорской крови помещают в ячейку для ультрафильтрации. При постоянном перемешивании без вспенивания прибавляют 17;5 см этанола(96 ф). Воздух из ячейки вытесняют спомощью сжатой углекислоты, послегерметизации ультрафильтрационнойсистемы устанавливают рабочее давление углекислоты 0,2 МПа. УльтраФильтрацию ведут в течение 4 ч (мембрана Владипор УЛМ, рабочая площадь150 см"). Содержащийся в Фильтратеактивный продукт разливают по 2 смв ампулы и лиофилизируют.Тестирование полученного препарата проводят по измерению его цитоиммобилизующей активности.Результаты реакции торможенияактивной миграции макрофагов морскбйсвинки представлены в табл.1, а из менение электрофоретической подвижности индикаторных клеток - в табл.2,Таблица 1Заказ 8215/4 Тираж 673 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 1 1 3035 р Москва р К 35 Раушская набд 4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул. Проектная,4 Как видно иэ приведенных результатов тестирования, препарат "трансФер-фактора", полученный по предлагаемому способу, сообщает лимфоцитамнормальной морской свинки и туберкулин-негативного донора способностьвыделять лимфокины в ответ на антиген (антифагин - в реакции торможения миграции макроФагов морскойсвинки и РРО - в реакции замедленияэлектрофоретической подвижности индикаторных клеток),Использование предлагаемого способа получения препарата "трансферфактора" позволяет привлечь дополнительный источник сырья, свободныйот микробной контаминации (например,по сравнению с лимфоцитами миндалин).Препарат "трансфер-Фактора" можетбыть добавочным продуктом при производстве донорского гамма-глобулинаи антилимфоцитарного глобулина.формула изобретенияСпособ получения препарата "трансфер-Фактора" путем зкстракции биоло/ гического материала с последующейультрафильтрацией экстракта под давлением газов, о т л и ч а ю щ и й -с я тем, что, с целью расширениясырьевой базы, в качестве биологического материала используют плазму донорской крови, экстракцию проводятэтанолом при конечной концентрацииего 3,0-3,5 и насыщении растворадвуокисью углерода, а в качествегаза, создающего давление при уль трафильтрации используют двуокисьуглерода при рабочем далвении его0,15-0,20 МПа. Источники информации,Я принятые во внимание при экспертизе 1. Лоуренс Х. и Эль-Аскари С. Приготовление и очистка Фактора переноса. Методы изучения 1 п го клеточ О ного иммунитета, М., 1974, с.256.-272.2. Патент ВеликобританииР 1443948,кл. А 61 К 45/00,20.10,1972.