Штамм 163-продуцент амилосубтилина и протосубтилина

(23)ПрнорнтетСССР ло делам изобретений н открытий,779,94 (088.8) Дата опубликования описания 30.08.80 М, М, Скворцова, Н. А, Томашевская, Н. И, Кашкина и Л, Ю, Прасолова(7) Заявитель Бердский химический заводИзобретение относится к микробиологической промышленности, в частностик производству ферментных препаратов.Известен штамм ВастИов 5 о 1 зт,тИь103 - продуцент амилосубтилина и протосубгилина 1 тИзвестный штамм не обладает устойчивостью к вирулентным фагам,Белью изобретения является получение штамма Вас 1 Ицв 60 ЫлИв 163,обладающего устойчивостью к вирулентным фагам,Штамм Вас тИов эоМтИэ 163получен в результате изучения естественной изменчивостииспользуемых в производстве амилосубтилина и протосубтилина культур Вас 1 Ыю воЪт,тт,1 вШтамм ВасИцв 5 оЬОИв 163хранится в музее культур микроорганизмов ВНИИ енетики под номером ЦМПМВи характеризуется следующимипризнаками,Культурально-морфологические признаки,2Величина клеток трехсуточной культуры на сусло-агвре 0,7-0,8 х 2-3 мкмтклетки подвижны, жгутики расположеныпо периферии клеток. Клетки не содержатживых включений, На 4-8-е сутки насусло-вгвре.образуются овальные споры размером 0,6-0,9 х 1,0-1,8 мкм, Споры расположены аксцентрально, преимущественно ближе к центру, Мясо-пептонный агар. Нв 3-и сутки роста ко Олонии белого цвета, круглые с неровными краями, центр морщинистый, возвышающийся в виде. втлкаичикв,Сусло-агар, На 3-и сутки роста колонии белого цвета, круглые, края неровные, центр гладкий, но встречаетсяи морщинистый. Ломтики картофеля, Нв 3-и сутки рост.обильный, складчатый,Глюхозный агар, При посеве столбиком культура дает рост по всему уколу,Физиолого-биохимические свойства,3 7374Температурный оптимум +37 ОС. Желаотину при 18 С медленно разжижает,иногда до 15 суток и более,Молоко с лвкмусом через 10 сутокслабо пептонизирует через 15 суток ство 5раживвет,Лакмус обесцвечивает,.Крахмал гидролнзует.Усваивает глюкозу, сахарозу,Не сбраживает лвктозу, галактозу, 10мальтозу, рибозу, маннит, рамнозу,424Культуру выращивают поверхностнымметодом в,термостате при 37 С в течение трех суток, Полученную посевную культуру используют для засева ферментвционной среды,Состав ферментационной среды и условия ферментации при биосинтезе амидосубтилинв, вес,%:Крахмал16-18Кукурузный экстракт 1,2Дрожжи сухие кормовые 0,24Лак тоза 0,3Магний сернокислый 0,015Калий сернокислый 0,3А ммоний форсфорнокислый двузамещенный 0,84,Натрий хлористый 0,03Медь сернокислая 0,00039Окись кальция 0,0012Амилосубтилин 0,017Ор тофосфорнвя кислота 0,61ВодарН 6,8-6,7ОстальноеКультивирование осушествляет при темопературе 37 С, при постоянном перемешиввнии и аэращи среды и при поддержаниипостоянного рн 6,2-6,3 с помощью28%-ного водного рж:твора аммиака. Длительность ферментапии 66-72 ч, Ферментажвная активность культуральной жидкости по методу согласно ГОСТ 20264,4-74не ниже,160 ед АС/мл,Состав ферментационной среды и условия ферментации при биосинтезе протосубилина, вес.%:КрахмалКукурузный экстрактДрожжи сухие кормовыеМагний сернокислыйКальций хлор истыйКалий хлористыйАммоний фосфорнокислый двузамещенный 1,2Амилосубтилин 0,05Ортофосфор ная кислота 0,2ВодарН 6,6-6,8ОстальноеКультивирование осуществляется при температуре 37 С и при постоянном перемешивании и аэрации среды Длительностьферментации 80-86 ч. ферментативнаяактивность культуральной жидкости пометоду Лейлян-фольгардв согласноГУ 59-32-70 не ниже 170 ед. ПС/мл,После окончания ферментвпии культурвльную жидкость подвергают 1,5-2-крат 8,0 0,8 0,4 0,05 0,01 0,15 45 50 0,0020,000750,000125 0,001 На среде Кларка образует ацетилметил,карбинол, интенсивность кислотообразования слабая, 15Культура Вос 1 Юоэ 5 цЪМИв 163обладает устойчивостью к вирулентнымфагам,Пример использования штамма ВосИ"бзик Бои.15 163. 20- Культуру штамма хранят в лиофильновысушенном состоянии в запаянных ам, пулах при температуре 2-4 С, Защитнойсредой для лиофилизации служит сыворотка бычьей крови, добавляемая по250,2 мл в каждую ампулу, С целью оживления культуры в ампулу заливают 1 млмясопептонного бульона, суспензию перемешиввкл иглой, закрываютампулу стерильной ватной пробкой и выдерживают.в 30отаком виде в термостате при 30 С втечение 10-15,мин, после чего термоостатируют при 37 С в течение 15 мин,Суспензию культуры пересевают на скошенный в пробирках суслоагар 3,5-5,0 Били на стерильные ломтики картофеля итермоствтируют при 37 С в течение трехсуток,Для приготовления посевного материала культуру, выращенную на сусло-вгвре 40или ломтиках картофеля, переносят в кблбы с посевной средой следующего состава р %:Крахмал 20Аммоний лимоннокислый 3Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,2Натрий фосфорнокислыйдвузамещенный 0,3Магний сернокислый 0,18Железо сернокислоезвкисноеМедь сер нокислая55Марганец сернокислыйАминобензойнвя кислота рН 7,0, БНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская набд, 4/5 Заказ 260 2/7 Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул, Проектная," 4 5 737ному концентрированию в вакуум-выпарной установке при температуре 35-40 СоУпаренную культуральную жидкость высушивают в распьшительной сушильнойустановке при следующих условийх: температура сушильного агента на входе восушильную башню 140 С,на выходе -70-75 С,Полученный сухой концентрат усреаняют поваренной солью до активности 10требуемой действующими ГОСТ на препараты амилосубтилин и протосубтилин,Использование штамма ВасЮав воЬО Я е 163 позволит повысить сьемготового продукта с единицы обьема питательной среды и снизить затраты,связанные с дополнительной обработкой истерилизацией оборудования,20Формула иэобое те ния(Штамм ВосИов БоЬЖ 1 в 163 - продупент амилосубтилина и протосубтилина.Хранится в музее культур микроорганизмов ВНИИгенетики под номером ЦМПМВ,Культурально-морфологические признаки,ЗО Величина клеток трехсуточной культуры на сусло-агаре 0,7-0,8 х 2-3 мкм, клетки подвижны; жгутики расположены по периферии клеток, Клетки не содержат жировых включений, На 4-5-е сутки З 5 на сусло-агаре образуются овальные спо 442 6.ры размером 0,6-0,9 х 1,0-1,5 мкСпоры расположены зксцентрал ьно, преимущественно ближе к центру,Мясо-пептонный агар, На 3-и суткироста колонии белого цвета, круглые снеровными краями, цепче морщинистыйвозвышающийся в виде вулканчикаСусло-агар, На 3-и сутки роста колонии белого цветакруглые, края неровные, центр гладкий, но встречается иморщинистый,Ломтики картофеля, На 3-и суткирост обильный, складчатый, Глюкознь 1 йагар, При посеве столбиком культурадает рост по всему уколу,Физиолого-биохимические свойства.Температурный оптимум .+37 С,Желатину при 18 С медленно разжижает, иногда до 15 суток и более,Молоко с лакмусом через 10 сутокслабо цептонизщует, .через 15 сутокствораживает,Лакмус обесцвечивает,Крахмал гидролизует,Усваивает глюкозу, сахарозу,Не сбраживает лактозу, галактозу,мальтоэу, рибозу, маннит, рамноэу. Насреде Кларка образует ацетилметилкарбинол, интенсивность кислотообразования слабая,Культура Вос 1 Ко ь БцЬОР й 163 обладает устойчивостью к вирулентным фагам,Источники информациипринятые во внимание при акспертизе1, Авторское свидетельство СССРМ 283152, кл. С 12 К 3/00, 1970.