Способ получения иммобилизированного фермента

%о -Активность фермента аоЯо63 а 1ах Оц)аОо.е о х о ох оМ 1 ьй Я Ф х. о Остаточна я активность от ндтивного фермента,о ха ) х о а- ,е,м е 4 (О б с. хи Способ ох ах 7 577 13,6 90,0 Известный:16,2 5 1 О 71,4 16,6 П редл дг аемый 92,3 8,6 4,3 1 О ф В качестве носителя в обоих способах" использовалицеллюлозу; а" активацию его осуществляли ЗпС 14Установлено; что.при инкубировании вммобйлизованных. ферментов, получаемых ггри-указанныхвышет условйях известным ипредлагаемым способамй; - при"температуре4065 С и рН 5,8 стабильность последних в 2,7 микрокристаллическую Т дблица 2 Количество связанного белка, мг/г,мый 4,2 3,6 3,4 3,1 3,2 3,6 3,13,1 3,5 3,3 :2,8 2,1 2,1 1,9 1,8 1,6 00,511,522,533,5 раза выше. 3"реххлористого титана в ацетоне или 10%-Фго рМсгворачетйреххлористого "олова в ацетоне, перемешивают 1 - 5 мин и выдерживают 30 - 40 мин. Носитель отфильтровывают, промывают 10 - 20 мл ацетона и 5 переносят в 5 лл 0,1 М фосфатного буфера, содержащего 5,5 мг глюкозооксидазы.Смесь перемешивают,10 - 20 мини выдерживают 18 ч при 2 - 5 С. Полученный иммобилизованный препарат отфилЬтровыва О1 от,"промывают 500 мл 0,1 М фосфатногобуферного раствора (рН=7,5),и 400 мл 0,1 М хлористого калия. Количество иммо 5 илизованного фермента равно 1,2 мг/г носителя и 2,5 мг/г носителя соответственно 15;для"четыре 1 Хлористого олова и четыреххлористого титана.П р и м е р 3, 100 мг одного из высоко""пористых неорганических носителей сило "хрома-, перлита, микрозила илй силикагеляразмешивают магнитной мешалкой в 7,5 мг абсолютного сульфолана в течение 15 мин, лосле чего добавляют 7,5 мл 10%-ного раст.вора трехбромистбго алюминия в сульфо.лане. Смесь перемешивают 3 ыан и вы.одерживают 30 - 40 мин, Обработайный таким образом носитель фильтруют; промывают 20 мл абсолютного сульфоланаи переносят в 6 мл 0,1 М фосфатного буферного раствора с рН=7,5, содержащего 12 мг 30 трипсина. Послеэтогосмесь энергично пеейеЪтивают и выдерживают при 4 С 20 ч.Полученный иммобилизованныи фермент фильтруют, промывают 400 мл 0,1 М фосВ табл, 2 "приведены сравнительные свойства иммобилизованных ферментов при инкубированяи йх в растворах КС 1 (рН 5,8), концентрация фермента 5 мг/мл,4фатного буферного раствора с рН=7,5 и 400 мл 0,1 М хлористого калия, Количество иммобилизованного трипсина составляет 4,3 - 16,1 мг/г носителя,П р и м е р 4, 100 мг сйлохрома, перлита, микрозила или силикагеля тщательно размешивают в 7,5 мл абсолютного ацетона 10 - 20 мин, после чего добавляют 7,5 мл10%-ного раствора четьреххлористого олова в ацетоне или 4%-ного раствора четыреххлористого титана в ацетоне. Смесь перемешивают 1 - 5 мин и выдерживают 40 мин. Обработанный носитель фильтруют, . промывают 20 мл абсолютного ацетона и переносят в 6 мл фосфатного буферного раствора (рН=7,5), содержащего 12 мг трипсина. После этого смесь энергично перемешивают и выдерживают при температуре 5 О в течение 20 ч. Полученный иммобилизованный фермент фильтруют, промывают 400 мл 0,1 М фосфатного буферного раствора и 500 мл 0,1 М хлористого калия. Количество иммобилозованного трипсина составляет 4,3 - 16,1 мг/г носителяВ табл. 1 представлены эффективность связывания фермента и его свойства, полу чаемые известным- и предлагаемым спосо-бамиТаблица 1Корректор С. файн Редактор Г. Прусова Заказ 109/179 Изд,193 Тираж 497 - Подписное НПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открйтнй 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Тип. Харьк. фил, пред. Патент Аа 5Аналогичная зависимость наблюдаетсяпри инкубировании иммобилизованных фер;ментов в растворах мочежины концентрацийот 5,5 до 7,5 М, рН 5,8,Применение указанного способа получения иммобилизованного фермента по срав-,нению с известнйм позволяет увеличить ко 4личество связанного белка, повысить термостабильность фермента и увеличить его стабильность в растворах электролитов и денатурирующих агентов,- 1, Способ полученця иммобилизованного 15 фермента, включающий контактирование носителя с раствором соли металла и последующим, контактированием его с водным раствором фермента., о т л и ч а ю щ и й с я 64тем, что, с целью,.увеличения количествасвязанного фермейта и его стабильности,используют раствор соли металла в апро-тонном растворителе и контактирование сраствором фермента осуществляют при нейтральных значениях рН,2. Способ по и, 1, отличающийсятем, что в качестве солей металла используют соли алюминия, титана и олова.3. Способ по пп. 1 и 2, о т л и ч а ю щ и йся тем, что в качестве апротонного растворителя используют ацетон или оульфолан. Источник информации, принятый вовнимание прйэкспертизе; 1. Патент Великобритании1346631,кл, С 07 б 7/02, опублик. 1975 (прототип),