Способ количественного определения гардоны и его метаболитов

ОПИЮ ИЗОБР Союз СоветскихСоциаяистиыеских спублик ЕЛИ ТОРСКОМУ СВ ЛЬСТ(22) Заявлено 27.06.77 (21) 24 исоединением заяв осударственныи комитет СССР по елам изобретений и открытий) Заявитель есоюэный научбиологически исследовательский институетодов защиты растений 54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИ ГАРДОНЫ И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ я точностьное иэвлечестительных терями веществ их иэ гексана ьность опредеексана, отделении и упариванииексанового слоя, и хроматографироании остатка (2. Недостатком споИзобретение относится к аналититеской химии, а именно к способам количественного определения гардоны-транс-иэомера 2-хлор-(2,4,5- -трихлорфенил)-винилдиметилфосфата и его метаболитов,Цис-иэомер-гардоны:2,4,5-трихлорацетофенон (ТХАФ);2,4,5-трихлорфенилэтанол(ТХФЭ);2,4,5-трихлорфенацилхлорнд (ТХФХ)1 2,4,5-трихлорфенил-хлорэтанол(ТХХФЭ).Известен способ количественного определения гардоны, основанный на его способности поглощать Уф-свет пр длине волны 250 нм 1. Недостатком способа является невозможность обнаруживать метаболиты в присутствии саба является невысокат.к. не достигается полние ТХФХ и ТХХФЭ иэ рапроб, обусловленное попри перераспределениив ацетонитрил и длителления.Целью иэобрение точности иопределения.Поставленная цель дписываемым способом ко определения гардоныитов, заключающимся влизируемой пробы диметводой, гексаном, отделванин гексанового слояфировании остатка.Отличительным приэнявляется использованияорганического раствориформамида.П р и м е р. В 4 папробы яблок по 50 г кпо 5 мкг гардоны, 2 мконы, 0,5 мкг 2,4,5на (ТХАФ), 0,5 мкг стигаетс лнчестве и его ме обработк лформами нии и уп и хромат оо г л б а иописываемомУ еской сущности тату является о определения итов, заключаюлизируемой проацетона в гекривании гексанок остатку аце-. ацетонитрилового му воды, затем аком спос в качестве теля диметил раллельных аждая вносят г цис-иэомер -трихлорацет 2,4,5-трихл гард фено гардоны.Наиболее близким кизобретению по техничи достигаемому реэульспособ количественноггардоны и его метаболщийся в обработке анабы 30-ным растворомсане, отделении и упавого слоя, добавлении. тонитрила, отделениислоя, добавлении к не тения является повышесокращение времени657339 30 4,75 Гардона Цис-иэомергардоны 5,2 87,5 1,75 4,2 72,3 0,36 0,5 ТХАФ 64,6 0,32 0,5 ТХФЭ 12,3 80,5 0,40 0,5 ТХФХ 76,4 11,7 0,38 0,5 ТХХФЭ фенилэтанола(ТХФЭ), 0,5 мкг 2,4,5-трихлорфенацилхлорида (ТХФХ) и 0,5 мкг 2,4,5-трихлорфенил-хлорэтанола(ТХХФЭ).Контролем служит проба из 50 г необработанных яблок.Мелконарезанные яблоки переносят в колбы и встряхивают со 100 мл диметилформамида (ДМФА) в течение 2 ч. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительные воронки. Растительный остаток дважды промывают дополнительными порциями ДМФА по 15 мл. Фильтруют этот экстракт к основному экстракту, В делительные воронки к диметилформамидному экстракту добавляют 100 мл дистиллированной воды, перемешивают, добавляют 40 мл н-гексана и встряхивают в течение 1 мин. После отстаивания отделяют гексановый слой в сухую чистую колбу. Экстракцию анализируемых веществ из воднодиметилформамидного слоя проводят еще дважды, используя каждый раз по 40 мл н-гексана. Гексановые экстракты объединяют, сушат над безводным сернокислым натрием, фильтруют через бумажный фильтр и упаривают гексан до 5-6 мл, используя ротационный пленочный испаритель при температуре не выше 40 оС. Переносят количественно остаток в пробир ки с делениями. Доводят объем раство ра до 10 мл. Полученный раствор используют для ГКХ определений.ГЖХ определение проводят на хроматографе "Цветс детектором постоянной скорости рекомбинации с использованием стеклянной колонки (100 см х 3 мм), заполненной хрома- тоном И-АИ-ВЫМРЯ (0,16-0,20 мм) с 5 ХЕ. Скорость газоносителя - азота особой чистоты 75 мл/мин, температура детектора 210 сС, испарителя 2100 С, скорость продувочного газа (азота осч) 150 мл/мин. Определение ТХАФ, ТХФЭ, ТХФХ и ТХХФЭ проводят при температуре колонки 145 С. определение гардоны и цис-изомера гардоны проводят при 175 С, Шкала электрометра 210 а, потенциометр КСП.Для количественного определения хроматографируют анализируемые иРезультаты определения гар стандартные растворы с известной концентрацией веществ (1 мкг/мл гардоны и цис-изомера гардоны, 0,1 мкг/млТХАФ, ТХФЭ, ТХФХ и ТХХФЭ каждого вгексане) . В колонку хроматографавводят 3-5 мкг стандартного раствора 5 для получения высоты пиков, близкойк анализируемым растворам. Проводят3-4 параллельных определения дляполучения средней высоты пика. Всеопределения проводят в присутствии 10 холостых контрольных проб экстрактовиз яблок, не содержащих анализируемых веществ. Ыа основе этих проб вводят поправку: 152 2 0где Ь - высота пика анализируемогораствора,Йо - высота пика холостой контрольной пробы,Ь - исправленная высота пика.В данном случае высота пиков холостой контрольной пробы для ТХАФи у 2 мм, ТХФЭ Й =0 мм, ТХФХ и =0 мм,ТХХФЭ Ьдср=О мм, гардона и =О мм,цис-изомер гардоны(восрСодержание препаратов в пробе (вмг/кг) вычисляют по формулеч 1 СЧпч югде Й,( - высота пика стандартногораствора (мм);Э - высота пика исправленная(мм);35 Чя и Ч- объемы стандартного ианализируемого растворов, видимыхв колонку хроматографа (мкл);С- концентрация стандартногораствора (мкг/мл);40Ч - объем экстракта анализируемой пробы (мл) 1)и- навеска яблок (кг).В настоящем способе анализа величина холостой пробы не превышает5% от минимально определяемой кон 45 центрации исследуемых веществ. Опре"деление гардоны и его 5-ти метаболи"тов из яблок с помощью описанногоспособа дает следующие результаты,приведенные в таблице.доны и его метаболитов в яблоках657339 Составитель Л.СоломенцеваТехред М. Петко Корректор А,Гриценко Редактор Л.Новожилова Заказ 1784/43 Тираж 1089 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4 НастоящИй способ определения гардоны и его метаболитов позволяет сократить время, необходимое на осуществление анализа за Счет уменьшения числа операций, а также повышает точность анализа для всех анализируемых одновременно веществ (гардоны, 5 цис -иэомера, ТХАФ, ТХФЭ, ТХФХ и ТХХФЭ) . формула изобретенияСпособ количественного определения гардоны и его метаболитов путем обработки анализируемой пробы органическим растворителем, водой и гексаном, отделением и упариванием гексанового слоя и последующим хроматографированием остатка, о т л и ч а ю15 щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, в качестве органического растворителя используют диметилформамид.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1 Новожилов К,В Петрова Т,М., Евстигнеева Г,А., Хроматографическое в тонком слое и спектрофотометрическое определение гардоны в растениях, Бюллетень ВНЗР, 1974, 929, с. 66.2. Вылегжанина Г.ф Кейсер Л.С. Определение гардоны 2,4,5-трихлорфенацилхлорида и 1-(2,4,5-трихлорфенил)-2-хлорэтанола методом газо- жидкостной хроматографии. Химия в сельском хозяйстве, 1974, 98, с.32.