Способ получения 6, 6-дифтор-11, 16, 17 -триокси -4 прегнен 3, 20-диона

щцц ЬО П И СА Н И ЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ЯАТЕНТУ п 1) 438181 Союз Советских Социалистицесюи Республик(32) Приоритет 01.02.71 (31) 111615 (ЗЗ) СШАОпубликовано 30.07.74. БюллетеньДата опубликования описания 02.01. Государственный комитет Совета Министров СССР но делам изобретений,и открытий(72) Автор изобретени Иностранец Вильям Чарльз Рипка(США) Иностранная фирма ю Пон де Немур энд Компани(61) Зависимый от патент Изобретение относится к области получения нового соединения б,б-дифтора,16 а, 17 а-триокси-прегнен,20-диона, обладающего биологической активностью, а также являющегося промежуточным в синтезе высокоактивных противовоспалительных и глюкокортикоидных стероидов.Известен способ микробиологического гидроксилирования в 11 а-положение 6-фторстероидов.Применив известную реакцию микробиологического гидроксилирования к б,б-дифтор 16 а,17 а-диокси-прегнен,20-диону, получают новое соединение, обладающее высокой физиологической активностью.В соответствии с изобретением описывается способ получения б-б-дифтора,16 а,17 атриокси-прегнен,20-диона, заключающийся в том, что б,б-дифторба,17 а-диокси-прегнен,20-дион подвергают микробиологическому гидроксилированию в 11 а-положение.По предлагаемому способу микробилогическое гидроксилирование проводят предпочтительно действием грибка рода Азрегр 11 цз или КЫкорцз п 1 дг 1 сапз. Микроорганизм, как обычно, выращивают на скошенном агаре, затем вводят в жидкую среду, содержащуюся в колбах; в колбах культура перемешивается ие нескольких дней вместе со стероисле чего стероид экстрагируется из в течсндом, посмеси.Пример.5 А. Раствор Зр-ацетокси,1 б-прегнадиенона (1) (75 г; 0,211 моль) в хлористом мети- лене (600 мл) обрабатывают фтористым нитрозилом (25 г; 0,51 моль) при 0 С, перемешивают в течение 3 час при 0 С, затем тща тельно промывают водным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, Органическую фазу сушат над Мд 504 и растворитель выпаривают, в результате получают вязкое зеленое масло. Это масло растворяют в бен золе и подают в колонну, наполненную гексаном, с насадкой, состоящей из окиси алюминия 111 степени активности (3 кг). После элюирования бензолом получают продукт (45 г; выход 55%), который кристаллизуют 0 из метанола, получая 5 а-фтор-Зр-ацетоксипрегнен,20-дион (11) (38,1; 46,5%); т, пл, 199 в 2 С.Согласно другому, предпочитаемому способу, тот же стероид (1) (125 г; 0,35 моль), 5 растворенный в хлористом метилене (500 мл),добавляют к раствору тетрафторбората нитрозила (40 г; 0,342 моль) в глиме (500 мл) при 0 С с одновременной подачей фтористого4381 3йитрозила (40 г; 0,815 моль) в смесь в течение 1 час. Смесь перемешивают 4 час при 0 С, затем выливают в холодный рассол, Органическую фазу промывают два раза рассолом, затем подвергают выпариванию в токс азота, в результате получают вязкое зеленое масло ( - 300 мл), которое смешиват с окисью алюминия (111 степень активности, 3 кг) в гексане (1 л). После перемешивания в течение 4 час продукт элюируют бензолом (8 л) из смеси окиси алюминия, получают неочищенное вещество (99 г), После иере- кристаллизации этого вещества из метанола получают стероид 11 (82,3 г), Путем хроматографии маточных растворов на флоризиле поЛучают добавочные 8,0 г продукта, т. е. общее количество 90,3 г (66/о) стероида 11.После перекристаллизации из смеси ацетона с гексаном точка плавления образца этого стероида 196 - 197,5 С.Найдено, %: С 70,41; 70,70; Н 7,58; 8,05; Р 4,81; 4,85.Вычислено для СззНз 04 Р, /оС 70,74; Н 7,99; Р 4,86.Уф-.спектр: 303 ммк (К 0,29, е 190), 237 ммк (К 22,8, е 8,580),ИК-спектр (КВг): 3,25 мк (=СН); 5,79 мк (ацетат и Се=О); 6,0 мк (С)з=Сл)Б. Раствор стероида 11 (25 г; 0,642 моль) в хлористом метилене (150 мл) и воде (6,3 мл;0,35 моль) подвергают взаимодействию с четырехфтористой серой (115 г; 1,065 моль) в течение 18 час при 10 С в запаянной трубке из сплава хейстэллой, затем смесь выливают в воду. Отделившийся органический слой промывают водным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, затем его сушат (над Мд 804) и выпаривают раствори- тель. Остаток подвергают хроматографии на флоризиле (400 г) с последующим вымыванием смесью ацетона с гексаном (3 - 5%). После перекристализации из смеси ацетона с гексаном получают 5 а,6,6-трифтор-Зр-ацетокси-прегнен-он (П) (24,0 г; 91%). Образец этого стероида после двухкратной перекристализации из смеси ацетона с гексаном имеет т. пл. 177 - 18 С.Найдено, %: С 66,76; Н 7,65; Р 13,77.Вычислено для СззНзОзРз, о/о С 66,96 Н 7,58; Р 13,82.УФ-спектр: 322 ммк (К 0,129, в 53); 237 ммк (К 23,6, е 9,720).ИК-спектр (КВг); 5,77 мк (С=О ацетата);6,0 мк (С,=О); 6,30 мк (Си=С 7).В. Раствор гидроокиси калия (8,2 г;0,147 моль) в воде (20 мл) добавили к смеси тетрагидрофурана (800 мл) и метанола (250 мл), затем смесь охлаждают до 0 С и продувают азотом. После этого добавляют раствор стероида ГП (57 г; 0,139 моль) в тетрагидрофуране (350 мл). Раствор перемешивают 1 час при 0 - 5 С, затем выливают в воду и энергично размешивают. Полученное твердое вещество отфильтровывают и сушат в вакууме, в результате получают 5 а,6,6-три 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 814фтор-окси-ирегнен-он (1 Ч) (50,2 г;98,5 о) . Образсц этого стероида подверглихроматографии на флоризиле (употребляясмесь ацетона и гексана с концентрацией 15/ов качестве растворителя для элюирования);после перекристаллизации из смеси ацетонаи гексана, получают образец для анализа,т. пл, 182 в 1 С.Найдено, /,; С 68,32, 68,46; Н 7,74, 7,82;Р 15,45, 15,40.Вычислено для СНРзОз, /о: С 68,07;Н 7,89; Р 15,38.УФ-спектр: 322 ммк (К 0,147, е 54); 237 ммк(К 25,9, е 9,580),ИК-спектр (КВг): 2,99 мк (ОН); 6,00 и6,01 мк (СО=О); 6,31 мк (С,=С 7),Г, Раствор стероида 1 Ъ (18,7 г; 0,0505 моль)в ацетоне (300 мл) обрабатывают при 0 Среактивом Джонса до устойчивой красной окраски. Одновременно следят за исчезновением исходного материала путем хроматографии в тонком слое (употребляя 5%-ную смесьэтилацетата и хлороформа и пластинки изсиликагеля). К смеси добавляют метанол дляразложения избыточного количества реактива. Смесь затем фильтруют и фильтрат концентрируют, затем разбавляют водой, Путемэкстракции хлористым метиленом получаютполутвердый остаток (5 а,6,6-трифтор-прегнен,20-дион), который подвергают хроматографии на окиси алюминия П 1 степени активности (500 г). После элюирования бензолом получают 6,6-дифтор,16-прегнадиен-З,20-дион (Ч 1) (14,0 г; 79,5%). Его образецпосле двухкратной кристаллизации из смесиацетона и гексана имеет т, пл, 118,5 - 119 С.Найдено, /,: С 72,46; Н 7,64; Р 11,13.Вычислено для СНмОзРъ: С 2,39;Н 7,52; Р 10,91.УФ-спектр: 325 ммк (К 0,23, е 80), 234 ммк(С=Сп),Д. Раствор стероида И (9,10 г; 0,026 моль)в ацетоне (253 мл) и ледяной уксусной кислоте (3,1 мл) охлаждают льдом до 3 С. Краствору добавляют сразу раствор перманганата калия (4,1 г) в 85%-ном водном растворе ацетона (195 мл; охлажденный до 3 С) .Через 4 мин смесь обрабатывают насыщенным водным сульфитом натрия (42 мл),фильтруют через силайт, а фильтрат экстрагируют хлористым метиленом. Органический экстракт промывают водой и рассоломи сушат над Мф 04. Растворитель выпаривают, затем остаток превращают в порошок вприсутствии ацетона, в результате получаютнеочищенный продукт (6 г) . После перекристаллизации из смеси ацетона и гексана получают 6,6-дифтора,1 сс-диокси-прегнен 3,20-дион (И 1) (4 г; 40,5%); т. пл. 202 -207 С; т. пл. образца, полученного трехкратной перекристаллизацией из смеси ацетона игексана, 213 в 2 С (в запаянной трубке),438181 20 Предмет изобретения Составитель Т. ИлюхинаРедактор Л, Герасимова Техред А. Камышникова Корректор В. Кочкарева Заказ 3516/17 Изд, Мо 1884 Тираж 506 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова,Найдено, /о: С 66,17, 66,59, 65,97; Н 7,43, 7,47, 7,45; Г 9,53,Вычислено для С 2 Н 2 з 04 Ез, %: С 66,95; Н 7,38; Г 9,94.УФ-спектр: 303 ммк (К 0,187, в 71), 227 ммк (К 32,8, е 12,500) .ИК-спектр (КВг): 2,94 мк (ОН); 3,25 мк (=СН); 5,88 мк (Со=О); 5,98 мк (Сз=О)Е, В каждую из шести колб (емкостью 250 мл) заливают питательный бульон, включающий соевую муку (0,5 г), декстрозу (2 г), дрожжевой экстракт (0,5 г), хлористый натрий (0,5 г), вторичный кислый фосфат калия (0,5 г) и дистиллированную воду (100 мл) (рН бульона отрегулирован на 6,5 мл концентрированной соляной кислотой). Смеси засеивают микроорганизмом Азрегр 11 цз осйгасецэ АТСС 18500. Колбы ставят на вращающийся аппарат для взбалтывания и сильно взбалтывают в течение 48 час при 29 С. Затем смеси разливают в шесть двухлитровых колб, каждая из которых содержит по 400 мл вышеописанного питательного бульона, и выращивание плесени продолжают еще 24 час при 29 С и взбалтывании смеси, После этого раствор стероида И 1 (1,0 г; 2,62 моль) в диметилформамиде (6 мл) равномерно распределяют по шести колбам и взбалтывание продолжают в течение 96 час, Комбинированные бульоны с культурами фильтруют сначала через фильтр из спекшегося стекла, затем через фильтровальный материал силайт. Фильтрат экстрагируют этилацетатом (-6 л). Органический экстракт промывают сперва водой, потом рассолом, а затем его высушивают (над Мд 804) и выпаривают в 5 атмосфере азота. Полученный остаток превращают в порошок с помощью этилацетата, в результате получают коричневый порошок (630 мг); путем хроматографии маточных растворов на силикагеле (употребляя этил ацетат в качестве растворителя для элюирования) получают добавочные 133 мг продукта. Образец продукта кристаллизуют два раза из смеси ацетона и гексана, получая 6,6-дифтора,16 а,17 а - триокси - 4 - прегнен 3,20-дион (И 11); т, пл. 203 - 208 С.ИК-спектр (КВг): 2,89 и 3,02 мк (ОН);3,25 мк (=СН); 5,87; 5,92 и 6,0 мк, связанные с С 2 о=О, Сз -- О и С 4 -- Сз. 1. Способ получения 6,6-дифтора,16 а,17 а-триокси-прегнен,20-диона, о т л и ч а ющ и й с я тем, что 6,6-дифтора,17 а-диокси 25 4-прегнен,20-дион подвергают микробиологическому гидроксилированию в 11 а-положение, и целевой продукт выделяют известнымиприемами.2. Способ по п. 1, отличающийся тем,30 что микробиологическое гидроксилированиеосуществляют с помощью грибка родаАзрегр 11 цз или КЬ 1 корцз п 1 дг 1 сапз,