Способ получения твердофазного реагента

.,.1 ОТЕг),А ЕНИЯ Б АНИЕ И ЕНТУ ИЯ ТВ Е РДОФАЗдля пеп ния ера ино ярбиоло- Е) (ОЕ) имерныхтеэе. М.: боковые одовыше бд 00 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР)(71) Орпеген МедицинишМолекулгише Форшунгсгезельшафт мбХ (О(56) Ходж П. и др, Реакции на полподложках в органическом синМир, 1983, с,432 - 433,Изобретение относится к способам получения твердофазного реагента, который содержит аллиловые боковые цепи, предназначенного для синтеза пептидов, гликопептидов или протеинов.Целью предлагаемого изобретения является получение твердофазного реагента для синтеза в твердой фазе пептидов и гликопептидов, при котором пептиды и гликопептиды могут быть отщеплены от полимерного носителя селективно и в таких мягких условиях, при которых никакого расщепления гликозидных связей или аномеризаций не происходит,Поставленная цель достигается предлагаемым способом получения твердофазного реагента, заключающимся в том; что органический полимер, содержащий аминометильные группы, обрабатывают соединением формулы: В - СВ 2 = СВ - СН 2 Х, где В - органический радикал с концевой карбоксильной группой, В и В 2 имеют одинаковые или различные значения и означают водород, алкил, а Х - гидроксил или галоге,В результате синтезируют полимер, содержащий боковые аллиловые группы, формулы(57) Использование: синтез реагента синтеза в твердой фазе пептидов, глико тидов и протеинов, Сущность изобрете взаимодействие органического полим содержащего радикалы с концевыми ам метильными группами с соединением мул ы 8 С В 2-СВ 1-СН 2-СН 2 Х, гд е В 2 органический радикал с концевой кар сильной группой, В 1 и В 2 имеют одинак или различные значения и означают в род, алкил; Х - гидроксил или галоген. В - СН 2 Х/и,В 2 иХимеют казанны где Вз - спейсер, В 1, у езначения,С использованием синтезированного реагента осуществляют синтез незащищенных или частично защищенных пептидов, гликопептидов, нуклеотидов, гидроксикарбоновох кислот, бикарбоновых кислот или трикарбоновых кислот, .Вследствие исключительно мягких условий отщепления по изобретению возможно селективно отщеплять пептиды, нуклеотиды и другие остатки, беэ разрыва гликозидных связей или аномериэиции, или изомеризации,Твердофазный реагент по изобретению можно использовать также в качестве твердой фазы в других технологиях в твердой фазе, например, для синтеза олигонуклеотидов, которые при необходимости могут быть дополнительно нарощены энзимным путем, например, до определенных последовательной ДНК, для последовательного анализа, а также при реакциях, при которых энзимы, каталитически действующие кислоты Льюиса, редоксинные системы и тому подо1838329 6 н,2535 бное за счет иммобилизации в результате адсорбции, полимеризации, пробкообразования и т,п. приводятся к твердому виду, что облегчает дозировку; дальнейшую обработку и отделение продуктов реакции.Синтез полимерных носителей с аллиловыми анкерными группами,Для синтеза полимеров общей формулы 1 с боковыми цепочками, которые несут аллиловые группы, можно использовать, например, хлорметилированный полистирол, который с помощью фталимид-калия через производные фталоиламида переводят в аминометил полистирол.Аминометилированный полистирол превращают в соединение общей формулы 1, при реакции с соединениями ацила и алкила, которые имеют терминальную группу аллил-галогенида, сложного эфира или спирта, например, с 4-бромкротоновой кислотой, в присутствии дициклогексилкарбодиимида (ОСС) и 4-диметиламинопиридина (ОМАР). Вместо бромкротоновой кислоты можно использовать более длинноцепочечные замещенные аллилом алкенкарбоновые кислоты, например, с формулой Х-СН 2-СН=СН(СН 2 к-СООН, где Х - является бромом, а к - например, равен 0 или 7,Для иллюстрации изобретения приведены следующие примеры.П р и м е р 1. 2 г аминометилированного полистирола (0,8 мэквив. МН 2/г смолы) в 40 мл абсолютного метиленхлорида перемешивают при комнатной температуре в течение около 16 часов с й-Вг-ундеценовой кислотой (6 ммоль) в присутствии дициклогексилкарбомида (ОСС) (7,5 ммоль) и (4-диметиламинопиридана (ОМАР) (1,65 ммоль). При этом согласно приведенному ниже уравнению реакций получают твердую фазу с аллильной боковой цепью, После отфильтровывания продукта реакции последний промывают метиленхлоридом, метанолом, диметилформамидом и еще раз метиленхлоридом, после чего проводят сушку в высоком вакууме при температуре 30 С. бнСн . О Снгинг+зСнг бн=ФСи, -сн, -с 00 н - сн- лайна 10СНВ 1-сн,-кнео-ен,)-сн: сн27 П р и м е р 2. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но только с тем отличием, что вместо й-бром-ундеценовой кислоты применяют 4-хлоркротоновую кислоту П р и м е р 3, Способ осуществляют всоответствии с примером 1., но с тем отличи ем, что вместо й-бром-ундеценовой кислоты применяют 4-гидроксикротоновую кислоту, 4-гидроксикротоновую кислоту в форме третичного бутилового эфира, который получают из 4-бромкротоновой кислоты 45 при помощи трет.бутилата калия. Сн О Сн,вн,+ СнС 0 Сн,-бн= Ф55=сн - вон - сн ОЗМВМДР1838329 Формула изобретения Составитель Г. Русских Редактор В, Трубченко Техред М.Моргентал Корректор Т. ВашковичЗаказ 2901 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитента по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 45 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. ужгород, ул,Гагарина. 101 П р и м е р 4. Синтез активированного или способного к активации полимерного носителя с аллиловыми анкерными группами,й-(4-бромкротоноил)-аминометилполистирол 52 г аминометилполистирола (0,8 моля эквив. ЙН 2) г смолы размешивают в 40 мл абсолютного дихлорметана с 1,02 г (6,2 милимоля) 4-бромкротоновой кислоты, 0,2 г (1,65 миллимоля) 4-диметиламинпиридина и 1,53 г 7,5 ммоля) й,й-дициклогексилкарбодиимида в течение 12 часов при комнатной температуре; Затем полимер отфильтровывают, промывают дихлорметаном, метанолом, диметилформамидом и снова дихлорметаном и сушат под высоким вакуумом при 30 С. Способ получения твердофазного реагента взаимодействием органического пол 5 имера, содержащего радикалы с концевымиаминометильными группами, с органическим соединением, взаимодействующим суказанными группами, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью улучшения технологии син 10 теза пептидов с использованием реагента,в качестве органического соединения используют соединение общей формул ыВ - СВ 2 = СВ 1 - СН 2 Х,где В - органический радикал с концевой15 карбоксильной группой;Й 1 и К 2 - одинаковые или различныезначения и означают водород, алкил;Х - гидроксил или галоген,