Способ отбора высокобелковых форм люпина узколистного

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК А 377 Н 1/04 1)5 пАтентнО сс ЕНТ СССР., э 3 М,;Щ.,1 ЕЯМЩ" 3 ,-, .в "в 10 ЕНИЕ ОБРЕТЕНИЯ АТЕ К(54) СПОСОБ ОТБОРА ВЫСОКОБЕЛКОВЫ ФОРМ Л 1 ОПИНА УЗКОЛИСТНОГО (57) Использование: сельское хозяйство, растениеводство, луговодство, селекция, биохимическая генетика. Сущность изобретения: высокобелковые формы люпина уэко- листного отбирают и идентифицируют по наличию в их белковом спектре ярко выраженных компонентов с ОЭП 0,4, при этом отработана специфическая методика электрофоретического разделения белков, 1 табл., 1 фиг,(21 32иментальной б(72 ко, (73 им (56 абр отаники на. М.: охимии Биохимия люп, с. 23-28.актикум по б 976, с. 3-7,акриламидном геле и отбирают образцы,имеющие ярко выраженную зону при ОЭП04 сти сель- охимичеи может и отборе олистноИзо ох ря укаэанным новым признакам го решения полвляются новые совпадающие со свойством изшения, в результате чего возстижение более высокой ти отбора за сче 1 возможности енного выделения форм люпиого с генетически обусловленысоким содержанием белка. осуществляется следующим оббы ь вы о го. Цель изобретения - повышение эффекности отбора за счет возможности целеравленного выделения форм люпина олистного С генетически обусловленным ее высоким содержанием белка.Предлагаемый способ отбора высококовых форм люпина узколистного имеет знаки, сходные с признаками, присутстщими у прототипа, эаключающи ьчении семян и определени ержания белка.У заявляемого решения появляются но- , отличные от известного решения приаключающиеся в том, что из муки кстрагируют белки, осаждают их, а йсл в надосадочной жидкости частипроводят электрофорез в 15 оо полина уэколис ным болееСпосо разом. еся в изи у них Семена люпмуки экстрагируюнии 1:20, центрифтечение 20 мин.осаждают белки икие значения рНния балластныхзначения рН нежэакисления раста ьчают, навеску аС в соотноше ри 11-12000 9 очной жидкости,О, Более высо 4олногэ осажде Более низки из-за сильног ющего проведе зн ки,з се лн э осккэвше бекое 5006109/1301,07,9130.08,93, Бюл,Институт эксперВ.Ф. Купревича В,И. Домаш, О.ВН.С. Купцов и Т.П Институт экспер В.ф, Купревича Мироненко А.В,ка и техника, 197 Плешков Б,П. Птений. М.: Колос,бретение относится к обла озяйства, в частности к би налиэам белков растений, пользовано в селекции пр белковых форм людина узк Благода у заявляемо свойства, не вестного ре можно до эффективно целенаправл т вина измел т 02 М й угируют и В надосад ри рН 3,8 -не дают и бел ко в. елательны ора, меша( Их 6,25 он 35,3 35,8 8 9 11 15 17 30,31,35,34 нию электрофореза, Надосадочную кидкость снова центрифугируют и используютдля электрофореза в 157,;-вом полиэкрилэмидном геле. Используют 0,05 М трис-глициновый буфер, рН 8,3, Злектрофооезпроводлт в плоском геле при силе тока 2030 мА на пластинку и напряжения 250 В.Электрофорез проводят 1.5 ч. Зэтегл гельфиксируют 20;4 ТХУ в течение часа и п ромывэют водой. Окраску проводят кумасси 6 -2500, 0,2% раствором в смеси этанол: уксусная кислота; вода в соотношении 1:1:2 втечение 1,5 ч. Краску отмывают 10,-нойуксусной кислотой,Анализируют электрофореграммы и отбирэют образцы, которые имеют ярко выраженную зону г 1 ри ОЗП 0,4 (см.чертеж),П р и м е р, В опыте использовали семена 14 сортообразцов люпинэ узколистного,различа ощихся по содержани 1 о белка, которое определяли известным способом (М х6,25).Берут навеску муки семян люпина узколистного и экстрагируют белки 0,2 У ИаС всоотношении мука; 0,2 ЬЛ йаС 1;20 в течение 3 ч при 4"С, Затем экстракт центрифугируют при 11 - 12000 д в течение 20 мин. Внадосадочной жидкости осаждают основную массу запасных белков при рН 3,8-4,0,После 1,5-2 ч образования осадка его центрифугируют, а оставшиесл и надосадочнойжидкости бел,и используют для злектрофореза. Злектрофорез проводят в пластинках15 О ПААГ. В ячейку геля наносят вытяжку вколичестве 0,04 мл, Используьт трис-глициновый буфер рН 8,3. Электрофорез проводят при силе тока 20 - 30 мА на пластинку инапряжении 250 В, Проводят электрофорез1,5 ч, Затем гель фиксируют 200 ТХУ в течение часа и промывают дистиллированной 40водой, Окраску проводят кумасси 6-250,0,2),-ным раствором в смеси этанол; уксусная кислота; вода в соотношении 1:1;2 в течение 1,5 ч, После окрашиванил гель промывают водой и отмывают краситель 10- ной уксусной кислотой. При анализе электрофорегрэглм выделяот образцы, которые имеют лрко выраженную зону при ОЭГ 0,4, взаимосвязанную с более высоким содержанием белка,В таблице представлены результаты определенил содержания белка и анализ электрофорегрэмм различных сортообразцов лапина.Использование предложенного способа о-борэ высокобелковых форм люпина узколистного обеспечивает ускорение процесса за счет целенаправленного выделения форм люпина с генетически обусловленным более высоким содерканием белка. Этим способом одному человеку можно проанализировать свыше 20 образцов в течение рабочего днл, Кроме того, данный способ дает возможность использовать длл анализа семена с одного растения, что очень важно для селекционеров, а ие сеглеиа с разных растеий для образования средней пробы, как это требуется в известном способе,Форглулэ изобретения Способ отбора высокобелковых форм люпина узкалистного, включающий измельчеиие семян, определение содержэнил белка и отбор высокобелковых образцов. о тл и ч э ю щ и й с л тем, что определение содерканил белка проводят путем зкстрэкции измельченных семян солевым раствором, центрифугированил надосадочной жи ц кости, оса яде нил балласт вых за па" н ых белков при рН 3,8 - 4,0 и электрофореза полученной вытяжки с последующим анализом полученных белковых спектров и отбор ведут по наличию в спектрах ярко выраженных компонентов с ОЭП 0,4,8 З 77 Бг Продолжение таблицы сортообразцы У 8 "4сортообразцы