Способ моделирования холерной инфекции

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 19 5 ц 5 0 09 В 23/28Г ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ ксперименбыть при- кишечных ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Днепропетровский медицинский институт и Ростовский научно-исследовательскийпротивочумный институт(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХОЛЕРНОЙ ИНФЕКЦИИ(57) Изобретение относится к экспериментальной микробиологии и может быть применено при моделировании кишечныхинфекций. Цель изобретения - приближение к клиническому течению за счет удлинения процесса, Предложенный способмоделирования заключается в том, чтовзрослым линейным и беспородным мышампроводили предварительную обработку жеИзобретение относится к этальной микробиологии и можетменено при моделированииинфекций.Цель изобретения - приближение к кли ническому течению за счет удлинения процесса.Способ осуществляют следующим образом. Взрослым мышам весом 16-18 г (линии ВА 1 В/с и беспородным) обоего пола, изолированным друг от друга и лишенным пищи на сутки, проводят ощелачивание желудка и лудочно-кишечного тракта путем внутрижелудочного введения (по 0,5 мл на каждое введение) 3-4-ного содового раствора йа 2 СОз за 5 ч и 1 ч до заражения. Непосредственно перед заражением в прямую кишку вводили тугой ватный тампон и прас ранство между тампоном и анальным отверстием заполняли медицинским клеем. Холерные вибрионы вводили внутрижелудочко в дозе 10 -10 в 0,25 мл 3-4-ного содового раство 2 бра. За животным наблюдали в течение 3 сут, Критериями оценки развития инфекции служили количество павших животных, сроки их гибели, наличие и степень выраженности холерогенного эффекта (по коэффициенту накопления жидкости в кишечнике, ее характеру и количеству вибрионов в содержимом кишечника). Авторами впервые была создана высокочувствительная стойкая и легко воспроизводимая модель холерной инфекции. Способ прост в исполнении, не требует специальной подготовки,тонкого кишечника раствором пищевой соды,Непосредственно перед заражением в ректальный канал вводят ватный тампон на глубину до 5 мм и пространство между тампоном и анальным отверстием заполняют медицинским клеем.Взвесь вибрионов вводят внутрижелудочно с помощью зонда в 3-4;ь содовом растворе в объеме 0,5 мл, как указывалось выше. Заражающая доза варьировала от 10 до 10 живых клеток, Был использован штамм холерного вибриона Ч. е 1 ог 5879.5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 За животными наблюдали 72 ч, по истечении которых оставшихся в живых мышей забивают;Всех павших и забитых животных вскрывают, Критерием развития специфического инфекционного процесса были: количество павших животных и сроки их гибели, наличие и степень выраженности холерогенного эффекта (по коэффициенту накопления жидкости в кишечнике, ее характеру и количеству вибрионов в содержимом кишечника).Способ подтверждается следующим примером,П ри м е р 1. Мышь весом 18 г линии ВА 1 В/с изолируют в клетке, конструкция которой исключает возможность копрофагии, и на сутки лишают пищи, но не воды, За 5 ч до заражения животному внутрижелудочно с помощью металлического зонда с напаянным наконечником из олова размером 1,5-2 мм (для предупреждения механического травмирования), соединенного с дозированным шприцем, ввели 0,5 мл Зо,- ного раствора бикарбоната натрия, Повторное и аналогичное введение содового раствора производят за 1 ч до заражения, Непоредственно перед заражением животному е анальное отверстие на глубину 5 мм вводят плотный ватный тампон диаметоом 2-3 мм. Пространство между тампоном и банальным отверстием заполняют дозированно (0,1-0,2 мл) медицинским клеем с помощью шприца или резиновой груши, соединенных с пластмассовым наконечником,Культуру вирулентного штамма холерных вибрионов (е юг, 5879) готовили по методике, 18-часовую культуру, выращенную при 20-22 С, отсевали в пробирку с 1/О пептоннои водои и через 4 ч инкубации прио37 С еысевэют на влажную пластинку щелочного агара, Посевы выдерживают при комнатной температуре 18 ч, Из выросшей культуры петлей готовят взвесь в 3,(,-ном растворе пищевой соды йа 2 СОз) и доводили до концентрации 4 10 по стандаоту мутности ОСО "20 ед", а затем последовательно десятикратными разведениями в указанном содовом растворе доводят до концентрации 4 10, 4 10, 4 10, 4 10 и 4 10" м,к./мл, Из каждого указанного разведения берут для заражения 0,25 мл взвеси, в которых соответственно содержалось 10, 10, 10, 10 и 10 м.к,/мл, Из последней пробирки (4 10 )2делают высев по 0,1 мл на две чашки со щелочным агаром для определения количества жизнеспособных клеток,Для заражения использовали свеже- приготовленные взвеси,Заражение проводят внутрижелудочно по описанной методике, В течение последующих часов наблюдения животное не получало пищи, но не было лишено воды, Мышь пала на третьи сутки после заражения при явлениях гипотермии, гиподинамии, усиленном диурезе, судорогах, При вскрытии подкожная клетчатка сухая, тусклая, кишечник вздут, растянут, заполнен серозной прозрачной жидкостью, Коэффициент накопления жидкости определяют по формуле:К = --1000; К1000 =1111,8В - А1,8 г - 1,8где А - вес тонкого кишечника с накопившейся жидкостью в граммах;В - вес тела животного,Значение коэффициента 111 подтвердило специфичность развившегося инфекционного процесса, При бактериологическом исследовании содержимого тонкого кишечника количество живых клеток вибриона достигало 2 10, что свидетельствовало об интенсивном размножении возбудителя, Приведенные данные подтверждали специфичность развившегося инфекционноо процесса.Таким образом, приведенные примеры показывают, что авторами впервые создана высокочувствительная стойкая и легко воспроизводимая модель холерной инфекции на доступных и удобных лабораторных жимотных - взрослых мышах. Положительный эффект достигался принципиально новой методикой опечатывания: в прямую кишку вводили тугой ватный тампон и пространство между тампоном и анальным отверстием заполняли медицинским клеем. Это позволило стабильно сохранять состояние опечатывания в течение 72 ч,. Т ем самым обеспечивался необходимый контакт вибрионов со слизистой кишечника как важное условие развития инфекции,Высокая чувствительность модели позволяет использовать ее для определения наличия и степени вирулентности холерных вибрионов.Сравнительно длительный срок наблюдения за животными делал модель пригодной для изучения инфекционного процесса в динамике. Формула изобретения Способ моделирования холерной инфекции, включающий предварительную обработку желудочно-кишечного тракта и обтурацию анального отверстия экспериментального животного, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью приближения к клиническому течению за счет удлинения процесса,1674217 Составитель А, ЛычковаТехред М.Моргентал Корректор Э Лончакова Редактор Н. Химчук Заказ 2927 Тираж 284 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж. Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 предварительную обработку желудочно-кишечного тракта осуществляют путем внутрижелудочного введения 3-4-ного содового раствора за 5 и 1 ч до заражения по 0,5 мл, тампонируют и обтурируют прямую кишку с последующим внутрижелудочным введением холерного вибриона в дозе 10-10" живых клеток.5