Способ выделения чистых культур холерных вибрионов

) 545673 Союз Советских Соььиалнстическнк Реслублик(22) Заявлено 06.12.72 (21) 1854202/13с присоединением заявкисУдаРственный комитет (23) Приоритет осета Министров СССРпо делам изобретений 53) УДК 576.8,093,1(088.8) публиковано 05.02.77, Бюллетень5 ата опубликования описания 02.03.7771 Заявитель Б ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ 54) СПО Изобретение относится к медицинской мпкробиолопьи, оно может быть использовано в лабораториях, занятых бактериологической диагностикой заболеваний, вызванных холерными вибрионами, выявлением холерных вибрионсносителей среди здорового населения, исследованием на зараженность холерой воды, пищевых продуктов п других объектов внешней среды.При всяком бактериологическом исследовании на наличие холерного вибриона основной задачей является выделение этого микроба в чистой культуре. Это вызвано тем, что во всех материалах, доставляемых в лаборатории для анализа, содержится многообразная посторонняя микробная флора, в смеси с которой возбудитсль холеры, если он там имеется, не может быть идентифицирован,я чистых кульзличных матео осуществляют а поверхность рионов плотной ванне микроорбразн полу едующую трубкужид.уьо агаего составаая диаметр оно-же(в г): 00,0 - 0,3 ,0 0 вань тел ь ьь ый и трустью повторных жидкие и на 05 ый вор) 2 мл Известныи способ выделенитур холерных вибрионов из рариалов заключается в том, чтпосев исходного материала нэлективной для холерных вибпитательной среды и инкубирогаиизмов на этой среде 11.Известный способ весь; а длдоемкий в связи с необходимопересевов ььз жидких сред вплотные среды. С целью устранения указанных недостатков предлагается посев осуществлять на полужидкую среду лоалпзованно относительно поверхности, на которой возможен рост холерного вибриона, или относительно обьема среды, в котором возможен рост холерного висрнона,Предложенный способ основан на высокой естественной подвижности холерных вибрионов. Возбудители холеры относятся к числу наиболее подвижных бактерий, в результате чего в соответствующих условиях они значительно опережают другие виды бактерий при размножении на поверхности и в толще полу- жидких агарово-желатиновых сред. Таким образом, на границе роста бактерий и еще не заселенной бактериями среды холерные вибрионы могут быть изолированы (высеяны) в чистой культуре. 20Пример. В 1.1-ором 12 мм заливаютлатиновую среду слВода дистпллпр25 Агар Дифко545671 Формула изобретения Составитель В. Ключников Тсхрсд В. Рыбакова Редактор Л, Ушакова Корректор А. Галахова Заказ 233,2 Изд. Ме 400 Тираж 89 11 олииснос ЦИИИПИ Государственного когаитета Сове а .11 иипстров СССР по делагп изобретешгй и открытий 113035, Москва, Ж, 1 аушс: ан иаб., и. 4,5(1%-ный раствор) 0,5 млСахароза 1,0 (рН среды 8,5 - 8,7)Среду заливают в стерильные трубки так, чтобы высота столбика среды в каждом колене пе превышала 35 - 40 мл. Оба колена трубки закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве при 112 С в течение 20 мпн, Одновременно с этим в чашки Петри разливают по 17 - 20 мл среды, состав которой отличается от приведенного выше только тем, что агара Дифко берут 0,3 - 0,4 г, 1/в-ного раствора борной кислоты 5 мл на 100 мл среды.В обеих средах борная кислота может быть заменена таурохолатом натрия или дезоксихолатом натрия в концентрации 0,3 - 0,5 по весу. Любой материал от обследуемых лиц: испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, желчь и т. п., собранный в 1 о/о-ную щелочную пептонную воду пли другой консервант и доставленный в лабораторшо, засевают пастеровской пипеткой в одно колено 11-образной трубки и на центр чашки Петри в количестве 0,05 - 0,1 мл, дают впитаться жидкости в среду и помещают в термостат прп 37 С. Просмотр трубок и чашек производят, начиная с 10 час пнкубации и позже - до 22 - 24 час, В этот период холерные вибрионы, размножаясь, продвигаются по питательной среде и при этом значительно опережают другие подвижные бактерии. За 12 - 1 б час роста в термостате все штампы холер- ных вибрионов успевают продвинуться в трубках на 50 - б 0 мм, а на чашках образуют макроколопии диаметром 45 - 50 мм.Прп этом на границе роста и в трубке и па чашке вибрионы находятся в чистой культуре. Границу подвижного роста легко определяют по измененшо синего цвета среды па оранжево-желтый, так как холерные вибрионы в пооцессе жизнедеятельности ферментируют сахарозу и образующаяся при этом кислота изменяет цвет индикатора,Чистую культуру вибриона для рассева, ис иытания фермептной активности, испытания сфагами и агглютинации получают из противоположного засеянному колена трубки плп с периферического края макроколонии на чашке Петри, Дублированный посев на чашку и в 10 трубку значительно увеличивает надежностьспособа.Предварительный положительный резуль.тат при исследовании с использованием предлагаемого способа может быть получен у;ке 15 через 14 - 1 б час, а окончательный результат - через 20 - 24 час после доставки материала в лабораторию.Предлагаемый способ позволяет сократитьв 2,5 - 3 раза трудовые и материальные затра ты прп сохранении эффективности бактериологического исследования. 25 Способ выделения чистых культур холерных вибрионов из различных материалов, включающий посев исходного материала на элективпую для холерных вибрионов питательну 1 о среду и инкубирование микроорга нпзмов на этой среде, отличающийсятем, что, с целью сокращения сроковвыделеппя холерных вибрионов и упрощения способа, посев осуществляют на полужидкую среду локалпзованно относительно поверхности, на 35 которой возможен рост холерного вибриона,пли относительно объема среды, в котором возможен рост холерного вибриона.Источники информации, принятые во внимание прп экспертизе:40 1. Е. И, Коробкова Микробиология и эпп.демпология холеры, М, Медгиз, 1959, с. 18 - 180 (и рототи и) .