Способ получения мутантов холерных вибрионов

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕДЬСТВУ Союз Советских Социалистических Реслублнк(22) Заявлено 080678 (2 ) 26 47760/28-13с присоединением эаявки Йо(51) м. кл. С 12 К 1/00 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МУТАНТОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ Изобретение относится к области медицины, а именно микробиологии.Известен способ получения мутантов холерных вибрионов путем выращивания исходной культуры в жидкой питательной среде, приготовления микробной суспензии, обработкой ее нитрозометилмочевиной, пересевом на плотную питательную среду и отбором колоний мутантов 1) .Однако известный способ является довольно сложным,Целью изобретения является упрощение отбора мутантов.эта цель достигается тем, что сус пензию обрабатывают нитрозометилмочевиной в концентрации 0,1 - 0,5 мг/мп и отбирают мутанты по коричневой окраске колоний.Способ осуществляется следующим , 20 образом.Засевают петлю суточной агаровой культуры холерного вибриона в 5 мл дрожжевого бульона.После двукратного отмывания 1-суточной бульонной культуры физиологическим раствором к осадку добавляют 1 мл его. В 0,1 мг/мл НММ вносят 0,1 мп отмытой культуры холерного вибриона. Раствор нитрозометилмоче вины готовят путем добавления 1 мг НММ в 1 мл физиологического раствора.0,1 мл препарата переносят в 0,9 мл Физиологического раствора, в который добавляют 0,1 мл культуры. После контакта с препаратом в течение 15 минут производят высев на питательную среду следующего состава (г/л):экстракт дрожжевой (аминный азот30 мг В) - .10,0пелтон Мартека (соотношение 1:1 кобъему дрожжевого экстракта) - 5,0агар Корсаковский - 20,0Посевы выращивают при 37 и наблюо дают за образованием пигментных колоний 10 сут, Пигментную колонию пересевают на чашку с агаром. Череэ 1 - 2 сут выращивания газон выросшей культуры приобретает шоколадный цвет. Селекционированные этим способом мутанты стойко сохраняют способность образовывать пигмент.Способ иллюстрируется следующим примером.1 мг нитроэометилмочевины растворяют в 1 мл физиологического раствора. 0,1 мл препарата переносят в 0,9 мл физиологического раствора, в который, добавляют 0,1 мп ЧТЬг 1 ое 1 согШтамм готовят путем посева 1704180 формула изобретения Составитель Е.Дубовицкая Редактор Л.Гольдина Техред Т. Маточка Корректор М.ПожоЛйАФб ы.ФьЪЬ с;,Вв.сЮм Заказ 57 б 9/40 Тираж 528 Подписное ВНИИПИ Государственного ксмитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 2 УЮ-". в :д-К: в - -д"-"-4";Ге;а;"-" ;тШЮ- - тММтащтев филиал ППП Патент , г, Ужгород, ул.Проектная, 4петли суточной агаровои культуры в пробиркУ с 5 мл бульона. Через сутки выращивания при 37 центрифугируюти удаляют надосадочную жидкость. К осадку добавляют по 5 мл физраствора и отмывают центрифугированием дважды, удаляя недостаточную жидкость, Затем к осадку добавляют 1,мл того же раствора. Смесь НММ с культурой холерных вибрионов помещают в термо стат на 15 мин, при 37 , Затем 0,1 пробы переносят в 10 мл бульона и пс 0,5 мл последовательно раститровывают в шести пробирках с 4,5 млбульо- на. Иэ каждой пробирки высевают по 0,1 мп на 3 чашки с агаром для получения изолированных колоний. Через сутки- проводят повторное титрование культуры из всех пробирок по 0,5 мл и высевают на 3 чашки с агаром по 0,1 мп из 5, б, 7 пробирок. Все посевы сохраняют при 37 фС в течение 10 суток, Колонии коричневого цвета пе ресевают на чашку с агаром и через 1 - 2 сут. выращивания газон культуры имеет шоколадный цветОстальные свойства пигментной культуры Ч 1 Ьг 1 ое 11 ог 381 П не отличаются от исходного штамма,Использование изобретения позволитупростить отбор мутантов холерных вибрионов при проведении генетическихисследов аний,Способ получения мутантов холерных вибрионов путем выращивания ис модной культуры в жидкой питательнойсреде, приготовления микробной суспензии обработкой ее нитрозометилмочевиной, пересевом на плотную пита 15 тельную среду и отбором колоний мутантов, о т л и ч а ю щ ий с я тем,что, с целью упрощения отбора мутантов, суспенэию обрабатывают нитроэометилмочевиной в концентрации 0;1Щ 0,5 мг/мп и отбирают мутанты по ко-ричневой окраске колоний.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Проблемы особо опасных инфекций, 1972, в, 4(26), стр; 95-99,