Способ получения биологически активных мукополисахаридов

(9 31859 08 В 37/ ОПИСАН ОБРЕТЕНИЯ АТЕНТУ 23-052/00069 (09.04.82) ит кл, С 08 (54) СПО АКТИВНЫХ (57) Изо КИ лу 51,8 г нитрита го в 30 мл дис (0,05 М), и с мощью чистойТогда проис енн натрия, растн тиллированной нижают рН до 2 соляной кислоть Изобретение относится к получению биологически активных мукополисахаридов, способных специфически управлять некоторыми этапами свертывания крови и проявляющих более селективную, чем гепарин, активность по отношению к более ограниченному количеству факторов свертывания крови, например к активиронанному фактору Х или фактору Ха крови, может быть использовано в биологии и медицине.Целью изобретения является повышеие выхода биологически активных мукополисахаридов при упрощении спосоодь с п за одит реакция, Чят до устано ктокислых ио ения в. Ч ом котороитсутстния ов в реакользуют одя про мин реностью й смесиТогда тистокислых ио тств его исп у, пров Через 6 ионнои сред одкрахмальнерку каждые бума мин. н ции азотистая кис н реакцион расходуется,не остается б онов ш В 15 л20 С ра10%-ный13 БР около60 ц 1 Лоб дистиллиростноряют раствор) с 1 и с титПримерванной воды при1500 г гепаринасоотцошццием Б 1ром БР, равным помощью дукты рем добавле водят натри значение рН д чистой щелочи акции выделяю ния 31 л чист я, а пр средств анола ( ся по го эт объема). яют ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР(72) Жан-Клод Лормо, Морис Пи Жан Шоай (ЕР )(56) Патент СССР Р 1209033,В 37/1 О, 1979,СОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧМУКОПОЛИСАХАРИДОВбретение относится к нию биологически активных мукополисахаридон деполимеризацией гепарина,применяемых н биологии и медицине.Изобретение позволяет повысить выход целевого продукта до 80% и упростить способ его получения, Деполимеризацию гепарина осуществляют вводной среде цри концентрации гепарина 8-12 мас.7, и температуре 15-20 Св присутствии в реакционной среде0,03-0,07 моль цитрита натрия. Предварительно вводят н реакционную смесьсоляцую кислоту до рН 2,5-2,95, айо окончации деполимеризации доводятрН реакционной смеси до 7 и осаждаютцеленой продукт. 1 табл. рез 40 мин определяют через равные промежутки времени наличие или от 1531859(М 1 С) со следующими характеристиками:Титр ББР 19 цг./мгТитр АРТТ 3 м/мгТитр Тп и Ыевз 1 ег 202 ц/мгСодержание нитритов/10нитратов с 4 м.д.Молекулярная масса полученногопродукта 2000-8000, Содержание цепей,имеющих сродство к АТ 111, составляет207. Выход продукта 807., Продукт содержит 37 цепей гексасахаридов, 27тетрасахаридов, 07 дисахаридов.П р и м е р 2. Проводя процесс пометодике примера 1, исходя из 107.ного раствора гепарина (100 г/л), получают М 1 С с соотношениями г/ЗР, взависимости от концентрации введенного в реакцию МаИО . Результаты приведены в таблице,25Предпочтительные МПС соответствуют МПС, полученным с использованием0,03-0,07 М НаоМолекулярная масса и выход получаемого продукта аналогичны примеру 1.П р и м е р 3. В 10 л дистиллиро 30ванной воды при температуре окружающей среды (15 С) растворяют 1000 ггодного для инъекций гепарина с титром ЦВР 170 пд/мг и с титром У160 ц/мг. Добавляют 38 г нитрита натрия (конечная молярная концентрация0,055 М), растворенного в 200 мл воды. Значение рН сразу снижают до 2,5,используя чистую соляную кислоту,Реакцию контролируют, как впримере 1,через регулярные промежутки времени(5-10 мин). Примерно через 30 мин ионы Ю болг.пге в реакционной средене обнаруживаются. Тогда значение рНдоводят до 7 с помощью раствора 545едкого патра; продукты реакции выделяют путем добавления 21 л чистогоэтанола (2 объема). Образовавшийсяостаток отделяют центриугирсванием,промывают этднолом и высушивают в 50овакууме ггри 60 С. Выход продукта 807.;Пслучггнгт 780 г порошка белого цвета со следунгпигги характеристиками:Титр ОВГ 22 ц 1/мгТитр ггл и Иеяз 1 ег 260 ц/мг 55Титр ЛРТ 1 10 цг /мгСодер,канне нптритсвдитрдэ ) м.д,Средний молекулярный нес менее 6000,Процентное содержание вещества с молекулярным весом, превосходящим 10000, менее 17П р и м е р 4. Используют реакционную смесь, содержащую в 125 мл дистиллированную воду, 10 г гепарина (8 мас.%) и 380 мг (0,055 М) нитрита натрия. рН снижают до 2,95 за счет добавления чистой соляной кислотыи смесь перемешивают в течение примерно 45 минПолучают продукт деполимеризации с выходом 807 титра 5 Р 34 цг на мг и У 219 ед. на мг.П р и м е р 5. Осуществляют аналогично примеру 4, но используют 15 г гепаринд (12,0 мас,7,), Получают деполимеризованную смесь с аналогичными характеристиками полученных продуктон;ЮР 32 м.е./мг.г 1 226 ед./мг.Выход продукта 807.Изобретение позволяет получить1 биологически активные мукополисахариды с выходом 807. при содержании реактивных целей с 6,4 и 2 звеньями сахдрд до 57. (707 по известному способу) и цепей, имеющих сродство к АТ 111до 20% (27 по известному способу),Упрощение способа по сравнению с известным обусловлено снижением числастадггй и отсутствием контроггя запродолжительно тьн реакции деполимеризации, уменьшением объемов реакционной среды, благодаря повьпиеннойконцентрации гепдрпнд (8-12 мдс.7. посравнению с 3,3 мас.7.),Формула и з о б р е т е н и я Способ получения биологически активных мукополисдхаридов деполимериздцией гепаринд в водггой среде в присутствии продукта, образующего азотистую кислоту, с последующим осаждением мукополисдхдридов этиловым спиртом, о т л и ч а н щ и й с я тем, что, с целью повьппения выхода биологически активных мукополисдхаридов прн упрощении способа, в качестве продукта, образунгщего азотистую кислоту, ислольэунт нитрит натрия при концентрации его г реакционной среде О, 03-0,07 м чь и лс поли.ьзриздцггюсуцег гнлянгг после введения в реакцисивуюме ь соггян гй ки .г с г ы ло соз -5 1531859 6дания рН 2,5-2,95 при концентрации туре 15-20 ОС, при этом перед осакгепарина 8,0-12,0 мас.й и темпера- дением доводят рН среды до 7. Концентрация, ИаИО, М Отношение титров УУ Величина соотношенияк титрам 1 БР МПС титров Составитель О.Рокачевская Редактор В.Бугренкова Техред М.Ходанич Корректор О.Иипле Заказ 7969/58 Тирах 411 ПодписноеВН 1611 П 1 Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГЕНТ (;С113035, Москва, Ж, Раущская наб., д. 4/5 Иропзцолственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,1 0,03 0,04 0,05 0,05 0,07 0,08 0,1