Способ определения фосфолипидов в крови при массовых обследованиях

(72) и А, (53) (56) прим чен ногих в те боди ют и есяцевая фильза проб,м сво цине еле- ови л обреза разрезан 1 е от крови к выбрасынают,на мелкие кусирки и залива н про ки, пом 1,5 мл ег 1 ают 03 1, т очвора и 0,5уют с ной к кого на у ки. 1 е 1 е ва 1 п 11 зераастнорл х г плотно О Гдо гех ут мл щело 1 мл 5 ного смь,-ного р пробирка и при 18 ли ислоты в и пробкл ерты пок злт не и но-желты,обретет крис галт добанляпор минерлли или блея д белых в (:5-6 ч). К ми 7-ногс рл ты и 0,.1 нерллиза Г Г 1 Г Ра Л х норбин ЕНОЯО 1 ю ой кисл МЛ 1 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ( 71) Пермский государственный мс:." йицинский институтА,В, Лгзбимов Е.В, ПекщеваЕ. 11 екалев612.015 (0888)Методические рекомендации поенению комплексного микрохимического анализа крови. - Л., 1979, с. 11, (54) СПОСОБ ОП 1 ЕДЕЛЕНИЯ 1 ОСФОЛИПИЛОВ В КРОВИ ПРИ МАГГОВ 1 Х ОБГЛЕЛОВАН 11 ЯХ (57) Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к биохимическому определению содержания фосфолипидон в крови, и может быть использовано для контроля содержания фосфолипидон при массовых обследованиях. Целью изобретения является повышение точности и упрог 1 ение споИзобретение относится к меди именно к биохимическому опред ию содержания фосфолипидов в кр ри массовых обследованиях,Цель изобретения - поныг 1 ение т ости и упрощение способа.Способ осуществляют следуюг 1 им обаэом.Для анализа микропипеткой берутмл крови и равномерно распредеяют по Фильтру, ильтры высушивают а воздухе, деллют на фильтре неободимь 1 е пометки карандашом и помег 1 ают эксиклтор нлд твердым сушителем. робы н таком ниде могут храниться гсоба, Цель достигается тем, что берут 0,1 мл крови на фильтр, экстрагируют раствором едкого натра, минерализуют 577-ной хлорной кислотой, К минерализату добавляют 1 мл 17,-ной аскорбиновой кислоты и 0,3 мл молибденового реактива. После термостатирования молибденовую синь экстрагируют изобутиловым спиртом и затем Фотометрирунт на фотоэлектроколориметре. Содержание липидного фосфора определяется по калибровочной кривой, Концентрацию фосфолипидов рассчитывают по Формуле С=А К мг 7 где С - концентрация фосфолипидов в сыворотке крови, мг 7., А - концентрация фосфора в опытной пробе, мкг/мл; К - коэффициент пересчета концентрации липидного Фосфора, содержащегося в крови, в концентрацию фосфолипидов н сыворотке крови, мг 7,.1518801 реактива. Пробы помещают н термостатпри 45 С на 30 мин, Образовавшуюсямолибденовую синь экстрагируют 2 млизобутилового спирта тщательно переФ5мещан его с содержимым пробиркиивыдерживают н вытяжном шкафу 5 мин,Окраска изобутилового слоя стабильно сохраняется более 2 ч, Окрашенный слой фотометрируют на приборе1 ОФЭК йри длине волны 630+10 нм противдистиллированной води н ккнете шириной слоя 3 мм.Для определения количества липидного фосфора строится калибровочная15кривая. Из стандартного раствораКНРО,г готовят несколько разведенийв препелах от 1 О до 500 мкг/мл фосфора, Стандартный раствор готовят растворением 4, 39 г 1;11 НО высушенногодо постоянного вега, нлитре дистиллированной води. По О, мл разведений наносят на фильтр, высушивают навоздухе, предварительно обозначивграницы "пятна", В дальнейшем обрабатывают фильтр н соответствии с предложенным способом.После этого строят график зависимости оптической плотности раствораот содержания фосфора, нанесенногона фильтр (мкг/ыл),30Для определения концентрации фосфолипидон в сыворотке крови (мгам)используют формулу; 20 А 00 25704 А К мгф 35 1000 3,55( ) где С100251000- 3,55 П рного доприема содержание фосфолипидов в сыворотке крови, мгЕ;содержание фосфора в опытной пробе, определенное по калиб ровочному графику (мкг/мл);фактор пересчета на 100 мл;фактор пересчета содержания липидного фосфора н фосфолипи 45 фактор пересчета мкг в мг;коэффициент пересчета концентрации фосфолипидов вцельной крови в концентрацию фосфолипидов в сыворотке крови, определен экспериментально по соотношению фосфолипидов в цельной крони и в сыворотке, взятых на фильтры у людей и белых крыс.55 и м е р 1, У практически здоронора, 18 лет, через 12 ч после пищи берут кровь из пальца в количестве О, мл, равномерно наносятна фильтр, Высушенный на воздухе иизмельченный фильтр с кровью послеобрезания свободных краев заливают,на сутки 1,5 мл 0,3 н, раствора едкого патра, Затем 0,5 мл щелочногосмыва мигге 1 гализуют с 0,1 мл 557.-ного раствора хлорной кислоты при180 С, к минерализату добавляют1 мл 1 Б-ного раствора аскорбиновойкислоты и 0,3 мл молибденового реактива, После термостатирования 30 минпри 45 С образовавшуюся молибденовуюо,синь экстрагируют 2 мл изобутиловогоспирта, Окрашенный слой фотометрируют на приборе фЭК при красном светофильтре протигг дистиллированной водын кювете с шириной слоя 3 мм. Концентрацию липилного фосфора в кровиопределяют по графику зависимо"тиоптической плотности раствора от содержания фосфора, нанесенного нафильтр (мкг/мл), Для определения концентрации фосфолипидов в сывороткекрови пользуются формулой; С = Л0,704 (мг 7.), Концентрация фосфолипидов в крови донора С = 263 0704185,15 мгЕ. П р и м е р 2, У больного Н 48 лет, поступившего н лечебное учреждение с диагнозом, обострение хронического холецистита, берут кровь из пальца в количестве 0,1 мл, равномерно наносят на фильтр. Высушенный на воздухе и измельченный фильтр с кровью после обрезания свободных краев заливают на сутки 1,5 мл 0,3 н.раствора ИаОН, Затем 0,5 мл щелочного смыва минерализуют с 0,1 мл 607-ного раствора хлорной кислоты, к минерализату добавляют 1 мл 7.-ного раствора аскорбиновой кислоты и 0,3 мл молибденового реактива, После термостатированияо30 мин при 45 С образовавшуюся молибденоную синь экстрагируют 2 мл изобутилоного спирта, Окрашенный слой фотометрируют на приборе чЭК при красном светофильтре против дистиллированной воды в кювете с шириной слоя 3 мм, определяют концентрацию липидного фосфора в крови по графику зависимости оптической плотности раствора от содержания фосфора, нанесенного на фильтр (мкг/мл ). для определения концентрации Фосфолипидов всыворотке крови используют формулуС = А 0,704 (мгЕ),Способ определения фосфолипидовв крови при массовых обследованияхпутем консервации крови на бумажныхфильтрах, экстракции, минералиэацииСоставитель В. Митюшин Редактор Л, Пчолинская Техред Л.Олийнык Корректор 1, ЛончаковлЗаказ 6603/52 Тираж 789 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-иэдательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. ГагаринП 1 5 1518801 6Концентрация фосфолипидов в крови добавления восстановителя и молибдеС = 95"0,704 : 643,71 (мг 3), нового реактива, экстракции и фотоСпособ позволяет определять фосфо- метрирования экстракта, о т л и ч алипиды с среднеквадратичным отклоне- ю щ и й с я тем что с целью повы 5Ф 1нием 2,3 по сравнению с 8,6 в прото- шенин точности и упрощения способа,типе, минерализацию проводят в среде 55607-ной хлорной кислоты в качествеФ о р м у л а и з о б р е т е н и я восстановителя используют 1-27-ныйраствор аскорбиновой кислоты, а молибденовый реактив готовят иэ 0,57-ного водного раствора молибденовокислого аммония и 13 н, серной кислоты в соотношении 2:1,