Способ получения средства, ингибирующего агрегацию тромбоцитов

45 1 13926Изобретение относится к фармации, в частности к способу получения лекарственной субстанции простагландинов (ПГ), которая может быть использована для лечения и профилактики тромбозон и тромбоэмболических осложнений, а также в аппаратах искуственного кровообращения.Целью изобретения является иовы р шение выхода целевого продукта и .упрощение способа.Это достигается получением суб-. станции простагландинов, иигибирующей агрегацию тромбоцитов, из полиеновой кислоты путем инкубирования с ферментом и биостимулятором в буфере, добавления спирта, фильтрации, экстракции и хроматографии,П р и м е р 1. 50 мг аракицоновой 20 кислоты в виде натриевой соли эмульгируют и фосфатном буфере рН 8, добавляют 25 мг о-антигена 5.1 урЬпш" г 1 цш и, суиериатаит из 1 О г гдмогенезата пузырьковых желез барана (соот ношение арахидоповая кислота - гомогенезат - о-дитиген 1:500:0,5). Смесьо аэробно инкубируют 20 мин при 37 С. Для выделения целевого продукта в реакционную массу добавляют этиловый 30 спирт, аэкстрагируют этилацетатом, сухой остаток помещают на колонку с кремниевой кислотой и элюируют 1) бензолом 2) серным эФиром, 3) этилацетатом, 4) метанолом.35Фракцию В 3 иоворотно хроматографируют на колонке с кремниевой кислотой используя системы: Л) хлороформ - гексан - уксусная кислота 5:45:0,4; В) хлороформ - уксусная кислота 40 50:0,4; С) метанол - хлороформ - уксусная кислота 5:45;0,4, Фракцию С упарив:ют досуха и сухой остаток, растворенный в спирте, используют в дальнейшем для фармакологических испытаний, Полученную субстанцию растворяют в изотоническом растворе и проводят испытания на биологических объектах.Исследование полученной субстанции простагландинов на функциональную активность кровяных пластинок. Опыты проводят в условиях ин витро с использованием обогащенной тромбоци" . тами плазмы (ОТП), полученной из стабилизированной цитратом натрия 3,83 крови здоровых доноров. Агрегацию тромбоцитов регистрируют фото- метрическим методом Бориа 153 с по/ 13 2мощью ФЭК, соединенного с самописцем КСП, ПГ-субстанцию применяют в концентрации 50 мкг/мл, АДФ-фМ 0 7, эндотоксин 10 мкг/мл,После предварительной инкубациитромбоцитов с ПГ-субстанцией в течение 3-5 мин АДФ-индуцированная агрегация достоверно снижается; если степень АДФ-индуцированной агрегацииинтактных тромбоцитов принять за1003, то для тромбоцитов, преинкубированных с ПГ-субстанцией, онауменьшается почти вдвое, Эндотоксининдуцированная агрегация после инкубирования с ПГ-субстанцией полностьюподавляется,Другой биологический тест - влияние целевого продукта на сократительную способность гладкой мускулатурыматки крысы показал увеличение тонуса матки, усиление амплитуды и частоты сокращений. Тестирование осуществляли на изолированном роге матки крысы, сокращение регистрировалина кимографе.Преимуществами предложенного спо-соба является:Повышение выхода субстанциипростагландинов, ингибирующей агрегацию тромбоцитов, эа счет использования биостимулятора о-антигена5,сурЬ 1 шдг 1 аш; в прототипе выход целевого продукта 1-153, в предлагаемом способе 45-507; удешевлениепроцесса за счет снижения расходасырья биокаталиэатора; в прототипена 1-1,5 г полиеновой кислоты требуется 3-6 л белкового гомогената, впредлагаемом способе 500-750 г;упрощение способа: в прототипевремя инкубирования составляет 2-4 ч,,в предлагаемом способе 20 мин;.в прототипе в качестве прекурсора использована дефицитная эйкоэа,11,14 трееновая кислота, в предлагаемомспособе - доступная арахидоноваякислота.Формула изобретенияСпособ получения средства, ингибирующего агрегацию тромбоцитов путем азробного инкубирования полиненасыщеиной жирной кислоты с ферментом с последующей очисткой целевого продукта методом хроматографии, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода цепевого проСоставитель Н,ЛитвиненкоРедактор Л,Народная , Техред,М,Дидык Корректор М.ШароаиПодписное Заказ 15 ч 2 Тирал 545ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, %"35, Раушская наб.д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Уагород, ул. Проектная, 4Ф дукта и упрощения способа эа счетсокращения числа стадий, в качествеполиненасыщепной кислоты берут ара-,хидоновую кислоту, фермента - супер-, 5натант гомогената пузырьковых аелез 6734барана, в инкубационную смесь допол-нительно вносят о-антиген 5,СурЫщо"г 1 ое при соотноаении арахидоноваякислота: сунернатант: 0-антиген1 ф 500 е 0,5.