Питательная среда для выращивания бруцелл

) (И) 51)4 С 12 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕАВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ инсти ии и рофиике1980,АЩИВАицин и подГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(56) Методические указания полактике и лабораторной диагнобруцеллеза людей. М.: МЗ СССРс.53-54.(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫР(57) Изобретение относится кской микробиологии и может быпользовано для культивировани держания бруцелл в Ь-форме. Цель изобретения - длительное поддержание бруцелл в Ь-форме. Питательную среду готовят следующим образом. В 1 л подогретого бульона поочередно растворяют глутаминовую кислоту, двузамещенный фосфорно-кислый калий, лимоннуюкислоту, серно"кислый магний, железоаммониевый. цитрат, глицерин, ДоводятрН до 7,0-7,2, после этого добавляютагар, смесь кипятят до полного растворения агара. Перед посевом средурасплавляют.на водяной бане, остужают до 56 С. Затем в нее добавляютнормальную лошадиную сыворотку, инактивированную при 56 С 1 ч. Длительность поддержания бруцелл в Ь-форме60 пассажей (срок наблюдения).2 таИзобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в медицине и ветеринариидля культивирования и поддержанияЬ-форм бруцелл.Цель изобретения - длительное поддержание бруцелл в 1,-форме.Приготовление среды осуществляетсяследующим образом.В 1 л подогретого бульона поочередно растворяют глутаминовую кислоту, двузамещенный фосфорно-кислый калий, лимонную кислоту, серно-кислыймагний, железоаммониевый цитрат, глицерин. Раствор регулируют с помощьюи МаОН до рН 7,0-7,2, после этогодобавляют агар, смесь доводят до кипения до полного растворения агара.Готовую смесь разливают по 300,0 млво флаконы, закрывают ватно-марлевыми пробирками и стерилизуют при 0,6атмосферы 30 мин. Перед лосевом среду расплавляют на водяной бане, остужают до 56 С. Затем в нее добавляютнормальную лошадиную сыворотку,инактивированную при 56 С 1 ч. Содержимоефлакона разливают либо по пробиркам,либо по чашкам Петри (в зависимостиот характера работы).Для посева используют 2-суточнуюкультуру двух штаммов бруцелл в Ь -форме; 7/13 и бб. Проверку чувствительности проводят посевом на чашки1 етри суспензии обоих штаммов, содержащей 1000 м.кл. в 1 мл по 0,1 мл.Посевы инкубируют при 37 С. Учет результатов проводят через 3-4 сут под.счетом выросших колоний.Накопление биомассы осуществляютв пробирках. Посев одной стандартнойпетли (2 мм в диаметре) суспензии,содержащей 110 м. кл проводят накосяки питательной среды. Посевы инкубируют при 37 С, Учет результатовпроводят через 3 сут. Выросшую массусмывают физиологическим раствором иопределяют число микробных клеток.Проверку длительности поддержаниябруцелл в Ь-форме проводят путем регулярных пересевов каждые 2 сут штаммов 7/13 и 66 60 раз.Изобретение иллюстрируется следующими примерами.,П р и м е р 1, В 1 л подогретогомясопеитонного бульона поочереднорастворяют, г/л; глутаминовая кислота 3,7; двузамещенный фосфорно-кислый калий 0,5; лимонная кислота 1,25;Таблица 1 45 Количество наблюденийбруцелл Ь-формы Питательнаясреда штамм штамм66 50 7/13 Предлагаемая по примеру 60 60 серно-кислый магний 0,5; желеэоаммониевый цитрат 0,05; глицерин 23,6.Устанавливают рН 7,0-7,2, добавляют1,25 сухого питательного агара. Готовую смесь доводят до кипения, стерилизуют при 0,6 атм 30 мин. Передпосевом среду расплавляют на водянойбане, остужают до 56 С и добавляют 10 157. нормальной лошадиной сывороткиинактивированной при 56 С 1 ч.П р и м е р 2. В 1 подогретогомясопептонного бульона поочереднорастворяют, г/л: глутаминовая кисло та 5,0; двуэамещенный фосфорно-кислый калий 0,62; лимонная кислота 2,5;серно-кислый магний 0,62; глицерин3 1,5, сухой питательный агар 13,5;железоаммониевый цитрат 0,062. Гото вую смесь доводят до кипения. Стерилизуют при 0,6 атм 30 мин. Перед посевом среду расплавляют на водянойбане, остужают до 56 С и добавляют203 нормальной лошадиной сыворотки, 26 инактивированной при 56 С 1 ч.П р и м е р 3. В 1 л подогретогомясопептонного бульона поочереднорастворяют, г/л: глутаминовая кислота 6,2; двузамещенный фосфорно-кис лый калий 0,75; лимонная кислота 3,7;серно-кислый магний 0,75; железоаммониевый цитрат 0,075; глицерин 39,4.Устанавливают рН 7,0-7,2, добавляют20,6 сухого питательного агара. Готовую смесь доводят до кипения, стерилиэуют при 0,6 атм 30 мин. Передпосевом среду расплавляют на водянойбане, остужают до 56 С и добавляют207 нормальной лошадиной сыворотки.40 Результаты проверки сроков поддержания бруцелл в Ь-форме, чувствительности и накопления биомассы приведены в табл. 1 и 2.3 1370138родонжение табл.1 Питательнаясреда оличество наблюденийруцелл Ь-формы 5 тельных сред одинаковы. штамм щтамм ЬЬ7/1 Э 310 30 30 Известная 15 3, 7-6,2 кислотаДвузамещенныйфосфорно-кислый калийЛимонная кисЭффективность (наПитательнаясреда Чувствительность (число 0,5-0,75 выросших колоний) коплениебиомассы вмикробныхклетках) 1,25-3,7 0,5-0,75 7/13 66 7/13 66 0,05-0,0751,25-20,023,6-39,4 Предлагаемая 19+4,2 24+6,2 2 101 2 10 зЗ 5 150-200 1 л Составитель А.ЗавадскаяРедактор М.Недолуженко Техред М,Дидык Корректор И,Зрдейи Заказ 372/23 Тираж 520 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4 Из результатов, приведенных в табл. 1, видно, что сроки поддержания бруцелл в Е-форме без последующей реверсии в исходную форму при использовании предлагаемой среды в 2 раза выше по сравнению с известной (60 пассажей).Известная среда не обеспечивает поддержание Е-форм бруцелл.Т а блица 2 Известная 19+2,8 21+5,1 2 101 2 10" Данные, приведенные в табл. 2 показывают, что ростовые свойства предлагаемой и известной (аналог) питаФормула и з о б р е т е и и я Питательная среда для выращивания бруцелл, содержащая глутаминовую кислоту, двузамещенный фосфорно-кислый калий, лимонную кислоту, серно-кислый магний, железоаммониевый цитрат,агар, глицерин, симмулятор роста и мясопептоннь 1 й бульон, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью длительного поддержания бруцелл в 1.-форме, она в качестве стимулятора роста содержит нормальную лошадиную сыворотку при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:Глутаминовая лотаСерно-кислый магнийЖелезоаммониевый цитрат АгарГлицеринНормальная лошадиная сынороткаМясопептонный бульон