Способ получения ингибитора полимеризации фибрина

СОЮЗ ССВЕТСНИХ ОЮ 0 Х. РЕОЗУБЛИН 12 М В 10 О Ни т ГОСУДАРСГВЕННЬЙ КОМИТЕТ СССР ГЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ОПИСАНИЕ ИЭОБР Н АатОЕансмю Седете/ЬСТЕ(72) Е.А, Чирятьев и М.К, Умутбаева (7 1) Тюменский медицинский институт (53): 577. 15(088.8)(56) 1. Белицер В.А., Варецкая Т.В., Цинкаловская С.Н Позднякова Т.М , Толстых В,М. Выделение и исследо" ванне высокомолекулярного триптического фрагмента фибриногена. Укр. биохим. журнал, 1972, т. 44, с, 4.11-41.7.2. Авторское свидетельство СССР У 1044274, кл. А 61 3 10/00, 1981.(54) (5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА ПОХЙМЕРИЗАЦИИ ФИБРИНА из сыворотки крови, включающий отделениефибриногена, диализ сыворотки черецеллофан, выпаривание диализата иотделение ингибитора от низкомолекулярных соединений, о т л и ч а ющ и й с я тем, что с целью повышения чистоты целевого продукта иускорения процесса, диализ проводячерез целлофан с норами диаметром1,66-1,82 1, а отделение ингибитора от низкомолекулярных примесейпроводят гель-Фильтрацией на сефадексе ф -15 в присутствии 0,040,05 М аммонийно-ацетатного буферас рН 7,4-7,6, 122695Изобретение относится и медицине, а именно к способам выделения факторов, тормозящих процесс полимеризации (самосборки) биополимеров, и может быть использовано для получения ингибитора полимеризации в це" лях уточнения представлений о его свойствах., структуре и механизме участия в процессе полимеризации Фи брина:Известен способ получения ингибитора полимеризации Фибрина из плазмы крови, включающий выделение Фибриногена высаливанием, гидролнз Фибриногена трипсином, диализ, хроматографию на КМ-целлюлозе и лиоФилизацию Я .Недостатки способа - сложность, длительность процесса (350 ч) и получение целевого продукта, содержащего в качестве примеси низкомолекулярные соединения.Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ получения ингибитора полимеризации фибрина из сыворотки крови, включающий отделение Фибриногена, диализ сыворотки через целлоФан типа купрофан со средним диа- З 0 метром пор 2,04 А, выпаривание диализата и отделение ингибитора от низкомолекулярных соединений с помощью хроматографии на ДЭАЭ-сефадексе А 25 21, 35Недостатками известного способа являются длительность (80,5 ч) и присутствие примесей (аминокислот) в целевом продукте.Цель изобретения - повьвение чис тоты целевого продукта и ускорение процесса. Поставленная цель достигается тем,что при способе получения ингибитора полимериэации фибрина из сыворотки крови, включающем отделение Фибриногена, диализ сыворотки черезцеллофан, выпаривание диалиэата и отделение ингибитора от ниэкомолекулярных соединений, диализ проводятчерез целлофан с порами диаметром1,66-1,82 1, а отделение ингибитораот низкомолекулярных примесей проводят гель-Фнльтрацщей на сефадексе 55яв присутствии 0,04 - 0,05 Маммонийно-ацетатного буфера с рН 7,47,6,Сущность способа заключается в том, что замена целлофана ."Купрофан" со средним диаметром пор 2,05 А на целлофан ТС диаметром пор 1,66- 1,82 3. обеспечивает более эффективное отделение высокомолекулярных соединений от ниэкомолекулярных, что исключает необходимость дополнительной очистки на ДЭАЭ-сефадексе А 25, а гель-фильтрация на сефадексе позволяет получить чистый целевой продукт.П р и м е р 1. 10 мл стабилизированной цитратом натрия (3,8 Х, 9:1) плазмы крови нагревают на водяной бане (56 С) в течение 10 мин, затем полученную сыворотку освобождают от выпавшего фибриногена центрифугированием (1 250 я, 15 мин), Освобожденную от фибриногена жидкость (сыворотку) днализируют через целлофан Т(диаметр пор 1,66-1,82 А) против дистиллированной воды (1;50), сменяя воду через каждые 4 ч (всего 4 раза).Диализ через целлофан Тприводит к получению препарата, свобод-.ного от белковых высокомолекулярных примесей, тогда как при диализе через "Купрофан" не происходит полного отделения белков.Порции диализата концентрируют выпариванием на кипящей водяной бане по мере их получения,Полученный концентрированный диализат (2-3 мл) вносят в колонкус сефадексом .-15, уравновешенную 0,04 М аммонийно-ацетатным буфером при рН 7,4, Элюируют этим же буФером, собирая Фракции по 2 мл и в каждой иэ них определяют наличиеингибитора полимеризации. Порции элюата, содержащие ингибитор полимеризации, объединяют и удаляют летучий буфер выпариванием на выпарительных чашках (кипящая водяная баня) до полного удаления буферного раствора. Сухой остаток на чашках растворяют в необходимом количестве дистиллированной воды - целевой про" дукт, Выход продукта 997. П р и м е р 2. Проводят по при-. меру 1, но при гель-Фильтрации используют буферы с другими параметрами; 0,05 М с рН 7,6 (выход 96,0 Х), 0,05 М с рН 7,.4 (выход 97,4 Х) и 0,04 М с рН 7,6 (выход 97,0 Х).Составитель В. Муронец .Редактор И. Николайчук Техред Т.Маточка Корректор А, Тяско Заказ 8100/23 Тирай 521 ВНИИПИ Государственного.комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раувская наб., д. 4/5Подписное Филиал ППП "Патент", г Уагород, ул. Проектная, 4 3 1 122695 4Длительность. процесса получения рафии на бумаге в системе бутанол " ингибитора и его чистота не изменяют- ледяная уксусная кислота - вода ся при варьировании параметров бу- в соотношении 4:1:5 (двукратное фера в указанных пределах. пропускание) и 4;1: 1 (двукратноеВремя, .необходимое для полученияпропускание) не содерзит примесей ингибитора, составляет 25,5 ч.аминокислот.При многократном применении спосо- Таким образом, предлозенный ба выход ингибитора 97-1007 .от его . способ позволяет получать ингибитор содержания в исходном материале.полимеризации фибрина, свободный Получаемый. предлагаемым способом 10 от примесей, а также в 3,5 раза усцелевой продукт по,данным хроматог- корить процесс .