Способ получения липазы

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9 г аг 1 ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТ Е ГЕЛЬСТВУ ВТОРСНОМ ОЛУЧЕНИЯ ЛИПАЗЫвключающий ихние проростковстракцию белрощка, осаждениния, отлиуллае ог ый вноседчение во СССР76,Х.растаюастм е 6 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРг 10 делАм изОБРетений и ОчКРыти(71) Ташкентский ордена ТрудоКрасного Знамени государствеуниверситет им. В.И. Ленина(56). 1. Авторское свидетельстУ 560888, кл. С 12 И 9/20, 192. Рахимов М.М., Ьлдашев ПЛиполитические Ферменты в прощих семенах хлопчатника. -"Хиприродных соединений", 1970,с. 782,(54) (57) СПОСОБ Пиз семян хлопчатника,проращнвание, измельчеобработку ацетоном, экков из ацетонового полипазы сульФатом аммоч а ю щ и й с я тем, что, сувеличения каталитической актти и выхода липазы, семена пепроращиванием выдерживают в тодних суток в 0,001-0,033-номворе пироФосфата натрия, а запроращивавт в тех же условияхчение 4-6 сут.20 40 1 11226Изобретение относится к способамполучения ферментов из растительных источников и может найти применение в пищевой и фармакологическойпромышпенностях и медицине, 5Известен способ получения липазы из поджелудочнойжелезы методомаффинной хроматографии 1,Недостатком данного способа является необходимость использования 30дефицитного сырья.Наиболее близким к предлагаемомупо технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ получения липазы из семян 15хлопчатника, включающий. их. проращивание, измельчение проростков,обработку ацетоном,.экстракцию белков из ацетонового порошка и осаждение липазы сульфитом аммония 2 .Недостатками известного способаявляются низкий выход и невысокаякаталитическая активность целевогопродукта.Цель изобретения . - увеличение 25каталитической активности и выходалипазы,Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу получениялипазц из семян хлопчатника, включающему их проращивание, измельчение проростков, обработку ацетоном, экстракцню белков из ацетонового порошка и осаждение липазы сульФатом аммония, семена перед проращиванием выдерживают в течение суток35в 0,001-0,033-ном растворе пирофосфата натрия, а затем проращивают втех же условиях в течение 4-.6 сут.Способ осуществляют следующимобразом.Семена замачивают и проращиваютв 0,001-0,033-ном растворе пирофосфата натрия. Время замачивания опреде-. ляют но времени до начала прорастания семян (семена прорастают черезсутки), затем семена отделяют другот друга и помещают иа фильтровальную бумагу, смоченную пирофосфатомнатрия. Через 2 сут их опять помещают в сосуд с раствором пирофосфа 50та натрия и через каждые сутки берутпробы и измеряют активность.В табл. 1 представлена зависимость активности липазы от временивыдерживания семян в пирофосфате,94в табл. 2 - активность и выход липазы в зависимости от условий проращивания семян, в табл. 3 - активность очищенной липазы после сульфатного осаждения, в табл. 4 - влияниеразличных фосфатов на активностьлипазы.Данные табл 4 свидетельствуют,что использование вместо пирофосфата натрия других фосфатов не приводит к достижению максимального положительного эффекта.П р и м е р 1. 100 г семян хлопчатника сорта 108-ф замачивают в35 мл О,.ООЗХ-ного раствора пирофосфата натрия в течение 24 ч оставфоляют в термостате при 25-27 С. Черезсутки наклюнувшиеся семена раскладывают между листами фильтровальнойбумаги, увлажненной пирофосфатом натрия, и выдерживают еще 2 сут при 25 о27 С. Затем проростки помещают всосуд с О,ООЗХ-ным раствором пирофосфата натрия. Через 6 сут семенараэмельчают в среде холодного ацетона, промывают ацетоном и высушиваютна воздухе, Порцию приготовленноготаким способом порошка суспендируютв 0,.1 И фосфатном буферном растворев соотношений 1:10 при перемешивании в течение 1 ч при 0-5 С. Раствооримые белки отделяют центрифугированием в течение 15 мин,Осадок отбрасывают, а к получен- .ному супернатанту добавляют сульфатаммония до концентрации 55 Х от насыщения, Осадок липазы отделяютцентрифугированием, растворяют втом же буфере и высушивают, активность 325,76 ед/мг, выход 172,33.Полученная липаза белая, порош. -ковидная, без запаха. Состав: бе"лок 933, вода 77П р и м е р 2. Проводят по примеру 1, но берут .0,0013-ньй раствор пирофосфата и выдерживают семена 4 сут.При концентрациях ниже 0,0013 и выше О,ОЗХ стимулирующее действие пирофосфата незначительно.Использование предлагаемого способа позволяет увеличить выход липазы в 1,2-2,2 раза, а удельную каталитическую активность в 1,6- 3,4 раза.Показатели 0,001 0,003 0,01 0,03 Каталитическая активность,ед/мг 95,04 325, 76 156,72 147,68 256,0 357,6 7 16,8 384,0 384,0 332,0 Выход по отношению к ис-.ходной активности.172,3 93,3 80 92,3 129,0 Время нахождения семян в пирофосфате натрия концентрации О,ООЗХ,сут Каталитическая активность, ед/мг белка Выход по отношениюк исходной активности, 3 Общая активность, ед/мг Предлагаемый способ Предлагаемый способ1122694 Продолжение табл.4 Таблица 4 Триполифосфат натр0,0037 280,2 Полифосфат натО, 001 Х 241 Ортофосфат натрияО,ОООЗЖ з фосфатов рофосфат натриООЗЙ 386,2 акаэ 8100/23 Тираж 521 Подписи ВЯИИЙИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, 3-35,. Раушская наб д. 4/5