Способ получения фосфатидилхолина

(19 (И) А 35/30 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НО ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕН ССС ОЧНРЫТИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ ЕТЕЛЬСТВУ зятых в соетно присутствии(71) Пентральный ордена Ленинаинститут усовершенствования врачей(56) 1, Гуров В.А., Иноземцев Н.А.,Замиховский А.Б. Справочник по производству органопренаратов. Й., 1970,с. 137-139,(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ фОСФАТИДИЛхОлинА, включающий измельчение животного сырья, его экстракцию органическим растворителемр очистку полученного экстракта от примесей и выделениецелевого продукта, о т л и ч а ю.щ и й с я тем, что, с целью увеличе 1ния выхода целевого продукта и расширения сырьевой базы, в качестве сырьяиспользуют головной мозг тюленя, экстракцию сырья проводят неоднократноацетоном при соотношении сырья и ацетона (1:5)-(1 г 6) при температуре 2025 С, а очистку проводят обработкойупаренного экстракта смесью хлороформа, этанола и воды, взятых в соотношении 15:5 4, далее раствор повторноупаривают, образовавшийся осадок растворяют в смеси хлороформ -.этанол,взятых в соотношении (1:1)-(1 Ф 1,5)и выделение целевого продукта осуществляют нанесением полученного раствора на силикагель с последующим дополнительным нанесением на него смесихлороформ - этанол, вшенин (1:1)-(1:1,5) в8-10 водного аммиакаИзобретение относится к медицинской промышленности, в частности кспособам получения фосфолипидов изживотного сырья.Известен способ получения фосфатидилхолина, включающий иэмельчение жи-,вотного сырья, его экстракцию органическим растворителем, очистку полученного экстракта от примесей и выделение целевого продукта (1.Однако известный способ не позволяет получить целевой продукт с достаточно высоким выходом. Кроме того,в известном способе используется головной мозг сельскохозяйственных животных, представляющий собой пищевой 15продукт, и спинной мозг, которыйявляется субпродуктомкатегории.Пель изобретения - увеличение выхода целевого продукта и расширениесырьевой базы.20Поставленная цель достигается тем,что согласно способу получения Фосфатидилхолина, включающему иэмельчение животного сырья, его экстракциюорганическим растворителем, очисткуполученного экстракта от примесейи выделение целевого продукта, в качестве сырья используют головной мозгтюленя, экстракцию сырья проводятнеоднократно ацетоном при соотношении сырья и ацетона (1:5)-(1:6) при 30температуре 20-25 С, а очистку проводят обработкой упаренного экстрактасмесью хлороформа, этанола и воды,взятых в соотношении 15;5:4, далее раствор повторно упаривают, образо- .35вавшийся осадок растворяют в смеси хлороформ-этанол, взятых в соотноше нии (1:1) в (1:1,5) и вселение целевого продукта осуществляют нанесением полученного раствора на силикагель 40 с последующим дополнительным нанесением на него смеси хлороформ - этанол, взятых в соотношении (1:1)- в (1:1,5) в присутствии 8-10-ного водного аммиака, 45Способ осуществляют следующим образом.Замороженный натуральный мозг тюленя дефростируют, измельчают при помощи мясорубкии экстрагируют 6-8 раз 5-б-кратными объемами ацетона при 20-25 С. Экстракт упаривают досуха, остаток растворяют в 15-20- кратном объеме смеси хлороформ"ный этанол, взятых в соотношении 3:1, и раствор встряхивают с водой (20 от объема раствора). Нижнюю фазу образовавшейся двухфазной системы упаривают досуха, остаток растворяют в 2-3-кратном объеме смеси хлороформ-ный этанол, взятых в соотношении 60 (1;1) в (1:1,5) . Раствор наносят на силикагель (5-б-кратное количество по отношению к весу остатка), помещенный в цилиндрическую Фильтровальную воронку, силикагель промывают , 65 10-12 объемами той же смеси раствор= телей, а затем 5-7 объемами этой же Смеси, содержащей 8-10 концентрированного водного аммиака. После упаривания аммиачного Фильтрата и высушивания остатка в вакууме получают чистый фосфатидилхолин, Выход целевого продукта 1,4-1,6 от веса натурального мозга, содержание основного вещества в препарате не ниже 95, перекисное число не выше 0,02, полнота извлечения из мозга не менее 90.П р и м е р . Используют головной мозг гренладского тюленя-белька, находящегося на вольерном содержании на побережье Белого моря и эабиваемого в возрасте 1 мес. Мозг, извлеченный из забитых животных, немедоленно замораживают (-15 С), а через 10 сут 1 кг мозга дефростируют, измельчают в мясорубке, помещают в бутыль емкостью 10 л и заливают 5 л ацетона (квалификация ЧДА), Смесь перемешивают механической мешалкой 1 ч при 20 С, после чего фильтруют через стекляйный пористый Фильтр Р 2, твердый остаток экстрагируют еще б раз описанным способом.Все полученные фильтраты объединяют и упаривают досуха (здесь и далее растворители отгоняют на роо торном испарителе при 30 С и остаточном давлении 15 мм рт. ст.), добав ляя в качестве пеногасителя 10- н"бутанола. Остаток перемешивают 30 мин с 600 мл смеси хлороформ-ный этанол (3;1 по объему) . Смесь фильтруют, фильтрат встряхивают 5 мин с 120 мл воды и оставляют для полного разделения фаз. Нижнюю фазу отделяют и упаривают досуха. Остаток растворяют в 80 мл смеси хлороформ - 96-ный этанол (1:1 по объему), раствор вносят в цилиндрическую фильтровальную воронку диаметром 40 мм с пористым стеклянным фильтром Р 2, заполненную 50 г силикагеля КСК (Воскресенского химкомбината; размер частиц от 75 до 200 мкм) После слива через силикагель основной массы жидкости пропускают дополнительно 400 мл смеси хлороформ - .96-иый этанол (1:1 по .объему), а . затем силикагель промывают 250 мл этой же смеси, содержащей 20 мл концентрированного водного аммиака. Аммиачный фильтрат собирают отдельно и упаривают досуха. Остаток сушат 8 ч над безводным хлористым кальцием при 30 С и остаточном давлении 0,2 мм рт. ст получают 15,1 г (1,5 от веса натурального мозга) фос фатидилхолина. Содержание основного вещества в препарате 95,5, перекисное число 0,016. При тонкослойной хроматографии на силикагеле продукт мигрирует в виде одного пятна и не.Эаказ 4867/6 Тираж 688 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж 35 Раушская наб., д,4/5 филиал ППП фПатентфф, г.ужгород, ул.Проектная,4 отличается от заведомого образца ФосФатидилхолина, полученного из мозга быка.Таким образом в предлагаемом способе в качестве сырья используются нереализуемые отходы промысла., тогда 5 как в известном способе сырьем служат пищевые продукты - головной мозг сельскохозяйственных животных и(или) высокоценный субпродукт - спинной мозг тех же животных. Выход фосфати дилхолина при его получении известным способом не превышает 0,33 в расчете на натуральный мозг, при этом содержание целевого продукта в препарате менее 20, в качестве примесей присутствуют токсичные ве"щества, - продукты деструкции липидов и перекиси (перекисное число более 0,7), в предлагаемом способе выход увеличен почти в 5 раз и составляет 1,4-1,6 при содержании целевого продукта в препарате более 95, продукты деструкции липидов отсутствуют, перекисное число ниже 0,02.