Способ определения активности ферментов в сыворотке крови

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ щ 943577 Союз СфввтсиихСециапнстмчвсиихРвсйубинк(22) За я влено 22,09.80 (21) 2984654/28 - 13с присоединением заявки РЙ(51)М. Кл. 0 О М 33/48 3 Ъсудэретеенный квинтет СССР ав делам хзобретеннй и эткрытнй(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ 1Изобретение относится к медивне, а имен. но к ферментной диагностике заболеваний.Известен способ определения активности ферментов в сыворотке крови путем разведения пробы, инкубировання ее с ферментным субстратом, внесения индикатора с последую.5 щим фотометрическим измерением полученного окрашенного комплекса 1).Однако известный способ не обеспечивает высокой точности.1 ОЦель изобретения - повышение точности способа.Цель достигается тем, что при осуществлении способа определения активности ферментов в сыворотке крови путем разведения пробы, инкубирования ее с ферментным субстратом, внесения индикатора с последующим фотомет. рическим измерением полученного окрашенного комплекса отличительной особенностью яв. ляется то, что пробу разводят 2-5 М раствором то хлористого натрия или 0,2-0,5%-ным раствором желатины.П р и м е р 1. Получив очень высокие экстинкции при определении активности трзнсаминаз в сыворотке крови, повторяют опреде.ление с разбавленной в несколько раэ сывороткой. Сыворотку разводят в 10 раэ 0,2%- .ным раствором желатина и дальнейшую рабоцту проводят так же как и при полной пробепо методу йетевп 8. и агапсв 3,В пробирке; контрольную, со стандартным раствором, и опытную наливают по 0,5 мл субстратного раствора, содержащего для оп. ределения алании-аминотрансферазы 1 мкМ а.кетоглутаровой кислоты и 50 мкМ .-аланина, для определения аспартат аминотрансфераэы 1 мкМ а-катоглутаровой кислоты и 50 мкМ Ь-аспарагиновой кислоты (рН 7,4) и нагревают 15 мин при 37 С. После прогревания в контрольную пробу приливают 0,1 мл дистиллированной воды, в пробирку со стандартом 0,1 мл раствора стандарта (0,20 мкМ пиру. вата натрия ври определении алании аминотрансферазы или 0,20 мкМ шавелево уксус. ной кислоты при определении аспартат-амино. трансферазы), в опытные пробирки добавляют по О, мл разведенной 1:10 исследуе.943577 Составитель С, МалютинаРедактор М, Парфенова Техред А,Ач Корректор А. Гриценко Заказ 5097/49 Тираж 887 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий . 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4(5 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3мой сыворотки. Пробы инкубируют при 37 С 60 мин.После инкубации во все пробы прибавля.ют по 0,5 мл раствора динитрофенилгидра.зина (19,8 мг 2,4 - динитрофенилгидразинав 100 мл 1 н, НС 1), выдерживают 15 мин, при комнатной температуре и добав. ляют 5,0 0,4 н. раствора йаОН, Через 20 мин колориметрируют против контроля в 1,0 см кюветах при сине-зеленом светофильтре (Б),При расчете активности трансаминаз по лученную активность умножают на степень разведения сыворотки и получают линейную зависимость активности фермента от разведенияП р и м е р 2, При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сывороткой, Сыворотку разводят в 10 - 20 раз 0,4%-ным раствором желатина. Определение активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1.П р и м е р3, При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сыво. роткой. Сыворотку разводят в 10 - 20 раз 0,5%-ным раствором желатина. Определение . активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1.П р и м е р 4 При получении высокой активности трансаминаэ в сыворотке крови по. вторяют определение с разбавленной сывороткой. Сыворотку разводят в 10-20 раз 2 М раствором хлористого натрия. Определение активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1.П р и м е р 5, При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сыво роткой. Сыворотку разводят в 10 - 20 раз 4 М 4раствором хлористого натрия. Определениеактивности и ее расчет проводят, как описанов примере 1,Й р и м е р 6, При получении высокойактивности трансаминаз в сыворотке кровиповторяют определение с разбавленной сыво.роткой, Сыворотку разводят в 10 - 20 раз5 М раствором хлористого натрия. Определениеактивности и ее расчет проводят, как описано16примере 1.Предлагаемый способ позволяет исключитьепропорциональное возрастание удельной,активности ферментов при разведении сыворотки, т. е, делает возможным определить15 истинную активность ферментов, когда необходимо разведение сыворотки из-за высокойактивности ферментов, наблюдающейся примногих патологических процессах и превышаю.щей нормальные значения в 10 - 50 и болеераз. Способ не требует дополнительных количеств крови изменений условий постановкиопытов и дополнительных материальных затрат,Формула изобретения Способ определения активности ферментовв сыворотке крови путем разведения пробы, инкубирования ее с ферментным субстратом, ЗОвнесения индикатора с последующим фото- метрическим измерением полученного окрашенного комплекса, о т л и ч а ю ш,и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, пробу разводят 2 - 5 М раствором хлористого натрия или 0,2 - 0,5%-ным раствором желатины, Э 5 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1, Асатиани. В. С. Ферментные методы анализа. М., "Медицина", 1969, с. 574-608.