Способ получения иммобилизованной лакказы

мени и ордена Октябрьской Революции государственный университет им. М, В. ЛомоносоваЗаявнтел 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ ЛАККАЗЫ биохи Изобретение относится частности к способам и учения иммо емента. Цель изобретения - повыш кт обилизо ости и термбстабильноанной лакказы,илирбцнеи на конкаковалентным свя- активированной тига ставленная цель ем,т быСА),ние лактак фароза и конка- обладают электуказанные препабыть использоваохимических проМльф цесс на билизованнои лакказы.Лакказа - фермент, относящийся к классу оксидаз, катализирующий процесс переноса электронов с органических субстратов на молекулярный кислород . С использованием ферментов этого класса, в частности лакказы, связывают возможность создания кислородного1 О электрода биохимического топливного Известны способы полученияованной лакказы адсоавалин-А-сефарозе иыванием с сефарозой,ромцианом 11.Однакопоскольку сеавалин-А-сефароза неонной проводимостью,аты лакказы не могутля катализа электр Известен способ получения иммибилизованной лакказы адсорбцией на элек тронопроводящем носителе - саже2.Однако в процессе иммобилизации фермент теряет 80 Х исходной активности, а полученный этим способом препарат иммобилизованной лакказы отличается невысокой термостабильностью (константа скорости его инактивации втрое больше по сравнению с нативным ферментом) . что электронопроводящий носите сажу предварительно обрабатыва чьим сывороточным альбумином 1 после чего осуществляют свяэыв азы с носителем в присутствии азываемого, реагента ВудвордаФормула изобретения Составитель О. СкородумоваРедактор И. Николайчук Техред А, Бабинец Корректор ГРешетник Тираж 531 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Заказ 10124/37 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул . Проектная, 4 3 8831При этом предпочтительно указанныйреагент Вудворда использовать в 5-8 кратном избытке 1 по весу 1 по отношениюк лакказе, ( Наилучшие результаты903"ого сохранения первоначальной активности получают при 5-кратном избыткереагента Вудворда по отношению к лакказе. При увеличении этого соотношенияактивность полученного препарата уменьшается и при 20-кратном избытке реак Отива Вудворда составляет 59 от первоначальной активности),Термостабильность полученной иммобилизованной лакказы в интервале температуры 20-65 С не отличается от стаобильности нативного Фермента, Активность иммобилизованной лакказы можетдостигать 907 от исходной.П р и м е р. 4 мгпредварительноизмельченной сажи МПсуспендируютв 0,5 мл дистиллированной воды, содержащей 3 мг БСА, Суспензию перемешивают в течение часа, а затем центрифугируют в течение 10 мин при 6000 ц.Супернатант отделяют и осадок промывают 4-5 раз дистиллированной водой,К полученной саже с адсорбированным БСА добавляют 0,5 мл раствора лак 1 О казы в воде, содержащей 8,7- 10 моль (0,05 мг) фермента, затем 0,4 мг ре- ЗО агента Вудворда. Полученную су 8 пензию выдерживают в течение часа, после чего осадок отделяют центрифугированием и промывают 0,1 М фосфатным буфером с рН 6,0, Полученный препарат со - храняет 907 исходной активности.Таким образом, получают электронопроводящий стабильный препарат иммобилизованной лакказы, обладающий высокой активностью, Лакказа, иммобилизованная на саже предлагаемым способом, может быть использована для из 72 фготовления электродов биохимических топливных элементов, Создание электродов на основе окислительно-восстановительных Ферментов, иммобилизованных на электронопроводящем носителе, создает реальные предпосылки для разработки биохимических источников така высокой мощности, Кроме того, лакказа, иммобилизованная на саже, может быть использована для создания чувствительных сенсоров для количественного определения органических соединений, являющихся субстратами лакказы. 1. Способ получения иммобилизованной лакказы путем связывания ферментас электронопроводящим носителем - сажей, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения активности итермостабильности целевого продукта,сажу предварительно обрабатывают бычьим сывороточным альбумином, а связывание с Ферментом осуществляют вприсутствии М-этил-Фенил-изоксазо/лий-сульфоната,2, Способ по п, 1, о т л и ч аю щ и й с я тем, что М-этил-Фенил-изоксазолий-сульфонат используютв 5-8-кратном избытке по весу) поотношению к лакказе,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. ЯСап 1 еу С. ГгосЬег, К, Е. Ег 1 Й"зоп Свойства гликопротеина лакказы,иммобилизованной двумя методами. АсаСею. 5 сапд.,1 В 29, 1975, р, 691-694.2. Авторское свидетельство СССРпо заявке Р 2791581/26,кл. С 25 В 11/12, 1979 (прототип)д