Устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое

(72) Авторы изобретен в И. Соколов, Н,нцез и аучно-исследовательскии и микробиологии Министехозяйства СССР юзный логи с(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ВЫРАЩИ И ВИРУСОВ В МОНОСЛ АНИЯ КЛ шой расход питательной среды и ограниченная аэрация культуры.Цель изобретения - улучшение условий аэрации, сокращение расхода питательной среды и упрощение конструкции ы специалстовой п тва с обрацель достигается тем, .что в.устдля выращивания клеток и вируонослое, содержащем герметичесытый сосуд с газовводом для ания и плоские элементы для. ультуры, распОложенные горизонодин над другим, элементы для ыполнены в виде кювет, имекзцих нейное сопряжение стенок с днигазоввод выполнен в виде колустановленного вертикально и ного отверстиями для подвода каждой кювете.олинайное сопряжение, стенокднищем обеспечивает попадание тв в ак ро а с тал рос ивол а ек снабж за Квет ьной среды в нижестоящиеподаче в верхнюю кюветуй нижестоящих кювет путе пи а ты приполнени стных устр онструкции ожнос ть Изобретение относится к ветеринарии и медицине и может быть использовано при производстве вакцин, сывороток и других биологических активных препаратовИзвести ьные устройсбольшой ро оверхностью, зованной различными конструктивными элементами 1.Известно устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое, содержащее герметически закрытый сосуд с газовводом для аэрирования и плоские элементы для роста культуры, расположенные горизонтально один над другим. Клетки в этом устройстве растут на5 пластинках, погруженных в питательную среду, которой заполняют сосуд. Для циркуляции питательной среды и насыщения ее кислородом применяют магнитную20 мешалку, механический насос или эр.- лифт 2.Недостатками изве ойств являются сл к боль )1ститщВвреринарноо3 8831релива через края стенок вышестоящихкювет,На чертеже изображено устройстводля выращивания клеток и вирусов в монослое, общий вид,Устройство включает сосуд 1, который герметично закрывается крышкой 2,В сосуде 1 установлены кюветы 3, выполненные из титана или термостойкогостекла. Кюветы фиксируются в пазахдержателей 4, закрепленных, в своюочередь, в пластинах 5 и 6. В зазорахмежду кюветами размещен подающий воздух газоввод 7 с отводами 8, расположенными на уровне каждой из кювет.На крышке 2 закреплены пробоотборноеустройство 9, трубопроводы 10 и 11 соответственно для заполнения и выгрузки клеток и вируссодержащего материала, входной 12 и выходной 13 бактери 20альные фильтры.Все детали устройства могут бытьлегко разобраны, вымыты и после сборки простерилизованы паром в автоклаве.Загрузка устройства осуществляетсяпри соблюдении асептических условий,Устройство при этом находится в вертикальном положении. Бутыль с клеточной суспензией посевной концентрациисоединяют с пробоотборным устройством309 и с помощью сжатого воздуха производят заполнение кювет 3. При этомжидкость поступает через трубопровод10трубопровод 11 перекрыт ) вначалена верхнюю кювету, а после ее заполнения перетекает через края ее боко- Мвых стенок и далее по выпуклому сопряжению с днищем в нижестоящие кюветы.Заполненное устройство устанавливается в термальном помещении с температурой 37 С. При этой температуре 40клетки на дне кювет формируют монослой, В процессе культивирования клеток осуществляется аэрирование и стабилизация рН среды за счет подачи надкюветами 3 воздуха с 57 углекислого ФЗгаза. Газовая смесь подается черезбактериальный фильтр 12 и распределяется над культурой клеток в кюветах,После образования монослоя через 2436 ч ) все устройство ставят в гори- юо 71 4зонтальное положение и удаляют ростовую питательную среду с помощью сжа-,того воздуха через трубопровод 11( трубопровод 10 перекрыт),Операция заполнения кювет 3 питательной средой, содержащей посевнойвирусный материал, осуществляется таким же образом, как и при загрузкесуспензии клеток. Далее устройстворасполагают в термальном помещении стемпературой 37 С, где и происходитнакопление вирусов при тех же у .ловияхаэрирования, что и для размноженияклеток. Сбор вируссодержащего материала производится из устройства, находящегося в горизонтальном положении,через трубопровод 11 с помощью сжатого воздуха.Использование для выращивания клеток и вирусов устройства с разделенными газовой фазой кюветами и аэратором с отводами выгодно отличает предлагаемое устройство от известных, таккак новые элементы устройства позволяют уменьшить расход питательной сре;ды и обеспечивают насыщение питательной среды кислородом без специальныхустройств (мешалки, насос, эрлифт). Применение предлагаемого устройстваповышает экономичность и увеличиваетпроизводительность труда при выпускепротивовирусных препаратов,П р и м е р. Культуру клеток КМСвыращивали в матрасах ( контроль ) и впредлагаемом устройстве использовалисреду 0,1 Ж ГЛА на растворе Эрла с 07сыворотки свиней. Клетки выращивалив течение 48 ч и заражали вирусом.Опыты проводились при следующихтехнологических условиях; посевнаяконцентрация клеток 3,0-4,0 х 10 кл/мпмножественность заражения 0,010,03 ГАЕ 50(кл; рН среды 7,3-7,5,температура инкубирования 37+0,5 фС1 устройство и контрольные матрасы устанавливали в общем термостатируемомпомещении).Оценка накопления вируса проводилась через 4 сут. Результаты проведенных опытов представлены в т блице,883171 Коли- чество виИсходный Накоплетитр ви- ние вируса лог. руса лог.ГАЕ 50/ /.Пл 9 Объем щадь среды, моно- мл русного мамлГАЕ 50 мл слоя,2 см(Иена, Шотт) 200 100 7,5-7,6 7,0-7,5 100 530 560 7,5-7,6 7,0-7,5 560 Как видно из таблицы, иснольэование 20 устройства для выращивания клеток и вирусов позволяет получать вирусный материал такой же активности, как и в контроле.При использовании предлагаемого .И устройства для выращивания клеток и вирусов в монослое сокращается время на загрузку и выгрузку клеточного и вирусного материала, уменьшается брак из-за бактериального загрязнения куль- ЭО туры клеток, увеличивается производительность в 5 и более раэ, в зависимости от объема заливаемой питательной среды и исходного вирусного материала. Формула изобретения Устройство для выращивания клетоки вирусов в монослое, содержащее герСистема для выращиваниявирусаЪ Предлагаемое устройстводля выращивания клетоки вирусов в монослое метически закрытый сосуд с гаэовводомдля аэрирования и ппо"кие элементыдля роста культуры, расположенныегоризонтально один над другим, о т -л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью улучшения условий аэрации, сокращения расхода питательной среды и упрощения конструкции, элементы для роста выполнены в виде кювет, имеющихкриволинейное сопряжение стенок с днищем, а газоввод выполнен в виде коллектора, установленного вертикально иснабженного отверстиями для подводагаза к каждой кювете.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент ФРГ В 2.341.180,кл. С 2 К 1/10, 1976.2. Патент США Ф 3407120,кл. 195-104, 1968 (прототип),883)71 Ре каз 10124 Тираж 531 ПодписноеИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий35, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 13 ПП "Патент", г. Ужгород, ул, Проект" Составитель Л.,СероИ. Николайчук Техред 3. Фанта Корректор Г,Решетник