Субстрат щелочной фосфатазы

ОЛ ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскннСоциалистическиеРеспублик и 853536 1) Дополнительное к авт. св М.(22) Заявлено 20.08. 2838120 2 единением заявки Государстоениый комите СССР) Заяви итут биохимии АН Литовской С 4)СУБСТРАТ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТА и измерении количества продуктов,образующихся в результате этой реакции. днак известные субстраты позеделять активность щелочаэы только в прозрачныхспектрофотометрическим применимы в непрозрачных еделение активности щелоч" аэы электрохимическим пуьэованием известных субстэможно, так как последние ри гидролизе продукты, коо окисляются при наложении валяют о Д 3 ой ос а средах т. епутем)и не10средах. Опрной фосфаттем с исполратов неваобразуют п1торые легкнапряжения и или йй тве субствности щесубстратыи щелочнортофост фенолтения является повыьности,субстратов, пределения активности азы, т.е. обеспечениееделения активностиазы в мутных и окраше Целью изобре шение универсал меняемых для опр щелочной фосфат возможности опр щелочной фосфат ных средах.елочнойсведенииезультатеубстрата) Изобретение относится к применнию моноэфиров ортофосфата общейформулы где Х - ОН в арто-положенив пара-положении, в качесрата для определения актилочной фосфатазы.В литературе описаныдля определения активностфосфатазы, например моноофат нитрофенола, дифосфафталеина, фенилфосфат 11Определение активностифасфатазы заключается в пферментативной реакциивчего происходит гидролиэ 6 О й 31/14С 12 й 9/16С 07 Г 9/09С 07 С 39/02С 12 0 /42где Х-ОН в орто-положении или ЙНв параположении, в качествесубстрата для опрделения активностищелочной фосфатазы.Указанные соединения получаютизвестными способами 2,Я,Используемый в качестве субстрата моноортофосфат.п-аминофенола применяли ранее для синтеза в органической химии, а именно для синтеза Йарилтиокарбамоил -и-аминофеноловыхэфиров2.Моноортофосфат пирокатехина использовали ранее в качестве соединения, обладающего антиокислительнымисвойствами 31,П р и м е р.Для определения активности щелочной фосфатазы беруттермостатированный буферный раствор,в конкретном случае 0,1 М раствортрис-НС 1, содержащий 0,01 моль Мф 04 30(рН 8,0,температура 25 оС)и субстрат 2 ммоль моноортофосфата пирокатехина или 1 ммоль моноортофосфатааминофенола. В раствор погружаютэлектрохимический преобразователь,35состоящий из платинового анода,электрода сравнения и вспомогательного электрода, и вводят пробу определяемой щелочной фосфатазы. Потенциаланода в случае моноортофосфата пирока 40техина устанавливают 0,3 В, а в случаемоноортофосфата и-аминофенола - 0,18 3.Регистрируют увеличение тока во времени, скорость увеличения тока прямо45пропорциональна гидролазной активности. Измерение занимает 1-3 мин. Формула изобретения Применение моноэфира ортофосфатаобщей формулы О иО-Р-ОН ) х где Х в . ОН в орто-положении или 1 ЧМв пара-положении, в качестве субстрата для определения активной щелочной фосфатазы.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Вегцаеуег Н.О.,"МейЬодз о 1Гпгува 1 с Рпа 1 узз"Асадещс Ргезз,й-у 1.опдоп, 1965, 783,2, Галстухова Н, Б., Панкина З.А.,Берзина И. М, и Щукина М.Н. Синтезпроизводных тиомочевины- Журнал органической химии,1974, 1 О, 0), 804-807.3. НапрЬгз К Т,бегаа 5. "МесЬаизщз о 1 АпйохИапо Асоп: Ргодосйзот йпе йеасоп Ьейиееп Нудгореох 1 дезапд о-РЬепу 1 епе РЬозрЬ 1 ез", 1. СЬещ5 ос. Регси 11, йо, 6,.1973, 831-835..Результаты измерения активностищелочной фосфатазы при использованиив качестве субстрата 2 ммоль моноорто фосфата пирокатехина следующие: ВНИИПИ Заказ 5643/20 Тираж 907 Подписное филиал ППП "Патент", г Ужгород,ул.Проектная,4 3 853536 4Указанная цель достигается приме- Скорость изменения Количество щенением моноэфира ортофосфата общей тока преобразова- лочной фосфата-. формулы теля, нА/мин тазы 10 ед/мл3,66 2,6 5,0 5,2И 6,71 7,8ХО-р -ОН 8,0 0,4ОН 11,6 13,013,0 15,6 12,66 18,2 19,33 23,4Результаты измерения активности щелочной фосфатаэы при использовании в качестве субстр,"та 1 ммоль моноортофосфата и -аминофенола следующие:Скорость изменения Количество щетока преобразовате- лочной осфателя, нА/мин тазы, 1 О ед,мл5 2,612,3 7,8 20,7 13,0 29,3 33,4