Способ количественного определениягликогена b крови

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Сова Сфветскик Сфциалистических Ресвублик(53)М. Кл.з С 01 М 33/66 1/28-13 с присоединением заявки Йо(23) Приоритет Государствеявмй квинтет СССР яо аеааи изобретений в откРытяята опубликования описания 2304. 81(72) Автор изобретения П.М. Бабаскин ий ордена Ленина государст кий институт им. Н.М. Пиро Москов медици 11) Заявител 54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕН ГЛИКОГЕНА В КРОВИ м Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии для изучения углеводного обмена.Известен способ количественного определения гликогена в крови путем ее кипячения в присутствии КОН с последующим охлаждением смеси, обработкой ее этиловым спиртом, после чего промывают полученный осадок гликогена этиловым спиртом, растворяют его в горячей воде, обрабатывают Н 504 и фотоколориметрируют 11Недостаток известного способа низкая точность количественного определения гликогена в крови.Цель изобретения - повышение точности способа.Указанная .цель достигается те что в способе количественного определения гликогена в крови путем ее кипячении в присутствии КОН с последующим охлаждением смеси, обработкой ее этиловым спиртом, после чего промывают полученный осадок гликогена этиловым спиртом,.растворяют его в горячей воде, обрабатывают Н 50 и фотоколориметрируют, этиловый спирт добавляют к охлажденной смеси в присутствии МаС, при этом кровь, ,щелочь, этиловый спирт и хлористый натрий берут в соотношении 1:5;7:30 40;5,7, а полученную послецентрифугирования надосадочную жидкость обрабатывают раствором МаС и5 этиловым спиртом, извлекают из неегликоген, обрабатывают его концентрированной Н 504 и реактивом Антрона,Способ осуществляют следующимобразом.Кровь кипятят с 40 раствором КОН,затем смесь охлаждают и добавляютв нее этиловый спирт в присутствииМаС, при етом кровь, щелочь, эти ловый спирт и хлористый натрий берут в соотношении 1:5; 7:30,40:5,7.Полученную после центрифугированиянадосадочную жидкость обрабатываютраствором МаС и этиловым спиртом,20 извлекают нз нее гликоген, обрабатывают его концентрированной Н 50 иреактивом Антрона.П р и м е р. В центрифужнойпробирке 0,1 мл капиллярной крови5 смешивают с 0,5 мл 40 раствора КОН.Смесь ставят на 45 мин в кипящуюводяную баню, потом охлаждают докомнатной температуры, прибавляют,0,5 мл насыщенного раствора МаС и0,3 мл этилового спирта, энергично824052 Формула изобретения Составитель Ю. Алмазов Техред Н.Майорош Корректор М. Коста Редактор В. Иванова Тираж 907 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Заказ 2099/64 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проехтная,4 смешивают встрахиванием 20 раз.Взятые количества исходных реагентов соответствуют соотношению 1:5 и 7:30. Смесь помещают на 30 мин в холодильник, потом центрифугируют 30 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жид;кость сливают в другую центрифужную пробирку и повторно извлекают из нее гликоген, Для этого к надо- садку прибавляют 0,5 мл насыщенногораствора МаС, 1 мл этилового спирта , и встряхивают 20 раз. Потом ставят на 10 мин в холодильник, центрифугируют 30 мин, надосадочную жидкостЬ выбрасывают, а осадки дважды промывают 2-мя мл этилового спирта. В полученных осадках гликогена проводят количественный анализ. Для этого каждый осадок растворяют в горячей воде 0,5 мл, добавляют по 1 мл концентри- . рованной Н 50 и по 2 мл реактива Антрона, который готовят следующим образом: смешивают 34 мл воды и 66 мл концентрированной Н 50 раствор разогревается в горячий раствор прибавляют 1 г тиомочевины. Полученную смесь помещают на 10 мин в кипящую водяную баню и после охлаждения до комнатной температуры содержимое пробирок колориметрируют на фотоэлектрокалориметре с красным светофильтром в кюветах с рабочей шириной 5 мм. В качестве компенсационной жидкости берут контроль, который готовят так же, как опытные пробы, только вместо раствора гликогена берут 0,5 мл воды. Таким образом, в исследуемой крови определен гликоген в количестве 777 мг/л. Из них 666 мг/л в осадке обработанной крови и 111 мг/л в насадочной жидкости.Предлагамый способ повышает точность количественного определениягликогена в крови в 5-7 раз, что подтверждено на 560 пробах крови клинически здоровых людей (365) ибольных различными психозами (195),при этом в 12-14 раз сокращается время на одно исследование.30 Способ количественного определе 15ния гликогена в крови путем ее кипячения в присутствии КОН с последующим охлаждением смеси, обработкойее этиловым спиртом, после чего промывают полученный осадок гликогенаэтиловым спиртом, растворяют его в20 горячей воде, обрабатывают Н 50 ифотоколориметрируют, о т и .и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, этиловый спиртдобавляют к охлажденной смеси в прид 5 сутствии МаС 1, при этом кровь, щелочь,этиловый спирт и хлористый натрий берут в соотношении 1,"5, 7:30 40:5,7,а полученную после центрифугированиянадосадочную жидкость обрабатываютраствором йаС и этиловым спиртом,извлекают из нее гликоген, обрабатывают его концентрированной Н 50, иреактивом Антрона.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Справочник. Биохимические методы исследования в клинике. Подред. Покровского. 1969, с. 230-231.