Способ получения фрагментов рибонуклеиновых кислот

й низ .ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 310778 (21) 2650987/23-04 (51) М. КЛ. С 07 Н 21/02//А 61 К 29/00 с присоединением заявки Мо(23) Приоритет Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(53) УДК 547 9633,07(088,8) Дата опубликования описания 260380(72) Авторы изобретения О,Б, Степанова, В,Г, Метелев, В.Д, Смирнов и Н,П, Родионова Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им, М.В, Ломоносова(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАГМЕНТОВ РИБОНУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТЗО Изобретение относится к усовершенствованному способу полученияфрагментов рибонуклеиновых кислот(РНК), соединений, которые могут применяться в биохимических исследованиях и генетической инженерии,Известен способ получения фрагментов дезоксирибонуклеиновых кислот(ДНК), заключающийся в инкубации5 НК с комплементарным к заданномуучастку ДНК олигодеэоксирибонуклеотидом, связанным с агентом, модифицирующим ДНК, с последующим выделением фрагментов изменением рН-сре-.ды 1 .ф Однако данный метод поэволя 15ет получать фрагменты только ДНК,поскольку РНК устойчива к такому изменению рН,Известен также способ полученияфрагментов РНК, в котором РНК гидролизуют рибонуклеаэами, специфическими к определенным основаниям (2,Недостатком известного способа является то, что оснований, составляющих цепь РНК, всего четыре (не считая миноров) и получение фрагментов заданной структуры способ не обеспечивает,Белью изобретения является обеспечение строго направленного расщепления РНК,Это достигается тем, что РНК инкубирует с олигодеэоксирибонуклеотидом комплементарным к заданному участку РНК с последующим расщеплениемРНК в области образовавшегося комплекса обработкой рибонуклеазой Н,Предлагаемый способ полученияфрагментов РНК заключается в инкубации РНК с олигодеэоксирибонуклеотидами комплементарными к заданномуучастку РНК, в последующем расщеплении РНК в области образовавшегосякомплекса обработкой рибонуклеазойН(РНКаэа Н),П р и м е р 130.мкг РНК бактериофага М 3 2 (3659 нуклеотидныхзвеньев) инкубируют с 1,5 мкг октадезоксирибонуклеотида деэоксицитидилил-(3 -5) -тимидилил-(3 -5 ) -цитидилил-(3 -5) -аденилил-(3 -5) --тимидилил-(3 -5 ) -тимидина комплементарного участку РНК между 1745и 1752 нуклеотидными звеньями в0,05 мл буфера (рН 7,9) в течение30 мин, при 4 С, Затем добавляютаде,Ф;)4в Ф Вд1 фЕф 1 е"ффф722921 Формула изобретения за Составитель Л, Никулина Редактор Н, Данилович Техред О.АндрейкоКорректор М, ВигулаЗаказ 307/14 Тираж 495 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5ФИЛИАЛ ППП Патентф, г, Ужгород, ул, Проектная, 4 0,3 единицы РНКазы Н и выдерживают5 ч при той же температуре,Реакцию останавливают добавлениемдодецилсульфата натрия до концентрации 0,5 и смесь прогревают в течение 4 мин при 70 С, Продукты реакции, исследованные методом электрофореза в 3-ном полиакриламидномгеле, отличаются по подвижности отисходной РНК, но образуют одну зонуиз-за близости молекулярных весовполучающихся фрагментов (0,610 и0,58 10 ),П р и м е р 2, 40 мкг РНК бактериофага М 2 инкубируют с 2 мкг додекадезоксирибонуклеотида деэокситимидилил-(3 -5 ф) -тимидилил-(3 -5) --тимидилил-(3 -5) -цитидилил-(Зф -5)-тимидилил-(3 -5 ) -тимидилил-(3 -5 )-тимидилил-(3 -5) -тимидина комплементарного участку РНК между 1679 и1690 нуклеотидными звеньями в0,05 мл буфера (рН 7 9) в течение30 мин при 4 аС, Затем проводят обработку О,З единицы РНКаэы Н в течение 5 ч при 4 С, Реакцию останавливают добавлением этилендиаминтетраацетата до концентрации 0,1 и смесьпрогревают 4 мин при 70 С. Продукты реакции, исследованные методом электрофореза в 3-ном полиакриламидномгеле, образуют две дискретные зоны(О 63 х 10 мол, вес. и 0,55 хйО мол, вес,Способ получения фрагментов рибонуклеиновых кислот (РНК), о т л и ч а ю щ и.й с я тем, что, с целью обеспечения строго направленного расщепления РНК, РНК инкубируют с олигодезоксирибонуклеотидом комплементарным к заданному участку РНК с последующим расщеплением РНК в области образовавшегося комплекса обработкой рибонуклеазой Н,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Кнорре Д.Г, Аффинная модификация белков, нуклеиновых кислот и ихкомплексов, Мол, биол, П, 1304-1310,1977,2; чк гегв. й. Сопгегав, Г.Посгпсн, С.Наедетап, Э.,)вегепСап 1, Хйеггедоег 1, Чч. мв Зоо, Е,Моегйапь, 4.йаеугпаекегв, А.Чапдеп ВегоЬе,й Чо 9 сЧаег 1 М,ЗьеЬаег 1 "Сопрбе 1 е пчсСео 1 Ме Бес,оепсе о 1 Ьас 1 ег 1 орьоре мэ 2 йИА" йа 1 юе,260, р. 500, .1976 (прототип),