Способ выделения неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей

. Цпв е;,но11 О П И С А М-М Е ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик697522 К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 6 ) Дополнительное к авт. свидно 03.05 78 (21)2613650/23-13 22) Зая 07 6 7/03 12 0 13/10 присоединением заявки М -Гесудерстеенньй хоиетет СССР оо делаы хзооретеней н откротой. М, Аваева, А. Т, Мевх, Е. А. Плаксина и В, А. Склянкина Московский ордена Ленина и ордена Трудовою Красного Знамени государственный университет имени М, В. Ломоносова71) Заявитель(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НЕОРГАНИЧЕСКОЙ ПИРОФОСФАТАЗЫ ИЗ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ Изобретение относится к ферментно цленности, а именно к способу выд органической пирофосфатазы из пека рожжей. ЮЦелью изобретеии является повышение вы. прдания хода фермента, аделения,Цель достигае ныи после плаз 5 ческой преду- леток уоле, экстракцпания сульфатом вьшеленияеоганиекарских дрожжей,молиз дрожжевых кцию водой, фракциония, обессоливаниеом 11.составляет 12%, ак матографируют на полисахарндном носителе, содержащем в качестве боковой цепи алкиламинИспользование такого носителя основано на спцифическом свойстве неорганической пирофос.фатазы из пекарских дрожжей - ее гидрофобности. рова 0 ос ия удельнои активности полу его подвергают дополнительфильтрацией на ультрагеле А 1. 140 г пекарских дрожжей Для повышенченного ферментаной очистке гельс А 44.Примерподвергают плазпри 40-45 С, прляют на ночь при центрифугируприбавляют суль0,5, центрифугир Наиболее близким ся способ выделения тазы из пекарских др плазмолиз дрожжев ых к предлагаемому явеорганической пирожжей, предусматривклеток, фракциония, обессоливаие и ляет 5осфаающии оваро. ммон е сульфатото графиро21.Способ посфатазу с ние на полисахаридном нО озволяе лучить неорганическую726 -790 Е, выход ферактивность вляет 24%,мента Известен. способ пирофосфатазы из и сматривающий плаз в толуоле, экстрак ние сульфатом аммо ционирование спиртВыход фермента также упрощение процесса вы. тся тем, что препарат, получен. олиза дрожжевых клеток в то белков водой, фракциониро. аммония и обессоливания, хромолизу в толуоле в течение 4 ч ибавляют 100 мл воды и остав и 4 С. Водный слой отделяют ют, К надосадочной жидкости фат аммония до насыщения уют, осадок отбрасьвают, кСоставитель Т . Мелентьева Техред Л, Алферова Редактор В, Трубченко Корректор М. Пожо Заказ 6871/8 Тираж 53 ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4(5Попписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4,+33 697522 надосадпчиой жидкости прибавляют сульфат аммония до насыщения 0,7. Полученный после центрифугирования осадок обессоливают диализом против 0,025 М трисового буфера, рН 7,2. Обессоленный белок в 1000 мл трисового буфе ра рН 7,2 наносят на колонку с 60 мл гексаметилендиаминсефарозы (диаметр колонки 1,5 см), Добавление к элюирующему буферу хлористого натрия приводит к десорбции фермента с колонки. Десорбированную неорганическую пиро. фосфатазу.подвергают гельфильтрации на колон. ке с ультрагелем А с А 44.Удельная активность полученного препарата 710 Е, выход - 50%.П р и м е р 2. Способ осуществляют сог. 15 ласно примеру 1, используя в качестве полисахаридного носителя ультрагеля А с А 44. Хроматографирование проводят в колонке диаметром 1 см с 8 мл ультрагеля в 1 мл 0,025 М трисового буфера, рН 7,2.зоУдельная активность полученного препарата 774 А, выход - 70 Го.Данный способ позволяет получить неорганическую пирофосфатазу из пекарских дрожжей25 с высоким выходом и упростить процесс выделения фермента за счет уменьшения количествастадий. Формула изобретения Способ выделения неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей, предусматривающий плазмолиз дрожжевых клеток, фракционирование сульфатом аммония, обессоливаниеи хроматографирование на полисахаридном носителе, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения выхода фермента и упрощения процесса, хроматографирование проводят на полисахаридном носителе с алкиламином в качествебоковой цепи с последующей гельфильтрациейна ультрагеле А с А 44.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Кцптг М., АгсЬч о 1 ВосЬепзатгу апдВорЬузе, 1961, 92, 270,2. Соореггпап В.В., СЬп ч., Вгцсспзапп В.ч.,ВцпсЕ,11 Месеппа,.8., 8 осЬепззтгу, 1973, 12,1965.