Способ получения маннана

580214 Союз Советских Социалистических Республик61) Допол 1 птсльп)ос авт. свпд-ву О 13 0 22) Заявлсо 12.04.76 (21) 2345297)28-1 аявки Ъ рпсосдинснпех Государствеииви комитет Совета Мииистров СССР 23) 11 рпор 53) УДК 577.15(088.8);Ф 43) Опублпк )вО,5,11.77. В)олгс по делам изсбрете открытии 11и От) л4 О1115 О 11 с 115 О) Д 2) Лвторь. П, Елинов, Г. Л. Витовская, В. У. За),боронок, А. И. Валаханович, . Л. Витковская, Р. В. 3 арецкая, Н. В. Логинов и В. В. Папкович зобрстсн 15 ацевтический институт нинградский химико-фа 1) Заьвптсл 1) СНОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ МАННЛНЛ асти микробио 1 осаждении чистого м относится к об. мышленности. особ получения ей рода К 11 ог 1 О 1 о срцснтрифугиро сти, осаждения аствора этаноло ва Фелинга с ра о комплекса 1 н объемами мета 1 естве продуцот дрожжи та полисаЮос(о 1 огц 1 а ана с по- путем феря культуана-сырца 1 стки с поснием меди осаждс-1 маь ц 1 а вань внои п фермента ционноеду след ющего состава,2,51,00,50,5гО 0,1 ман1, очзруц,НС Недостатком способа является невысокая активность маннана.С целью повышения активности препарата по предлагаемому способу дрожжи рода К 1 то с 1 О 1 огц 1 а подвергают ферментации с использованием известной питательной среды, после чсго культуральную жидкость отделяют от клеток супсрцснтрифугированием. Супернант подщслачивают для изменения рН с 1,9 - 2,0 до )1 б,5 - 7,0 и подвергают вакуум-выпариванию, сокращая объем его в 8 - 10 раз. Упаренный раствор полисахарида подкисляют до рН 4,8 - 5,0 и осаждают равным объемом этанола. Г 1 олучепный осадок маннана-сырца подвсрга 1 от химической очистке, заключао:цсйся в растворении последнего, получении медо-маы 1.1 О- вого комплекса с помощью рсакНва Фелинга, деиоп из 1)цьи мед 11 О-:ч анна нОВОГО комплекса катиопитами КУ-20 или КУ-8, последующей ЗО 4 0,20,450с р 11 5,3 - 5,4,ВвГлюкоза, гна 1 л водопроводн 01 Водь Изобретение логической проИзвестен сп мощью дроюк ментации, суп ральной жидко из нативного р мощью рсакти но-маннановог ния четырьмя корректировке рН 1нана этанолом.Пример. Б ка)харида пспользуьштамм ВКМУ 341.В качестве посссред используют ср(МН 4) гЬОКНгРО 4МЯО 4ДаС 1СаС 1 г 2 НВитамины, мг:Вг Среду разливают в колбы Эрлснмейера емкостью 750 мл по 300 мл и стерилизуют в автоклавс прп 0,5 атм в течение 30 мпн. Растворвитаминов, стер)л 1 зованный ультрафиолетовыми лучами, вносят непосредственно передзасевом культуры.Для выращивания посевного материала производят зассв среды двух-трехсуточной культурой дрожжей, Выращенной на сусло-агарпри 25=С, в виде 2 млрд. взвеси по бактсриальному стандарту по 7,5 мл в колбу.580214 Формула изобретения Составитель Н. Бондаренко Техред Н. Рыбкина Корректоры: О. Данишева и 3. ТарасоваРедактор В. Блохина Подписное Заказ 2597/4 Изд. Ма 955 Тираж 563 НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапуново, 2 11 олучснный ш)окулум вноси В 11)срмснг 11- ционные колбы в количестве 10 мл и выращиВа 1 от прп тсх жс температуре и 1)ежи мс псЕ)с. мсшивапия.Голучснпу)о в результате фсрмсптацпи культуральную жидкость отделяют от клеток суперцснтрифугированием при 28 - 29 тыс. об/мин, Нативный раствор, имеющий рН 1,95, подщелачивают до рН 6,7 добавлением 6 н. раствора ХаОН (около 5 мл 6 н. раствора ХаОН на 1 л нативного раствора) и концентрируют в 8 - 10 раз по объему выпариванием под вакуумом при 38 - 40 С. Упаренный раствор подкисляют соляной кислотой до рН 4,8 - 5,0 и добавляют 1 л этилового спирта к 1 л раствора полисахарида. Получают осадок маннана-сырца, который отделяют от водно- спиртового маточника, промывают этиловым спиртом и используют для получения чистого маннана.Маннан-сырец содержит не менее 70% угле- водного компонента, в котором не менее 60/о приходится на маннан и примерно 10/о на углсводные примеси (глюкоза и галактоза).Очищенный маннан из маннана-сырца получают следующим образом. 2 г маннана-сырца растворяют в 100 мл дистиллированной воды, раствор центрифугируют при 6000 - 7000 об/мин. К центрифугату добавляют 12,5 мл реактива Фелинга. Выпавший осадок медно-маннанового комплекса отделяют от маточника на воронке Бюхнера, промывают 2%- ным водным раствором КОН, а затем этанолом. Промытый осадок переносят в стакан, добавляют 80 мл дистиллированной воды, 6,25 г катионита КУ-8 (Н+) и перемешивают в течение 30 мин. Деионизированный раствор маннана отфильтровывают от катионита КУ-8 (Сц) на воронке Бюхнера.Последний промывают 80 мл дистиллированной воды, промывные воды присоединяют к основному раствору, производят корректировку р 11, доводя сго значсцпс до 1,8 о,О раствором МаОЕ-Е, и осаждают двумя объемами этилового спирта, Осадок чистого маннана промывают этиловым спиртом и сушат в вакууме. Выход 5 оч)пцс нного маппана составляет около 55 о/о поотпоп)спи)о к мацпапу-сырцу.Выход маннана составляет 1,1 г/л.чистого препарата:содсрканис маннозы не менее 98%;зольность не более 0,4 о/о,удельнос вращение а+го = - 83 (0,25 о/оНгО)температура разложения 260 Ссодержание меди не более 0,003 о/о15рН водных растворов 6,5 - 7,0.Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет получить активный препарат со стабильными параметрами, пригодный для использования в качестве биологически активного вещества. Способ получения маннана путем культиви рования дрожжей рода К 1)одо 1 огц 1 а, отделе.ния культуральной жидкости от биомассы, осаждения маннана-сырца из нативного раствора с последующим выделением и очисткой целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, 30 что, с целью повышения активности препарата, нативный раствор подщелачивают до рН 6,5 - 7,0, упаривают в вакууме в 8 - 10 раз, затем осаждают маннан-сырец равным объемом этапола при рН 4,8 - 5,0 и осадок обрабатыва ют реактивом Фелинга, полученный осадокдеионизируют катионитом и осаждают этанолом при рН 4,8 - 5,0. Источники информации,40 принятые во внимание при экспертизе1. Сапайап,Еоцгпа 1 СЕ)ептЫгу, 1965, 43,950 в 9.